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1、【实验目的】1、用氯化汞中毒方法复制家兔急性肾功能不全模型。2、观察急性肾功能不全时肾功能评价指标变化。肾功能评价指标：（1）测定血肌酐、尿肌酐，计算内生肌酐清除率（2）测定酚红排泄率 （3）观察肾脏形态学改变。【实验材料】器械 家兔手术台、常用手术器械一套、止血钳、眼科剪、支架、照明灯、纱布、丝线 lml、10ml、50ml 注射器药品 生理盐水、20%氨基甲酸乙酯、0.6%酚红溶液、20%葡萄糖溶液对象 家兔 分组：1-4组模型组（头部黄色标志） 5-8组对照组【实验方法】 一、复制急性肾功能不全模型（已完成）：实验前24小时，取家兔两组，称重。模型组一一皮下注射1%氯化汞溶液0.8-1m
2、l/Kg体重;对照组一一皮下注射等计量生理盐水 二、急性肾功能不全指标检测1、家兔称重、麻醉和固定：取家兔一只，称重：2.16kg； 20%氨基甲酸乙酯：5ml/kg体重， 耳缘静脉缓慢注射，共注射10.8ml至呼吸深而慢、反射迟钝（角膜反射、夹肢反射）为止。 背位固定。2、心脏采血测血肌酐（颈动脉）左侧第3-4肋间，靠近胸骨，心跳最明显处垂直进针穿刺，取血3 ml，推入干燥试管，静 置，备用测血肌酐。3、膀胱插管术测尿肌酐、收集尿液1）如何进行膀胱插管，请按实际操作详细描述。2）先用注射器取尿液2 ml于试管中，一一备用测尿肌酐。3）然后在输尿管下方穿线结扎尿道，再行膀胱切口，插管固定，排空
3、膀胱。4）准备小烧杯，收集尿液。4、酚红排泄率测定1）0.6%酚红溶液1ml/Kg体重，耳缘静脉头皮针注射，总共注射2.16ml。计时一开始收集 尿液。2）然后20%葡萄糖溶液30 ml/Kg体重，耳缘静脉缓慢推注。3）从注射酚红溶液起收集15分钟（对照组）、30分钟（模型组）尿液。5、生化检测血肌酐、尿肌酐、酚红排泄率1）测酚红排泄率收集注射酚红后的全部尿液一250 ml量筒内一然后加入10% NaOH 5 ml再加自来水至 250 ml混匀一取适量混合液一小试管中与标准比色管进行比较即为15分钟、30分钟酚红 排泄率。（标准比色管浓度5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、4
4、0%、45%、50%）2）测血肌酐苦味酸沉淀蛋白法（1）血液离心:2000-3000r/min, 5min,取血清，按下表步骤操作，然后混匀，37C, 30min单位(ml)空白管标准管测定管0.20.22.0 2.0肌酐标准应用液(0.05mg/ml)血清蒸馏水0.2碱性苦味酸2.0(2) 510nm波长比色，空白管调零，标准管读0D值，测定管读0D值。记录0D值。(苦味 酸+血肌酐一苦味酸肌酐=0D)(3) 各管液体倒回试管，加50%乙酸两滴，放置6分钟，510nm波长比色，空白管调零，标 准管读0D值，测定管读0D值。记录0D值。(苦味酸肌酐+50%乙酸一非肌酐物=0D)(4) 按公式计
5、算血肌酐值正常值=0.7-0.8mg%(lmg=88.4Amol/L)0D测-ODZ测Cr(mg%)= Z X0.01/0.2X100OD标_0D，标3) 测尿肌酐苦味酸沉淀蛋白法用大试管(1) 按下表步骤操作，然后混匀，放10分钟，各管加蒸馏水6.0 ml，摇匀单位(ml)空白管标准管测定管尿液(原尿或1： 50稀释)0.1肌酐标准应用液0.1蒸馏水0.1碱性苦味酸2.02.02.012.5%氢氧化钠溶液0.50.50.5(2) 530nm波长比色，空白管调零，读0D值。(3) 按公式计算尿肌酐值。X0.05mgX100 ml/0.1ml_OD测Cr】 p(mg%) =OD标4)内生肌酐清除
6、率计算内生肌酐清除率：血中肌酐含量尿量(ml/min) = ml/min 血中肌酐含量三、肾形态学观察：处死家兔，取出肾脏。1. 称肾重：肾体比=肾重/体重2. 对照组模型组肾脏形态学比较：肾外形、包膜；最大径纵向剖开肾脏，观察肾实质色泽、皮髓质结构改变。实验结果】1、对照组(正常)与实验组(肾衰)家兔血清肌酐F、尿肌酐及酚红排泄率测定值如下：血清肌酐Crp(mg%)尿肌酐Cru(mg%)尿肌酐/血肌酐酚红排泄率(%)肾比重(g/mg)对照组0.24518. 5575.750%0.72%实验组1.596440.35%0.92%实验组与对照组相比，尿肌酐、血肌酐含量明显增高，尿肌酐/血肌酐值降低，酚红排泄率 下降，肾比重增加。2、对照组与实验组家兔肾脏形态比较：正常肾脏颜色为红褐色，切面色泽鲜艳，皮髓质分界清晰；急性肾衰竭家兔肾脏重量增加, 表面颜色苍白，体积增大，切面为苍白色，皮髓质分界不清，偶有淤血。正常肾肾衰竭
