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1、健脾汤对实验性大鼠胃溃疡的治疗作用及其抗强的松再损伤的实验研究【摘要】 目的：从溃疡愈合质量的角度探讨健脾汤抗消化性溃疡复发的机制。方法：采用乙酸胃溃疡大鼠模型，按完全随机设计法将大鼠分为 3 组，分别为健脾汤组16 只，西咪替丁组16 只，生理盐水组12 只，于造模第 6 天开始灌胃，按人与大鼠体表面积折算大鼠用药量，每日 1 次，共 16 d，从各组随机取一半大鼠断头处死，检测胃溃疡大鼠胃再生黏膜厚度、黏膜肌层缺损宽度、表面黏液厚度和胃组织 EGF、NO 含量。其余大鼠自由饮食，于第 31 天开始灌服强的松 5 mgkg-1d-1，共 20 d，于第 51 天将各组剩余大鼠全部处死，并进行
2、与第 22 天相同方法、相同指标的检测。结果：治疗后，A 组和 B 组再生黏膜厚度、黏液厚度均大于 C 组，黏膜肌层缺损宽度均小于 C 组，A 组黏液厚度高于 B 组，A 组 EGF 较 B、C 两组含量高。灌服强的松后，A、B 两组再生黏膜厚度、黏液厚度均高于 C 组，黏膜肌层缺损宽度均小于 C 组，且 A 组黏液厚度高于 B 组，黏膜肌层缺损宽度小于 B 组， NO 含量 A、B 两组均高于 C 组，且 A 组高于 B 组是内科的常见病、多发病。提高消化性溃疡的远期疗效，防止其复发仍是目前该病治疗中的难题之一。陈少芳1认为消化性溃疡的发生是因胃黏膜的损害因素与防御因素之间失衡，当对胃黏膜的
3、损害因素大于防御因素时，溃疡就可能形成。王氏研究消化性溃疡病常用方剂之一四君子汤之所以具有预防精神压力型胃溃疡发生之效果，其原因除了能抑制胃酸的分泌外，与脑内神经化学传递物含量的变化有密切的关联性。林寿宁研究健脾益胃类发挥抗溃疡作用可能通过降低血清胃泌素和提高血清表皮生长因子，而减少黏膜攻击因子和增强胃黏膜保护而发挥抗溃疡作用。笔者在临床实践中发现，健脾汤对脾气虚弱、瘀血阻滞型消化性溃疡病患者，有较好的远期疗效，能防治其复发。本研究采用大鼠乙酸胃溃疡模型，观察健脾汤治疗胃溃疡的愈合质量，并观察该方抗强的松的再损伤能力，以探讨该方抗消化性溃疡复发的机理。 1 材料与方法 材料动物 SD 大鼠，4
4、4 只，雌雄各半，体重 180230 g，华中科技大学同济医学院实验动物学部提供。药物与试剂 健脾汤，由炙黄芪 20 g，党参 15 g，白术 10 g，丹参 15 g，赤芍 10 g，陈皮 6 g，炙甘草 5 g，七味药共 81 g 组成，药材由湖北中医学院门诊部药房提供，经生药学鉴定，常规水煎 2 次，浓缩至 100%，使药汁中含生药 1 g/mL，置 500 mL 玻璃瓶内，低温保存，备用；西咪替丁片，由江西制药有限责任公司生产，批号 070808-1，用时加蒸馏水配成 % 的混悬液；强的松片，浙江医药股份有限公司生产，批号：070581。表皮生长因子试剂盒；一氧化氮试剂盒。仪器 显微镜
5、测微尺；721 分光光度计；FJ2003/50P放射免疫计数器。方法造模与分组 参考鄢顺琴等的方法。大鼠造模前 24 h，禁食不禁水。用 20% 乌拉坦 4 mL/kg 体重腹腔注射麻醉。腹部备皮、消毒，于剑突下腹中线打开腹腔，手术切口长约 2 cm，暴露出胃，在胃前壁浆膜面窦体交界处同一部位用浸有乙酸、直径为 5 mm 的圆形滤纸接触 2 次，每次 30 s，然后还纳胃体，逐层缝合切口。涂上一层稀释的火棉胶，保护切口。造模大鼠清醒后，按完全随机设计法将大鼠分为 3 组，分别为健胃汤组16 只，西咪替丁组16 只，生理盐水组12 只。给药方法 于造模第 6 天开始灌胃，按人与大鼠体表面积折算大
