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1、百御素抑菌试验报告胡光超高飞百御素是以大蒜素提取物为主要成分经过特殊包被工艺而成的肠溶微囊制 剂，是北京资源集团博士后科研工作站的营养专家、兽药专家与中国农业大学、 中国农业科学院联合研制的新一代绿色饲料添加剂。百御素具有广谱抗菌，对畜 禽常见的有害菌均有较强的抑制作用，可完全替代饲料中添加的抗生素，改善动 物亚健康状态，解除免疫抑制，增强动物免疫力，提高采食量、促进生长等功效。本试验采用国际上通用的试管二倍稀释法来测试百御素对畜、禽常见的8 种肠道病原菌的抑菌直径和最小抑菌浓度(MIC)，为百御素为养殖业更好的服务提 供支持。1. 试验材料：1.1菌种大肠杆菌(Escherichia col
2、i)02、大肠杆菌(Escherichia coli)0i39、大肠杆 菌(Escherichia coli)08、大肠杆菌(Escherichia coli)078，鸡白痢沙门菌 (Salmonella pullrum)，鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)，猪伤寒沙门 菌(Salmonella typhisuis)，猪霍舌L沙门菌(Salmonella choleraesuis)，均购自 中国兽药监察所。1.2试剂蛋白胨、琼脂粉、牛肉浸膏、NaCl、K2HP04、NaOH、乙醇、吐温801.3培养基普通营养琼脂平板、普通营养肉汤培养基均按常规方法配制，高压灭菌后置
3、4 C冰箱保存备用。1.4仪器设备蒸气灭菌器，电热恒温水、温箱，电热恒温培养箱，超净工作台，1000ul加 样器，游标卡尺(规格O150mm X 0.02 mm)，分析天平、无霜型冰箱，电炉，漏斗， 打孔器等。2. 样品溶液制备：取百御素适量，置研钵中研细，称取1g (精确至0.0002g)，置于100ml容量 瓶中，加入5ml灭菌吐温80和5ml乙醇，再加入约80ml灭菌水，强力振摇或超 声波60分钟，再加灭菌水至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml至另一 100ml容量瓶中，加灭菌水至刻度，混匀，制成每ml含百御素500ug的溶液。3. 菌液制备挑取低温冻藏的菌种少许，悬浮于普通肉汤培养
4、基中，37C复苏24h,然后划 线接种于普通琼脂平板培养基上，37C培养全细菌达到生长平衡期，选择典型的 单菌落传代23代，待活力恢复后，挑取典型菌落，接种于普通琼脂平板培养基 上，37C培养28 h，挑取典型菌落接种于新鲜肉汤培养基中，37C培养18h，备用。4. MIC的测定采用试管二倍稀释法测定百御素对各供试菌的最小抑菌浓度(MIC)。 取13mmX 100mm灭菌有棉塞试管11支，编号，每管先加入无菌肉汤培养基 2.0ml，然后于第一管中加入样品溶液2.0ml，混匀后取出2.0m 1放入第2管中，依 次类推做1： 21： 512的倍比稀释，至第9管取出2. 0mL弃去。第10管不加药物
5、， 作为阳性对照，第11管加样品溶液2.0ml，混匀后取出2.0mL弃去，不加细菌，作 为阴性对照。各管平行3份。 经肉汤培养基培养18h的试验菌液用无菌肉汤稀释100倍。取细菌稀释液 0.1m l分别加入上述110管中混匀，11号管加0.1m l灭菌生理盐水，置各管于恒温 培养箱中培养24h，观察结果。在阳性对照管细菌生长呈浑浊状，而阴性对照管无细菌生长呈透明状的前提 下，观察其他试管的浑浊情况。如试管内浑浊，说明有细菌生长；如试管内澄清 透明，证明无细菌生长。眼观选出无细菌生长的各管，分别取其液体涂布于琼脂 平板培养基上，于恒温培养箱培养24h，观察结果。琼脂平板上无细菌生长而浓度 最低者
6、，即为百御素对该菌株的最低抑菌浓度。6.结果表1培养24h后细菌生长情况大肠杆菌02大肠杆菌he大肠杆菌08大肠 杆菌078鸡白痢沙门菌鼠伤寒沙门菌猪伤寒沙门菌猪霍乱沙门菌试管1试管2试管3试管4试管5试管6+试管7+试管8+试管9+试管10+试管11-+ ”表示有菌生长，-表示无菌生长表2.百御素的最小抑菌浓度MIC大肠杆菌02大肠杆菌he大肠杆菌08大肠 杆菌078鸡白痢沙门菌鼠伤寒沙门菌猪伤寒沙门菌猪霍乱沙门菌最小抑菌浓 度MIC (ug/ml)0.2661.0620.5310.5310.2660.1330.2663.125试验结果表明，百御素对本次试验的八种细菌都有较强的作用，作用强度依 次为鼠伤寒沙门菌鸡白痢沙门菌二大肠杆菌02=猪伤寒沙门菌大肠杆菌08二大肠 杆菌078大肠杆菌。恼猪霍乱沙门菌。百御素完全可以替代饲料中添加的抗生 素，预防疾病，促进动物健康生长。
