B -葡糖苷酶（纤二糖酶）测定方法（总2页）--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小-试验二B-葡萄糖苷酶（BG； EC）活性测定 新鲜土样比色法的原理：以对硝基苯-B-D-吡喃葡糖苷为基质，水解产生对硝基酚，比色测定 （硝基酚比色法）1.配置溶液：（1） 改进的通用缓冲溶液（MUB）贮备液：三羟甲基氨基甲烷（CH NO即Tris）、4 11 3 马来酸（C H 0 ）、14g柠檬酸（C H 0 ）和硼酸（H BO ）溶于500ml NaOH溶液44 4 6 8 7 3 3中，用去离子水稀释至1L，于4°C下贮存2） pH值的MUB缓冲溶液：在继续搅拌下，在200ml MUB贮备液中分别滴加HcL 或NaOH至溶液pH值为，去离子水稀释定容至1L（3） 4-Nitrophenyl-beta-D-glucopyranoside 对硝基酚-B-D-毗喃葡糖苷（PNPG） 溶液［C H N0 =］： PNPG溶于40ml MUB溶液（pH为）中，用相同pH值的缓冲12 15 8液稀释至50ml，于4°C下贮存4） Cacl2溶液（）：取无水Cacl2加入1L的容量瓶中配置22（5） Tris缓冲液［c （C H NO ） =, pH值］:g三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶于800ml4 11 3去离子水，用NaOH调节pH至，去离子水稀释至1L（6） 标准对硝基苯酚溶液：溶解 对硝基酚于400ml双去离子水中，定 容到500mL,保存于4度，用时再稀释10倍。
稀释后为一般需 1000ppm）2.试验过程⑴取1g新鲜土样（＜2mm）于100ml三角瓶中，加甲苯，通风橱10min后，4ml pH为的MUB 溶液和1mm PNPG溶液，盖上瓶盖，充分混匀，在37°C培养1h⑵加1ml Cacl2溶液和4ml pH值的Tris缓冲液，摇匀，迅速用快速滤纸过滤，滤液在 400nm处比色测定做空白对照时，可在培养结束后，加Cac —溶液和tris缓冲液之前加 入1mL缓冲液（代替1mL底物）溶液每个样品必须做一个空白和三次重复3）标准曲线：吸取 0，，1，2，3，4，5， 6ml 于 100ml 容量瓶中，加去离子水稀释至 5ml，然后加1ml氯化钙溶液和4ml tris溶液，充分混匀后定容50ml，过滤，400nm处比 色测定结果计算B-葡萄糖苷酶活性（|1 g对-硝基酚.）=CV/dwt式中：C表示样品对-硝基酚的含量（|1 g/ml）；V表示土壤溶液体Dwt表示烘干土壤质量个人做法实验终止后加入 5mL 离子水稀释后过滤（若果用微孔板，则可以不用 加离子水）。