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1、植物单宁的含量测定措施 植物单宁单宁(Tannns)又称单宁酸、鞣质、鞣酸。按 Batgt 的定义,指相对分子质量为 003000 的能沉淀蛋白质、生物碱的水溶性多酚化合物。重要应用于1医药、食品、制革、日用化学品、水解决等领域。单宁在老式医药上内服可治胃肠道出血和止痢,外用于局部止血和创面保护避免感染发炎；近年研究发现单宁还具有抑菌抗病毒、抗过敏、抗氧化和延缓衰老、避免心血管疾病、抗肿瘤和增进免疫等作用。单宁在食品行业中可作为功能性成分用于制作保健品，生产食品添加剂、风味剂等；在化妆品中重要起收敛、防晒、美白、抗皱、保湿、防腐等作用;在制革工业中，单宁是栲胶的重要成分。 单宁的含量测定典型的
2、有皮粉法、干酪素法、氧化滴定法、分光光度法等；现阶段涌现出许多新型的测定措施，如高效液相色谱法、流动注射分析法、原子分光光度法等。2.1 典型测定措施2.1. 皮粉法 皮粉法是国际上公认的单宁含量测定措施，从 20 世纪 60年代至今，原苏联、日本、印度和中国都采用此法作为国标测试措施。皮粉的重要成分是蛋白质，单宁是多元酚类,分子中的酚羟基与蛋白质的酰胺键以氢键结合形成不溶于水的沉淀，以此使单宁沉淀下来,用重量法测定其含量。根据皮粉与单宁溶液接触方式不同，可将其分为震荡法和过滤法。震荡法是皮粉与单宁溶液一起震荡来脱去溶液中的单宁；过滤法是将单宁溶液流过皮粉柱层以脱去单宁。一般，过滤法所测的单宁
3、含量比震荡法高 5%7。皮粉法所测的是单宁的绝对含量,并且不需要标样,操作简朴，可用其测定中药水提液中鞣质的含量。但皮粉法的缺陷是，用重量法测定样品时，须通过过滤、干燥、称重,样品耗用量大，测定期间较长,一般样品分析需 20 左右，不适合大批量样品的迅速测定;没有选择性,对低相对分子质量的多酚也具有一定的吸附能力，往往使测定成果偏高;合用于单宁含量高的样品,不适合低含量和微量测定；此外皮粉试剂的供应和质量都较难保证。针对以上缺陷,目前大多采用皮粉 - 分光光度法 3、磷钼钨酸 -皮粉比色法4等，具有操作简朴、迅速、精密度高的长处。2.1.2 干酪素法干酪素的重要成分是酪蛋白，为含磷蛋白。运用其
4、能选择性地结合具有生理活性的鞣质,从而测定具有疗效鞣质的含量。干酪素法一般与分光光度法结合，鞣质在一定的 pH 条件下与Flin试剂反映，并且鞣质含量与吸光度成正比。诸多人运用干酪素法测定了金樱子、侧伯叶、大黄、旋覆花5- 等药材中单宁的含量,此法样品取量少、简朴、敏捷、迅速、精确，可作为检测植物药材质量原则的可靠分析手段。2.3 胶体滴定法胶体滴定法,又称聚电解质滴定法，是运用某些电荷密度已知且性能比较稳定的阴、阳离子聚电解质作为原则溶液，对被测试样进行电荷测量的一种滴定措施。948 年日本学者寺山宏提出后，经众多研究者的不断改善，已成为最简朴的定量分析聚电解质的措施10- 11，并且在制革
5、、水解决、造纸、食品等行业得到了广泛的应用12-1。单宁溶液在一定的条件下呈胶体状态，胶粒带负电荷14。胶体滴定的具体做法是，于浸提的栲胶溶液中加入过量的 D（聚二甲基二烯丙基氯化铵） 原则溶液，以 TB(甲苯胺兰批示剂）为批示剂,用 K （聚乙烯醇硫酸钾）滴定过剩的 PD。T 批示剂带有正电荷,与PD不反映，最初呈现蓝绿色。随着滴定的进行,过剩的 PD 会与 PVS形成聚离子复合物,此时再滴入的PVS 与批示剂反映,产生异染现象,试样溶液立即变为红紫色，批示滴定达到终点。庞燕等16运用胶体滴定法测定木麻黄树皮中的单宁，得出了在 pH 为 7 时木麻黄溶液的胶体滴定值与所含单宁含量的线性关系,
