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1、成纤维细胞和饲养层选修3生物技术专题经常出现成纤维细胞，包括小鼠成纤维细胞、成体成纤维细胞、胚胎成纤维细胞等。按照教材，小鼠成纤维细胞是用来做滋养细胞的，胚胎成纤维细胞是用来做饲养层细胞的，前者是支持生长（P30），后者是抑制分化（P51）。不过，新教材选择性必修3许多内容已经修改。选修3第51页那么，饲养层细胞、胚胎成纤维细胞和小鼠成纤维细胞是怎么回事呢？试题解析试题：下图一是培养小鼠胚胎成纤维细胞（MEF细胞）的示意图，图二是在用MEF细胞制成的饲养层上培养胚胎干细胞（ES细胞）的示意图。（1）图一所示，制备细胞悬液时，常用 酶来消化剪碎的组织块。配制培养液时，通常需要在合成培养基的基础上
2、添加 等一些天然成分。当MEF细胞分裂生长到细胞表面相互接触时就停止分裂，这种现象称为细胞的 。（2）ES细胞是由 中分离出来的一类细胞，ES细胞在功能上具有发育的 。（3）MEF细胞能够分泌某些蛋白质，其合成到分泌至细胞外的过程是：核糖体 囊泡 囊泡，再通过 方式分泌到细胞外。在培养液中单独培养ES细胞时，ES细胞容易发生分化，结合图二可推知MEF细胞的作用是 。（4）在治疗性克隆过程中，细胞核取自患者细胞，这是为了避免向患者移入组织细胞后体内发生 反应。答案：（1）胰蛋白 血清 接触抑制（2）早期胚胎（或原始性腺） （发育）全能性（3）内质网 高尔基体 胞吐 抑制ES细胞分化（4）免疫排斥
3、解析：（1）动物细胞培养时，需从健康动物体内取出组织块，剪碎，用胰蛋白酶处理一段时间，这样组织就会分散成单个细胞，然后用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬液；由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此，在使用合成培养基的时候通常需要加入血清等一些天然成分；动物细胞具有贴壁生长，接触抑制的现象。（2）ES细胞是从早期胚胎（或原始性腺）中分离出来的一类具有发育全能性的细胞。（3）分泌蛋白首先在核糖体上合成，其次在内质网上进行加工，然后内质网通过囊泡将其运输到高尔基体上进一步的加工，最后高尔基体再通过囊泡将该蛋白质运输到细胞膜，细胞膜通过胞吐作用将分泌蛋白运输到细胞外；ES细胞在单独培养的时候
4、容易发生分化，但是和MEF细胞一起培养的时候却能保持只分裂不分化的状态，所以可推知MEF细胞的作用是抑制ES细胞分化。（4）由于机体的免疫系统的存在，会对外来的细胞或器官产生免疫排斥反应，所以在治疗性克隆过程中，细胞核取自患者细胞。成纤维细胞和饲养层1.成纤维细胞的来源在胚胎发育中，成纤维细胞和其他的结缔组织一样来源于中胚层。2.成纤维细胞主要功能成纤维细胞分泌细胞外间质的前体，以维持结缔组织结构的完整性。成纤维细胞分泌各类基质和多种纤维。基质的组成决定结缔组织的物理特性。在形态学上，成纤维细胞具多样性，其形态取决于其所处的位置和活动性。与上皮细胞不同，成纤维细胞不形成细胞单层。还可以缓慢地迁
5、移。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。3.饲养层胚胎成纤维细胞胚胎干细胞的培养：饲养层细胞用丝裂霉素处理过的小鼠胚胎成纤维细胞。小鼠ES细胞培养胚胎成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞（一种多能干细胞）分化而来。小鼠胚胎成纤维细胞(MEF 100倍)细胞工程学对饲养层的定义：饲养层是用丝裂霉素C处理细胞单层，阻断细胞有丝分裂后所得到的细胞单层。由于饲养层可以合成和分泌促有丝分裂因子，如成纤维细胞生长因子（FGF），可以合成和分泌细胞分化抑制因子，如白血病抑制因子（LIF），因而饲养层在分离培养ES细胞中具有促进细胞的增殖和抑制细胞的分化两个方面的作用。常用的饲养层有原代小鼠胎儿成纤维细胞PME、小鼠胎儿成纤维细胞系STO、子宫上皮细胞UE、同源胎儿成纤维细胞HEF等。