6、鼠用药量，A 组以健脾汤 mLkg-1d-1，B 组以西咪替丁水溶液mLkg-1d-1，C 组以生理盐水mLkg-1d-1，每日 1 次，共 16 d，所有药物溶液及生理盐水 pH 值均为 。于造模第 22 天，从各组随机取一半大鼠断头处死，检测再生黏膜厚度、黏膜肌层缺损宽度、表面黏液厚度、NO 含量、EGF 含量。其余大鼠自由饮食。于第 31 天开始灌服强的松 5 mLkg-1d-1，共 20 d，于第 51 天将各组剩余大鼠全部处死，并进行与第 22 天相同方法、相同指标的检测。动物处理 大鼠禁食不禁水 24 h 后，断头处死，剖腹取胃，以溃疡瘢痕平行于胃长轴方向的最长径为中心取材，8%
7、甲醛固定，石蜡包埋，以瘢痕的最长径为中心连续切片，间隔 5 m，分别作 HE 染色和 AB/ PAS 染色，取溃疡瘢痕周围组织一块，放入生理盐水中冲洗，吸干，电子天平称重，不锈钢手术刀切碎，放入匀浆器中匀浆，用生理盐水制成 10% 的组织匀浆液后，将匀浆液移入玻璃试管中，2 500 r/min 离心 20 min，取上清液，-20冰箱内保存，待测 NO、EGF 的含量。观察项目 再生黏膜厚度、黏膜肌层缺损宽度：参照杨雪松法1。在 HE 染色的连续切片上，用低倍镜找到溃疡愈合部位，在高倍镜下观察测量，用显微镜测微尺分别测 5 个视野长度，计算其平均值。表面黏液厚度：参照鄢顺琴1法。在 HE 染色
8、的切片上找到溃疡愈合部位，在对应的AB/PAS 染色的切片上观察，用测微尺分别测 5 个视野的表面黏液厚度，计算其平均值。NO 含量测定：采用硝酸还原酶法，EGF 含量测定：采用放射免疫法，均严格按试剂盒说明书操作。数据处理：利用 FJ2003/50P放射免疫记数器，编写程序，直接给出参数、标准曲线及样品浓度。统计学处理 数据以 xs 表示，组间差异性比较采用两样本均数比较的 t 检验。 2 结果各组胃溃疡的愈合质量 治疗后，A 组和 B 组再生黏膜厚度、黏液厚度均大于 C 组，黏膜肌层缺损宽度均小于C 组。A 组黏膜厚度、黏膜肌层缺损宽度与 B 组比较，无显着性差异，但 A 组黏液厚度高于
9、B 组，见表 1。A 组 EGF 较 B、C 两组含量高；NO 含量 A、B 两组较 C 组高，见表 2。 各组抗强的松的再损伤的情况 灌服强的松后，A、B 两组再生黏膜厚度、黏液厚度均高于 C 组，黏膜肌层缺损宽度均小于 C 组，且 A 组黏液厚度高于 B 组，黏膜肌层缺损宽度小于 B 组。EGF 含量各组均无显着性差异；NO 含量 A、B 两组均高于 C 组，且 A 组高于 B 组，见表 3，对瘢痕周围组织 EGF、NO 含量的影响，见表 4。 3 讨论 目前认为消化性溃疡是一种多病因疾病。各种与发病有关的因素如胃酸、胃蛋白酶、感染、遗传、体质、环境、饮食、生活习惯、神经精神因素等，通过不
10、同途径或机制，导致上述侵袭作用增强和防护机制减弱，均可促发溃疡发生。胃酸胃蛋白酶的侵袭作用增强和 / 或胃黏膜防护机制的削弱是本病的根本环节。任何影响这两者平衡关系的因素，都可能是本病发病及复发的原因。 中医药治疗 PU 从整体出发，具有益气生肌，保护胃黏膜，促进机体自我修复的治本功效，同时对幽门螺杆菌有根除作用，取得了很好的效果。目前中医药抗 PU 的临床研究，显示中医药治疗能改善患者症状及缓解病程进展，近期疗效与西医接近或优于单纯西药，远期疗效更好。根据临床所见，相当一部分消化性溃疡患者其病机为脾气虚弱、无力推动血行而致瘀血阻滞、胃肠黏膜失养而成溃疡，而且这类患者病情易反复发作。同时近年来
11、的研究表明脾胃虚弱、气滞血瘀是影响溃疡愈合质量的主要病理机制。吴怀皋用健脾益胃汤治疗消化性溃疡疗效明显优于对照组。 根据上述情况，临床上，我们以益气健脾、活血化瘀为治法组成健脾汤，用于治疗慢性反复发作性该病患者，发现该方具有较好的抗溃疡及抗复发作用。该方中首要药物之一黄芪能显着增强机体特异性和非特异性免疫功能，黄芪中的主要成分之一黄芪精对多种实验性动物胃溃疡有抑制作用，对 95% 乙醇所致小鼠胃黏膜损伤具有显着的抑制作用，可减少损伤面积，降低损伤指数，可协同西米替丁对胃黏膜的保护作用。王丽娟等研究发现黄芪对大鼠实验性胃溃疡有抑制作用。该方中另一重要药物党参其水煎醇沉液对应激型、幽门结扎型等所致
