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1、I. 细胞的染色例1. 染色例1以染色HeLa细胞为例，介绍使用如下试剂的方法1）. 试剂溶液的配制配制以下的储备液Calcein-AM 0.5 mg/ml DMSO solutionBCECF-AM 1 mmol/l DMSO solutionCFSE 1 mg/ml DMSO solutionCytoRed 1 mmol/l DMSO solutionFDA 0.5 mg/ml DMSO solutionPI 1 mg/ml H2O solutionEB 1 mg/ml H2O solutionDAPI 1 mg/ml H2O solutionAO 1 mg/ml H2O solution
2、(* DMSO solution在-20的条件下保存,避免失效)2）. 器具盖玻片 18 mm 18 mm培养皿 (直径约35 mm)镊子3）. 操作1) 用5.0 ml PBS(-)溶解10 l储备液，配制成染色液。*由于用DMSO溶解的储备液在水溶液中易分解，所以染色液要现配现用，放置长时间后不能染色。2) HeLa细胞用Trypsin-EDTA制成细胞悬液。3) 将细胞悬液离心分离(速度: 1,000 rpm，时间: 3分钟)。4) 去除上清液，加入PBS(-)，控制细胞数量在10e5-1e06个/ml。5) 用移液枪吹打充分。6) 在1.5 ml微管中加入30 l第4) 步得到的细胞悬
3、液。7) 加入15 l染色液。8) 盖上盖子，在37的条件下，孵育15-30分钟。9) 取10 l第8) 步的染色溶液滴加在盖玻片上， 上面再覆盖另一张盖玻片。10) 将盖玻片放在荧光显微镜下，用染色试剂对应的激发波长观察。2. 染色例2以MitoRed染色细胞为例，介绍使用如下试剂的方法1）.试剂溶液的配制配制以下的储备液MitoRed 1 mmol/l DMSO solution(用78 l DMSO溶解1支50 g的MitoRed)(*DMSO solution在-20的条件下保存，避免失效)2）. 操作1) 用培养基稀释1 mmol/l 储备液。MitoRed终浓度为：20-200 n
4、mol/l*加入到细胞前，推荐先在37保温2) 在细胞培养板上培养细胞 (细胞浓度：1105- 1106个/ml)。3) 去除培养基，用 (培养基：PBS，Hanks溶液等)轻轻地清洗。4) 将稀释的试剂溶液添加至每孔，在培养条件下，培养30-60分钟。5) 去除含色素溶液的培养基，添加新的培养基。6) 用荧光显微镜观察。固定细胞的时候，在第4) 步的操作后按以下步骤操作。5) 去除MitoRed溶液，用不含血清的培养基， PBS，Hanks溶液清洗。6) 用10%中*尔马林缓冲液，固定15-20分钟。7) 用PBS清洗。8) 用荧光显微镜观察。图P-7-1 j) 染色HeLa细胞的荧光图像。
5、3. 染色例3介绍以Hochest 33258,33342染色细胞为例1）. 试剂溶液的配制配制以下的储备液Hochest 33258 1 mg/ml H2O solutionHochest 33342 1 mg/ml H2O solution细胞固定液：1%戊二醛/PBS(-)培养液：PBS(-)2）. 操作1) 将含约1106个细胞的细胞培养基离心5分钟(速度：400 x g )，去除上清液。2) 加入100 l细胞固定液，采用吹打等方法，充分混合。3) 在室温下静置30分钟。4) 离心5分钟 (速度：400 x g)，去除上清液。加入1 ml PBS(-)混合后，再离心5分钟 (速度：400 x g )。*此操作为了充分清洗掉戊二醛，如果存在戊二醛，会导致淬灭。5) 加入20 l PBS (-)，混合后加入4 l荧光色素，再混合。6) 滴1滴细胞染色液在载玻片上，将盖玻片盖在上面。7) 用荧光显微镜观察。图P-7-1 k)、I)染色正常人胎儿细胞的荧光图像。
