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1、基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过 ，赋予生物以 ，创造出 。基因工程是在 上进行设计和施工的，又叫做 。（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀” （1）来源：主要是从 中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种 的核苷酸序列，并且使每一条链中 部位的两个核苷酸之间的 断开，因此具有 性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式： 和 。2.“分子缝合针” (1)两种DNA连接酶（EcoliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：相同点：都缝合 键。区别：EcoliDNA连接酶来源于 ，只能将双链DNA片段互补的 之间的
2、磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合 ，但连接平末端的之间的效率较 。(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将 加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接 的末端，形成磷酸二酯键。3.“分子运输车” （1）载体具备的条件： 。 。 。（2）最常用的载体是 ,它是一种裸露的、结构简单的、独立于 ，并具有 的双链 DNA分子。（3）其它载体： (二)基因工程的基本操作程序第一步： 1.目的基因是指： 。2.原核基因采取 获得，真核基因是 。人工合成目的基因的常用方法有 _和_ 。3.PCR技术扩增目的基因（1）原理： （2）过程：第一步：加热至9095 ；第二
3、步：冷却到5560， ；第三步：加热至7075， 。第二步： 1.目的：使目的基因在受体细胞中 ，并且可以 ，使目的基因能够 。2.组成： （1）启动子：是一段有特殊结构的 ，位于基因的 ，是 识别和结合的部位，能驱动基因 ，最终获得所需的 。（2）终止子：也是一段有特殊结构的 ，位于基因的 。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中 ，从而将 筛选出来。常用的标记基因是 。第三步： 1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 ，其次还有 和 等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 。此方法
4、的受体细胞多是 。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 ，最常用的原核细胞是 ，其转化方法是：先用 处理细胞，使其成为 ，再将 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是 。第四步： 1.首先要检测 ，方法是采用 。2.其次还要检测 ，方法是采用 。3.最后检测 ，方法是从转基因生物中提取 ，用相应的 进行 。4.有时还需进行 的鉴定。如 。（三）基因工程的应用1.植物基因工程： 。2.动物基因工程： 。3.基因治疗： 。（四）蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以 作为基
5、础，通过 ，对现有蛋白质进行 ，或制造一种 ，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产 的蛋白质）翻译转录答案专题1 基因工程基因工程的概念体外DNA重组和转基因技术 新的遗传特性 更符合人们需要的新的生物类型和生物产品因 DNA分子水平 DNA重组技术（一）基因工程的基本工具1.限制性核酸内切酶（限制酶）（1）原核生物（2）特定 特定 磷酸二酯键 专一（3）黏性末端 平末端。2. DNA连接酶(1)磷酸二酯T4噬菌体 黏性末端 两种末端 低。(2)单个核苷酸 两个DNA片段3.载体（1）能在受体细胞中复制并稳定保存。 具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。具有标记基因
6、，供重组DNA的鉴定和选择。（2）质粒 细菌染色体之外 自我复制能力 环状（3） 噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1. 编码蛋白质的结构基因 。2.直接分离 人工合成 反转录法_ 化学合成法_。3.（1）DNA双链复制 （2）DNA解链； 引物结合到互补DNA链； 热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1.稳定存在 遗传至下一代 表达和发挥作用。2.目的基因启动子终止子标记基因（1）DNA片段 首端 RNA聚合酶 转录出mRNA 蛋白质。（2）DNA片段 尾端。（3）是否含有目的基因 含有目的基因的细胞 抗生素基因。第三
7、步：将目的基因导入受体细胞_2. 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射技术 受精卵繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 大肠杆菌 Ca2+ 感受态细胞 重组表达载体DNA分子 3.标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1. 转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因 DNA分子杂交技术。2. 目的基因是否转录出了mRNA 用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3. 目的基因是否翻译成蛋白质 蛋白质的 抗体 抗原抗体杂交。4. 个体生物学水平 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状（三）基因工程的应用1.抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。2.提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。3.把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。（四）蛋白质工程的概念蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系 基因修饰或基因合成 改造 新的蛋白质 自然界已存在