6、有关性良好,可以据此来计算未知浓度的木麻黄提取液中单宁的含量。戴丽君等17以胶体滴定法和皮粉法分别测定了橡碗栲胶中单宁含量,两者对比发现，胶体滴定法测得的单宁含量值均不不小于皮粉法的测定值,但是差值不大,究其因素，也许是由于滴定终点的判断、温差等因素引起的。2.14 络合滴定法络合滴定法是以络合反映为基本的容量分析措施,又称螯合滴定法。单宁分子中具有多种酚羟基可以与一种中心离子,如铜、锌、铋、铁、汞等进行络合,形成多核络合物，在一定的 H 条件下沉淀,再通过 EA 反滴定过量金属离子来拟定单宁的含量。络合法所使用的批示剂一般为金属批示剂,批示终点达到时规定具有较深的颜色,如铬黑 T。运用 Zn
7、2+ 只与单宁反映的特性来沉淀分析溶液中的塔拉单宁，以铬黑T 作批示剂，用EDT 溶液滴定剩余的 Zn2+,成果显示塔拉中单宁的质量百分含量为 57.3,比皮粉法测定的成果要精确18。刘佳铭19用Pb2+与单宁络合,以 K2Cr4 为批示剂,PM（阳离子型聚丙烯酰胺）为终点增敏剂,测定了黑荆树栲胶中单宁的含量,较之皮粉法迅速、精确。尚有人研究了绿茶20、橡子21和三叶委陵菜22中单宁的络合滴定，众多研究表白络合滴定法简朴、迅速、误差小，并且避免了沉淀转移及洗涤的繁琐程序，还可省略空白对照，对酚类物质的选择性比较好，蛋白质和抗坏血酸均不影响测定。但是金属离子与酚类物质的反映与酚的构造有很大关系,
8、并且敏捷度较差，不合适酚组分复杂的样品。2.5 氧化滴定法氧化还原滴定法是以氧化剂或还原剂为滴定剂，直接滴定某些具有还原性或氧化性的物质;或者间接滴定某些自身没有氧化还原性，但能与某些氧化剂或还原剂起反映的物质。单宁是多酚类的化合物,具有较好的还原性,在常温酸性溶液中可被高锰酸钾氧化,由此可得到单宁的含量。用此法测定二白圆、二梭子两种青果果实中的总鞣质含量23表白，滴定终点不易观测,须多次平行实验，取平均值。2.16 Stsn 法Stay 法也称甲醛缩合法，是运用单宁与甲醛 - 盐酸共沸时,单宁与甲醛缩聚，基本上所有沉淀下来。其反映方程如图 1。单宁与甲醛所产生的沉淀物质量占样品总质量的百分率
9、,称为甲醛值(或称 Stasny 值)。在规定的测定条件下，用甲醛缩合的沉淀物质量与试样的质量及不溶物含量之间的数量关系计算得出被测试样中单宁的含量。国内有采用甲醛缩合法测定落叶松树皮、黑荆树栲胶 24- 26中的单宁含量,具有简朴、快捷、精确的长处，是一种值得推广的缩合单宁含量的测定措施。2. 分光光度法 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长或一定波长范畴内光的吸取度,以此对该物质进行定性和定量分析的措施。分光光度法的应用光区涉及紫外光区、可见光区、红外光区，其中常用的是紫外光区和可见光区,两者的波长范畴分别为 200 400 m 和 40760 m分光光度法的基本原理是朗伯 - 比尔定律
10、，即当一束平行的单色光通过具有吸光物质的稀溶液时,溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比。定量分析时,一方面需要测定溶液对不同波长光的吸取状况，从中拟定出最大波长,然后以此波长为光源，测定一系列已知浓度 c溶液的吸光度A,做出 -c 工作曲线。分析未知溶液时,根据测量的吸光度，相应工作曲线即可拟定出相应的浓度。在众多单宁含量的测定措施中,分光光度法的应用最为广泛。常用的显色剂有邻二氮菲-铁（)、香草醛、正丁醇 - 盐酸、Fon- Denis 试剂、Folin-ioaleu试剂、铁氰化钾（普鲁士蓝法)、磷钼酸- 钨酸钠、柠檬酸铁铵等7-。其中Fi- 酚法和普鲁士蓝法测定的是总酚含量；香草
