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1、 产品初始污染菌检测方法适用性验证 产品初始污染菌检测方法适用性验证项目名称产品初始污染菌检测方法适用性验证项目编号编制人员日 期审核人员日 期批准人员日 期 目录1. 概述2. 验证目的3. 适用范围4. 验证依据5. 验证小组成员及职责6. 试验材料7. 样品洗脱方法回收率验证8. 技术方法验证9. 验证方案的评定和建议10. 验证方案的最终审核意见11. 产品初始污染菌检测方法适用性验证报告产品初始污染菌检测方法适用性验证1. 概述初始污染菌是用于检测产品未灭菌前屏障系统表面或内在的活微生物数量。初始污染菌回收率用于补偿无法从产品中完全取出的微生物的数值。是用特定的技术从产品上移除并培养
2、微生物的方法，测定灭菌前产品细菌总数可用来判断产品受细菌污染的程度，以及生产单位工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对产品进行卫生学评价的综合依据，确定灭菌前产品中微生物的数量和性质，可为下一步灭菌提供参考依据。确保本企业所生产的成品符合产品标准要求。2. 验证目的确定产品初始污染菌检测方法3. 适用范围本公司产品的初始污染菌检测4. 验证依据 中国药典2015版通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法； ISO11737-1:2006医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定； GB/T19973-12005医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数
3、的估计； GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准；5. 验证小组成员及职责小组人员职务姓名所在部门职责组长组员组员6. 试验材料6.1. 试验产品：6.2. 仪器与设备： DSX-280B手提式压力蒸汽灭菌器，SPX-150型生化培养箱，SW-CJ系列洁净工作台，MJK-150型霉菌培养箱，BSC-1000A2生物安全柜，ZW型集菌仪 ，GZX-9076MBE电热鼓风干燥箱。6.3. 其他试验材料：微孔滤膜（孔径0.45um，直径约50mm）、量筒、镊子、吸管、酒精灯、试管、75%乙醇棉签、灭菌刻度吸量管（1ml）、灭菌硼硅酸玻璃培养皿（90mm15mm）、锥形瓶，灭菌手术剪、无菌
4、烧杯等。6.4. 培养基及稀释液： 胰酪大豆胨琼脂培养基 沙式葡萄糖琼脂培养基 PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 0.9%NaCl溶液6.5. 菌种： 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌7. 样品洗脱方法回收率验证7.1. 方法描述 验证试验应进行3次独立的平行试验，每次试验时，先将已知菌落数的悬液菌液涂布于样品上，然后对同一样品进行多次洗脱处理，每次洗脱后的供试液通过薄膜过滤法过滤，培养并计数，得出回收率。7.2. 样品准备取产品（未组装的），灭菌7.3. 菌液制备7.4. 试验步骤7.4.1. 样品处理：取50100cfu的 菌液，均匀涂布于样品（最难洗脱的部位）上，自然晾干。7.4.2. 样品洗脱
5、：在净化台下取处理后的样品，浸没于装有一定体积的0.9%无菌NaCL溶液的适合容器中，手工震摇5分钟洗脱样品中的菌，作为供试液，做好标记。7.4.3. 按7.4.2再反复洗脱3次，分别做好标记。7.4.4. 采用薄膜过滤法，将每一次洗脱的供试液分别过滤集菌于不同的膜上，取下滤膜正面朝上贴于相应的培养基平皿上，置该培养基的温培养条件进行培养；7.4.5. 计数：对每一次洗脱的菌落进行计数，并记录于下表1中7.4.6. 回收率计算 第一次洗脱的菌落数 回收率= 总菌落数7.5. 结果判定 在3次独立平行试验中，回收率均应大于70%，则洗脱方法有效，若任一次试验中回收率低于70%，则应排除干扰因素，
6、并重新验证，或选择回收率最接近要求的方法和试验条件进行试验。8. 计数方法验证8.1. 方法描述 验证试验应进行3次独立的平行试验，每次试验分四个组，试验组、菌液组、供试品对照组、洗脱液对照组。并分别计算各试验菌的每次试验回收率。8.2. 供试液的制备：按7.的方法制备。8.3. 试验步骤：8.3.1. 试验组 将供试液用薄膜过滤法过滤，并加入100ml（1ml含50-100cfu的试验菌和99mlPH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液）稀释的菌悬液，过滤后将滤膜取下，菌面朝上贴在对应培养皿上，培养并计数。8.3.2. 菌液组 加入100ml（含50-100cfu的试验菌和99mlPH7.0氯化钠-蛋
7、白胨缓冲液）稀释的菌悬液，用薄膜过滤法过滤后，培养并计数。8.3.3. 供试品对照组 将供试液用薄膜过滤法过滤，加100mlPH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，用薄膜过滤法过滤后，培养并计数。8.3.4. 洗脱液对照组 将样品洗脱液用薄膜过滤法过滤，加入100ml（含50-100cfu的试验菌和99mlPH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液）稀释的菌悬液，用薄膜过滤法过滤后，培养并计数。8.4. 结果判定 在3次独立平行试验中，洗脱液对照组回收率洗脱液对照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落数均应不低于70%，若试验组回收率（试验组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数的值）/菌液组的平均菌落数均不低于70%
8、，则计数方法有效；若任一次试验中试验组的菌落回收率低于70%，则应排除干扰因素，并重新验证，若无法消除则选择回收率最接近要求的方法和试验条件进行检验。9. 验证方案的评定和建议10. 验证方案的最终审核意见产品初始污染菌检测方法适用性验证报告1. 产品概述2. 仪器与设备设备名称型号编号是否校准是否在有效期内结论手提式压力蒸汽灭菌器DSX-280B是 否是 否生化培养箱SPX-150是 否是 否洁净工作台SW-CJ是 否是 否霉菌培养箱MJK-150是 否是 否A2生物安全柜BSC-1000是 否是 否集菌仪ZW型是 否是 否电热鼓风干燥箱GZX-9076MBE是 否是 否3. 培养基和稀释液
9、名称批号厂家配制批号配制人胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖培养基PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液0.9%NaCL溶液4. 菌种菌种名称菌种编号来源批号代数金黄色葡萄球菌大肠埃希菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉5. 洗脱方法回收率结果产品第一次洗第二次洗第三次洗第四次洗回收率平均回收率修正系数结论：试验人/日期： 审核/日期6. 计数方法验证结果产品名称大肠埃希菌试验组试验组试验组菌液组菌液组菌液组供试液组供试液组供试液组洗脱液组洗脱液组洗脱液组回收率回收率回收率金黄色葡萄球菌试验组试验组试验组菌液组菌液组菌液组供试液组供试液组供试液组洗脱液组洗脱液组洗脱液组回收率回收率回收率枯草芽孢杆菌试验组试验组试验组菌液组菌液组菌液组供试液组供试液组供试液组洗脱液组洗脱液组洗脱液组回收率回收率回收率计数方法验证结果白色念珠菌试验组试验组试验组菌液组菌液组菌液组供试液组供试液组供试液组洗脱液组洗脱液组洗脱液组回收率回收率回收率黑曲霉试验组试验组试验组菌液组菌液组菌液组供试液组供试液组供试液组洗脱液组洗脱液组洗脱液组回收率回收率回收率结论：试验人/日期： 审核/日期7. 验证结论8. 验证结果的评定与建议9. 验证结果的最终审核意见