12、实验性胃溃疡均有预防和治疗作用。党参抗溃疡作用机制包括抑制胃酸分泌，降低胃液酸度，促进胃黏液的分泌，增强胃黏液-碳酸氢盐屏障；增加对胃黏膜有保护作用的内源性前列腺素含量10。白术的丙酮提取物灌胃给药，对盐酸-乙醇所致大鼠胃黏膜损伤有明显的抑制作用。经十二指肠给药对幽门结扎大鼠胃液分泌量有抑制作用，降低胃液酸度，减少胃酸及胃蛋白酶的排出量10。丹参注射液能扩张胃黏膜血管，降低胃酸度，抑制胃蛋白酶活性，促进溃疡愈合。能清除氧自由基，抑制脂质过氧化反应和提高组织抗氧化能力10。赤芍亦具有和丹参相似的作用。陈皮中的甲基橙皮苷皮下注射能明显抑制实验性胃溃疡，而且能抑制病理性胃液分泌增多10。甘草能抑制胃
13、液、胃酸分泌；直接吸着胃酸而降低胃液酸度；增加胃黏膜细胞的己糖胺成分，保护胃黏膜；促进消化道上皮细胞再生；刺激胃黏膜上皮细胞合成和释放有黏膜保护作用的内源性前列腺素10。本实验选用以上药物组成的健脾汤，目的在于进一步探讨该方的作用机制，为临床应用提供依据。 本实验结果显示，健脾汤组能增加再生黏膜厚度，使黏膜肌层缺损宽度减小，健脾汤组及西咪替丁组表面黏液厚度均高于生理盐水组，且健脾汤组又高于西咪替丁组，说明健脾汤能提高再生黏膜组织学成熟度、提高黏膜修复能力，能促进黏液分泌，其作用优于西咪替丁。本实验结果还显示，健脾汤组溃疡瘢痕周围组织 EGF 含量高于西咪替丁组及生理盐水组，提示健脾汤提高了内源
14、性 EGF 的含量，其作用优于西咪替丁。肾上腺糖皮质激素类：如强的松、地塞米松、可的松等，是诱发消化性溃疡的因素，这类药物有促进胃酸和胃蛋白酶分泌的作用。高酸性胃炎、胃和十二指肠溃疡病患者使用上述药物后，会诱发加重病情，严重者可出现胃出血和穿孔。实验表明，健脾汤能增强胃黏膜抗强的松再损伤能力，又能提高溃疡愈合质量，提高再生黏膜的功能成熟度。 综上所述，健脾汤提高溃疡愈合质量的可能机制为：提高了黏膜再生修复能力，提高了再生黏膜组织学成熟度；促进黏液分泌，增强胃黏膜屏障功能；提高了瘢痕周围组织内源性 EGF 及 NO 含量。这些作用可能也是健脾汤控制消化性溃疡复发的机理之一。本实验同时也提示我们，
15、针对消化性溃疡患者其病机大部为脾气虚弱、无力推动血行而致瘀血阻滞、胃肠黏膜失养而成溃疡，健脾汤组方所体现出的中医益气活血治法在提高溃疡愈合质量、抗消化性溃疡复发中具有重要作用。 【参考文献】 1 陈少芳, 彭孝纬. 消化性溃疡发病的分子机制及中医药治疗探讨J. 福建中医学院学报, 2006, 17(1):12-14 2 王建增, 贾风新, 李桂. 中医药治疗消化性溃疡的机制研究进展J. 河北中医杂志, 2007, 9(1):12-153 林寿宁, 韦维. 安胃汤对胃溃疡大鼠胃黏膜EGF及EGFR表达的影响J. 辽宁中医杂志, 2007, (10):16-184 鄢顺琴. 胃痛灵保护胃黏膜作用及
16、对胃溃疡愈合质量的影响J. 中国中西医结合杂志, 2006, 15(10):6125 李艳荣. 中医药抗消化性溃疡复发研究进展J. 辽宁中医杂志, 2006, 8(10):34-366 许惠芳. 胃黏膜保护的新概念与溃疡病的治疗进展J. 临床荟萃, 2007, 9(5):676-6787 黎运呈. 中医药治疗胃溃疡的实验研究进展J. 湖北民族学院学报(医学版), 2006, 3:12-1448 吴怀皋, 王国江. 健脾益胃汤治疗消化性溃疡96例临床观察J. 安徽卫生职业技术学院学报, 2006, 5(1):23-259 王丽娟, 郭凯, 董容哲. 黄芪对大鼠实验性胃溃疡的影响J. 时珍国医国药, 2007, 6(12):16-1910候家玉. 中药药理学M.
