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1、乳酸的测定：对羟基联苯比色法(参照高庆，2005)1. 材料、试剂与仪器无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂 主要溶液： 钨酸溶液：L硫酸及1%(W/V)钨酸钠(Na2WO4理)溶液等体积混合，当天使用前配制； 20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuS04 5H20) 20g，加蒸馏水70ml,加热使之溶解，再加入蒸馏 水定容至 100ml； 对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯溶于100ml的L氢氧化钠溶液中(配制时加热助溶，溶解后为澄 清液体)，贮存于棕色瓶中，保存于4C冰箱，可使用一个月； 乳酸标准储存液(1mg/ml)：精确称取无水乳
2、酸锂，溶于50ml蒸馏水中，加L硫酸20ml，后加蒸馏 水定容至100ml，混匀后保存于4C冰箱。 4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液10mL加蒸馏水稀释至50mL。 乳酸标准应用液(200厢/mL):使用时取储存液10mL用蒸馏水稀释至50mL。在冰箱中可保存数天。 主要仪器：UNIC UV-2100紫外可见分光光度计、TGL-16B离心机、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。2. 方法青贮浸提液样品预处理取适量青贮浸提液样品5000r/min离心10min,取上清液适当稀释，吸取稀释液于洁净离心管中，加入 钨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物(约3045m
3、in), 10000r/m离心10min,取 上清液置于5ml洁净具塞试管中，60C水浴保温30min左右，冷却待用。标准曲线的制作用200Lg/mL乳酸应用标准液 同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释),按下表数量在预先编好号的试管中加入标 准乳酸滤液和蒸馏水。表1乳酸标准液配制试管号1234567池敢1,閃4). (K)0. 1()0. 200.如0. -W0.如0.2.(01. 901.驗1. 7()1.1. 501. U)各管中分别加入氢氧化钙粉末100mg,混匀，8000r/min离心5min,取上清液,加入预先加有20mg氢氧 化钙粉末的小试管中，混匀，加20%硫酸铜
4、溶液，称重，迅速混匀，沸水浴3min,水浴冷却，补足重 量,3000r/min离心5min，各吸上清液加入比色管中。在各管加入25匹的4%硫酸铜溶液，混匀后置冰 水浴内冷却。将预冷的浓硫酸缓缓加入各管中，每管各加，边加边摇,混匀后置沸水浴中准确加热5min， 取出后迅速置冰水浴中冷却3min左右。在各管中加对羟基联苯溶液，充分振摇后，放置，其间每 10min混摇一次。各管置于沸水浴中准确加热90s,立即放入冰水浴中冷却。在波长565nm处用lcm 比色皿，1管作为参比，分别测定吸光度(A)。所得数据以乳酸含量为横坐标，以565nm处的光吸收为纵坐 标，作标准曲线。青贮样品浸提液中乳酸含量的测定
5、取青贮样品浸提液滤液按标准曲线的测定方法,以蒸馏水为空白测定其在 560nm 处的光吸收,所得 数据在标准曲线上查得相应的乳酸含量,即为青贮样品浸提液中的乳酸含量。样品中乳酸含量=计算值X稀释倍数620G0-0. 22. 2 亂酸标准曲线抿据乳酸标准液测定的数据作图如下。0. H r乳酸灌度C ( 图2 乳酸标准曲线由團町得回卜方程为;1= 0. 1 19(： - (L 0102( R2- IL )式中 C 酒液中乳酸的浓度;Pg/mLflA测定朮吸收值纽A-+O.OL024J最后确定的样品中乳酸含fi=CX稀释倍数=沁稀释倍数(ML如需要试剂：无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂 需要器材：分光光度计、离心机、离心管、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。只为需要
