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1、多药外排系统 AcrAB药物外排泵是能将有害底物排除菌体外的一组转运蛋白， 其过量表达可引起细菌对抗生素耐药。大肠埃希菌是发现药物外 排泵最多的一种细菌，一般认为在其约30种外排泵中AcrAB TolC 外排泵是最主要的外排泵细菌耐药性的产生及扩散使新型 抗生素从一问世就面临耐药的威胁，尤为突出的是，当细菌接触 某种抗生素时，其可产生对多种结构不相关抗生素 的多重耐药， 这种表型通常是多药外排系统超表达的结果。相关研究以认识到在决定细菌对各种抗微生物制剂固有及 获得性耐药的因素中，主动外排机制居主要地位。其中 AcrAB -TolC是大肠埃希菌最主要的、占绝对优势的多药外排系统，并存在于其它肠
2、杆菌科细菌中，其与细菌对氟喹诺酮耐药及多重耐 药密切相关。AcrAB-TolC系统包括3个组分，外排转运子AcrB、周质融合蛋白AcrA和多功能外膜通道蛋白TolC，其中AcrA为连接 内膜组分和外膜孔道的脂蛋白，AcrB为药物质子转运子，TolC 为大肠埃希菌对有机溶剂耐受所必需的外膜孔道。3组分协调配 合，主动将菌体内的物质泵出细胞外。AcrABTolC外排泵过 量表达时，可对广泛应用的抗生素包括镰孢菌酸、四环素、氯霉 素、新霉素、红霉素、夫西地酸、萘啶酸、氯比西林、氟喹诺酮 类、p内酰胺类、利福平及SDS、吖啶橙、结晶紫、溴乙啶、吐 温X 一 100等多种化合物产生耐药性，因此，AcrA
3、BTolC外 排泵在革兰阴性菌多重耐药性的产生过程中发挥了重要作用。A c r R是位于a c r A B基因上游的一个阻遏子基因 的产 物，对acrAB转录起一定程度的抑制作用。AcrR突变可使a c rAB转录增加，AcrAB水平提高。AcrABTolC外排泵在最低水平表达时主要受AcrR的负向调控，其负向调控作用与AcrAB 的诱导作用无关。AcrR基因的无意义突变使AcrAB基因的表达 水平可能提高2倍；AcrR缺失时，MarA则进一步促进AcrAB 基因转录水平的增加。在我国畜牧业集约化和管理水平相对较低 的情况下，AcrR与MarR的共同突变可提高动物源性大肠埃希 菌对多种抗生素的
4、耐药性。大肠埃希菌的周质连接蛋白 MppA对AcrB的转录亦起负向调节作用。有人推测MppA可能通过减 小膜两侧质子压力差而导致转运子AcrB的能量缺乏。AcrAB的表达受MarA、SoxS和RobA的正性调控。MarA 是多重耐药（Mar）操纵子的转录激活蛋白，可促进acrAB的转 录。 MarA 与 SoxS、 RobA 的 氨基酸序列相似，它们所识别的DNA序列间有重叠,因此，SoxS、RobA可直接正性调节acrAB的转录，同时SoxS也可能通过增加marA的表达间接促进acrAB 转录。研究发现，一些尚未证实的调控因子也可上调 acrAB 表 达，其可能是 MarA、 SoxS 或
5、Rob 的同系物AcrAB 与细菌的耐药性关系密切，抑制 AcrAB 泵的活性 或降低其表达水平可使细菌对环境的适应能力及抗生素耐药水 平下降，因此，主动外排系统抑制剂的研究和开发是解决细菌耐 药问题的重要途径。只有充分认识主动外排的工作模式，才能为 寻求阻断主动外排，开创新的抗微生物方法奠定基础，这方面将 是今后的研究方向之一。AcrA是大肠杆菌外输蛋I AcrAB -TolC中的周质 融合蛋 白。 AcrAB -TolC 在机能上是统一的整体因此 AcrA 作为 AcrAB-TolC 组成的一部分，其水平基本能够反映出 AcrAB -TolC的机能水平或激活状况。已有的实验数据、研究结果和
6、理论提示， AcrAB-TolC 主 动外输系统的激活可能是导致大杆菌产生多重耐药性的主要 原因。im引物：根据 Gen Bank 中 acrA 序列设计 PCR 扩增引物，acrA的上游引物（PACR -F ）序列为5 - GGATCC TGT GAC GAC AAA CAG GCC CAACAA GGT -3位于cDNA的73 bp99 bp处；下游 引 物（PACR-R） 5 - AAG CTT TTA AGA C TT GGA CTG TTC AGG CTG -3，位于 cDNA 的 1172 bp1194 bp处，上、下游引物分别含有BamH I、Hind III 酶切点。引物由上海博亚生物技术有限公司合成。
