羟基磷灰石填料——纯化蛋白、多肽、核酸分别机理：羟基磷灰石拥有独到的分别机理，是独向来接用于蛋白质和核酸纯化的无机层析填料，高度耐碱，生物安全性最高此中磷酸离子与带正电的蛋白质以离子键联合，拥有离子互换特征，可由NaCl浓度梯度或磷酸钠浓度梯度洗脱，此中的Ca2＋离子与带负电蛋白质的自由羧基以金属螯合方式联合，该联合方式对NaCl不敏感，可由磷酸钠浓度梯度洗脱所以该填料既能够用磷酸钠单梯度洗脱，也能够采纳NaCl梯度洗脱后以低浓度磷酸钠缓冲液均衡，再以磷酸钠浓度梯度洗脱的双梯度洗脱模型，以达到更高的分辨率羟基磷灰石种类选择：羟基磷灰石因陶瓷化工艺不一样分为2种种类：I型和II型，I型对蛋白质拥有更大的保存，对一般蛋白质拥有更大的动向载量，主要纯化大多数蛋白质（分子量一般在100kd一下）；II型因为孔径较I型大，因此抗衡体和部分重组疫苗等大分子量蛋白质的动向载量更高，而对HSA几乎无保存，因此更适合于抗体的纯化，同时II型对核酸拥有更大的保存，能够辩解单、双链、超螺旋等各样高级构造的DNA，因此也适合纯化核酸●高动向载量、高流速、高产率●更好的化学稳固性和机械强度，更长的寿命●刚性构造，保证了其在PH>的范围内使用，可用NaOH冲洗●优秀的批次重现性，简单放大化●可任意采纳阳离子和金属螯合两个模式分别纯化蛋白或其余分子●能用于层析系统、重力流柱、AcroPrep多孔板等应用●碱性蛋白的纯化（免疫球蛋白）●抗体纯化●酸性蛋白（白蛋白）●去除DNA和内毒素●纯化磷多肽●分别纯化复杂的蛋白混淆物●纯化质粒流动相：均衡液：5mM的磷酸钠缓冲液，PH=洗脱液：的磷酸钠缓冲液，或2M的氯化钠缓冲液，PH=使用步骤：建议使用干法填柱Step1:setuptakeacelllysateanddrawitintothesyringethroughthetubingtipDrawanyresidualsampleintosyringeAttachsyringeandtubingtiptoapre-equilibratedBio-canalcolumn步骤1：均衡安装第一用起码5倍柱体积的均衡液预均衡柱子，将细胞裂解吸入注射器，并安装在柱头上。
Step2:bindingsampleSlowlyloadthelysateontothecolumnTheproteinswillbindtotheresinandnon-proteinswillflowthroughthecolumn步骤2：上样将细胞裂解液慢慢注入柱子中，蛋白会联合在柱子中的填猜中，非蛋白将会流出柱子Step3:washingcolumnAfterloadingthecolumn,addasyringewithwashbufferWashanyremainingnon-specificallyboundproteinsoffthecolumnwithwashbuffer(collectfraction3ifneeded)步骤3：淋洗柱子上样后，用淋洗液（一般为均衡液）将全部的非蛋白冲洗分别出柱子假如上样量高出柱子的载样量，假如需要，能够考虑采集Step4:elutionAttachasyringewithelutionbufferSlowlyeluteyourproteinwithelutionbufferThiswillallowyoutocapture>90%ofyourproteininthefirstelutionfraction步骤4：洗脱选择适合的洗脱液，用注射器将目标蛋白洗脱并采集，假如需要，能够自行配制不一样浓度梯度的洗脱液进行必需的梯度洗脱。
保存：长时间应保存在1MNaOH溶液中，至于室温密封保存注意：长时间保存在1MNaOH溶液中的层析柱，上样前必定注意PH值，建议使用洗脱液将PH值洗下来，再使用均衡溶液均衡后上样建议使用标准层析设施（如AKTA）以达到更好的分别纯化成效。