11、醛法选择性测定A 环为间苯三酚的黄烷醇，但不能区别单体和聚合体；正丁醇- 盐酸测定的是聚原花色素(缩合单宁)的含量。武予清等32通过 Foin 酚还原法、正丁醇 盐酸法和香草醛法测定棉花组织中单宁的含量,比较表白Foln 酚法测定的单宁含量值明显高于正丁醇 -盐酸法，因素也许是此法测定出的是相对总酚含量；而香草醛法的测定成果与正丁醇- 盐酸法差别不大,可以用于棉花中缩合单宁的含量测定。.1. 比色法比色法是通过比较或者测量有色物质溶液颜色深度来拟定待测组分含量的措施。其作为一种定量分析措施，大概开始于 19世纪 40 年代。常用的比色法有两种:目视比色法和光电比色法，都是以朗伯- 比尔定律为基
12、本的。在 20世纪30 0 年代，是比色分析发展的繁盛时期，它广泛的应用于冶金、地质、金属材料中微量的金属和部分非金属元素的测定。但随着光学仪器制造技术的发展，分光光度法逐渐替代了比色法。.2 现代测定措施2.1.1 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）又称高压液相色谱、近代柱色谱，是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例混合的溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该措施已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。1906 年俄国植物化学家茨维特(Tswet）初次
13、提出“色谱法”和“色谱图”的概念。1960年中后期,液相色谱开始活跃,到 60 年代末把高压泵和化学键合固定相 用 于 液 相色谱就 出现 了HPC；190年后来，生物工程和生命科学在国际和国内的迅速发展，为高效液相色谱技术提出了更多、更新的分离、纯化、制备的课题,增进了它的迅速发展。高效液相色谱中的固定相可以是液体、吸附剂、离子互换剂、离子互换树脂、凝胶，固定相的不同，分离原理也有差别。较常用的是液 - 液分派色谱法,即流动相和固定相都是液体,并且互不相溶,有一种明显的分界面。其又涉及正相液 -液分派色谱法即流动相的极性不不小于固定相、反相液 液分派色谱法即流动相的极性不小于固定相。在液 -
14、液分派色谱中尽管流动相与固定相的极性规定完全不同,但固定液仍不可避免的在流动相中有微量的溶解;并且流动相通过色谱柱时的机械冲击力,会导致固定液的流失。0世纪 70 年代末发展的化学键合固定相可以克服上述的缺陷,目前应用很广泛。郭佳莉等33采用Hyperil OD（14. ，5 m) 色谱柱；检测波长 275n;流动相为8%甲醇和 20%水;流速为 0.mLn- 1 测定余甘子中单宁酸的含量，有关系数达 9.9%以上,充足显示了该法迅速、以便、精确可靠的长处。.2 流动注射法流动注射分析法(I）是丹麦科学家于 974 年创立的一项溶液自动在线解决及测定的现代分析技术。198 年zicka 等对流
15、动注射分析作了定义:向流路中注入一种明确的流体带，在持续非隔离载流中分散而形成浓度梯度,从此浓度梯度中获得信息的技术。流动注射分析法是运用品有流速的试剂流的容量测定，即用聚四氟乙烯管替代烧杯和容量瓶,通过流动注射进行分析的措施。用恒流量泵使检测试剂流过内径为 0.5 mm的聚四氟乙烯管，在半途有注入部件(旋转阀)注入微升量试样,使其在混合圈中反映。检测器一般是采用装有流通池的分光光度计、荧光光度计、原子吸取分光光度计和离子计等。李淮芬等34基于在甲醛存在的酸性介质中，高锰酸钾氧化单宁酸产生较强的化学发光反映，结合流动注射技术,测定了几种啤酒中微量的单宁酸含量。赵川等35使用经阳极化解决的双铂电极,通过偶合单宁在一支电极上的催化氧化和氧化铂在另一支电极上的还原两个不可逆电极过程,建立了不可逆电对的流动注射双安培法迅速检测绿茶、花茶等中的单宁含量的新措施。流动注射法还可与化学发光增强法、动力学光度法等措施结合36 ,对被测试样的单宁含量进行测定,具有较好的重现性和精确性。流动注射法的测量是在动态条件下进行，反映条件和分析操作能自动保持一致
