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1、医疗机构临床基因扩增检验工作导则-标准化文件发布号：（9556-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII附件扩增检实验室工作导则一、临床基因扩增检验实验室的设计（一）临床基因扩增检验实验室区域设计原则。原则上 临床基因扩增检验实验室应当设置以下区域：试剂储存和 准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。这 4 个 区域在物理空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是 在空间上还是在使用中，应当始终处于完全的分隔状态， 不能有空气的直接相通。根据使用仪器的功能，区域可适 当合并。例如使用实时荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分 析区可合并；采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一
2、体 的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析 区可合并。各区的功能是：1. 试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和 扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮 存和准备。2标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物 安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。3扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。4.扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。(二) 临床基因扩增检验实验室的空气流向。临床基 因扩增检验实验室的空气流向可按照试剂储存和准备区f 标本制备区f扩增
3、区f扩增产物分析区进行，防止扩增产 物顺空气气流进入扩增前的区域。可按照从试剂储存和准 备区f标本制备区f扩增区f扩增产物分析区方向空气压 力递减的方式进行。可通过安装排风扇、负压排风装置或 其他可行的方式实现。(三) 工作区域仪器设备配置标准。1. 试剂储存和准备区。(1)28C和20 C以下冰箱。( 2)混匀器。(3)微量加样器(覆盖0.21000山)。( 4)可移动紫外灯(近工作台面)。(5)消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加 样器吸头。( 6)专用工作服和工作鞋(套)。( 7 )专用办公用品。2. 标本制备区。(1)28 C冰箱、20 C或80 C冰箱。( 2 )高速离心机。（
4、3）混匀器。（4）水浴箱或加热模块。（5）微量加样器（覆盖0.2-1000山）。（ 6 ）可移动紫外灯（近工作台面） 。（ 7 ）生物安全柜。（ 8 ）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加 样器吸头（带滤芯）。（ 9）专用工作服和工作鞋 （套）。（ 10）专用办公用品。（11）如需处理大分子DNA，应当具有超声波水浴 仪。3. 扩增区。（ 1）核酸扩增仪。（2）微量加样器（覆盖0.2-1000山），（视情况 定）。（ 3 ）可移动紫外灯（近工作台面）。（ 4）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加 样器吸头（带滤芯）。（ 5）专用工作服和工作鞋。（ 6 ）专用办公用品。4. 扩增产物
5、分析区。 视检验方法不同而定，基本配置如下：（1）微量加样器（覆盖0.2-1000山）。（ 2）可移动紫外灯（近工作台面）。（ 3）消耗品：一次性手套、加样器吸头（带滤芯）。（ 4 ）专用工作服和工作鞋。（ 5 ）专用办公用品。上述各区域仪器设备配备为基本配备，实验室应当根 据自己使用的扩增检测技术或试剂的特点，对仪器设备进 行必要的增减。二、临床基因扩增检验实验室工作基本原则（一）进入各工作区域应当严格按照单一方向进行，即试 剂储存和准备区f标本制备区f扩增区f扩增产物分析 区。（二）各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的 设备、物品不得混用。（三）不同的工作区域使用不同的工作服（例如
6、不同的颜 色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。（四）实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区f标本制备 区f扩增区f扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区 域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。（五）工作结束后，必须立即对工作区进行清洁。工作区 的实验台表面应当可耐受诸如次氯酸钠的化学物质的消毒 清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可移动紫外灯（254nm波长），在工作完成后调至实验 台上6090cm内照射。由于扩增产物仅几百或几十碱基对 （bp），对紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段必 须延长照射时间，最好是照射
7、过夜。（六）实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合实验室生物安全通用要求（GB19489-2008）。三、临床基因扩增检验实验室各区域工作注意事项（一）试剂储存和准备区。贮存试剂和用于标本制备的消 耗品等材料应当直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过 扩增检测区，试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存 在该区，应当保存在标本处理区。（二）标本制备区。由于在样本混合、核酸纯化过程中可 能会发生气溶胶所致的污染，可通过在本区内设立正压条 件，避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间 的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反应混合液的 反应管。对具有潜在传染危险性的材料，必须在生物
8、安全 柜内开盖，并有明确的样本处理和灭活程序。（三）扩增区。为避免气溶胶所致的污染，应当尽量减少 在本区内的走动。必须注意的是，所有经过检测的反应管 不得在此区域打开。（四）扩增产物分析区。核酸扩增后产物的分析方法多种 多样，如膜上或微孔板或芯片上探针杂交方法（放射性核 素标记或非放射性核素标记）、直接或酶切后琼脂糖凝胶 电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、Southern转移、核酸测序方 法、质谱分析等。本区是最主要的扩增产物污染来源，因 此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带 出。在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，必须使用洗板 机洗板，废液必须收集至1 mol/L HCl中，并且不能在实验 室内倾倒，而应当至远离 PCR 实验室的地方弃掉。用过的 吸头也必须放至 1 mol/L HCl 中浸泡后再放到垃圾袋中按程 序处理，如焚烧。由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质 如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，故应当注 意实验人员的安全防护。
