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1、实验二 培养基母液的配制及保存一、目的要求了解并掌握植物组织培养中 MS 培养基母液、生长调节剂母液配制与保存的 基本知识及操作规范，能根据配方准确计算各种药品的称取量。二、基本原理在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称 量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微 量元素、有机物、铁盐、激素等分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于 冰箱内保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液即可。本实 训以MS培养基为例，学习培养基母液的配制方法。三、试剂与主要用具1仪器、用具电子天平（感量O.Olg和O.OOOlg）、药匙、玻璃棒、
2、称量纸、吸水纸、滴管、 洗瓶、标签纸、烧杯（50ml、100ml、200m 1）、容量瓶（100ml、200ml、500ml、 1000ml）、试剂瓶（100mL、200mL、500ml、1000ml）、量杯、量筒、移液管、 移液枪、洗耳球、电炉、冰箱等。2试剂（1） 95%乙醇、 1mol/L NaOH、 1mol/L HCl（ 2） MS 培养基各成分试剂（3）植物生长调节剂：2， 4-D、 6-BA、 IAA、 NAA 等（ 4）洗涤剂、蒸馏水四、方法步骤1大量元素母液的配制按照MS培养基配方的需要量，将各种化合物称量扩大10倍，用电子天平称 取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可
3、稍加热。完全溶解后，按表4-1 顺序依次混合已溶解的化合物溶液，并搅拌，以免产生沉淀，注意最后加入氯化 钙溶液，混匀，用量筒定容到500ml，倒入试剂瓶中并贴好标签。保存于4C冰箱 待用。表4-1 MS 培养基大量元素母液（10倍）的配制剂量化合物名称配方用量（mg/L）kno31900nh4no31650MgSO47H2O370KH2PO4170CaCl22H2O440母液大量元素扩大母液体积倍数 （mL）10500称取量（mg）9500825018508502200配1L培养基吸取母液量（mL）2微量元素母液的配制按照MS培养基配方需要量，将微量元素各种化合物（如表4-2）扩大100倍,
4、用万分之一的电子天平分别准确称取，用少量蒸馏水溶解，也可以混合溶解，混 合后定容到500mL。将配制好的母液倒入试剂瓶中，并贴好标签，保存于4C冰 箱中。表4-2 MS培养基微量元素母液（100倍）的配制剂量母液化合物名称配方用量（mg/L）扩大倍 数母液体 积（mL）称取量（mg）配1L培养基 吸取母液量（mL）微MnSO44H?O22.31115ZnSO47比08.6430量H3BO36.2310KI0.8310050041.510元Na2MoO4.2H200.2512.5素CuSO45H2O0.0251.25CoCl26H2O0.0251.253. 铁盐母液的配制常用的铁盐是FeSO47
5、H2 O和N a2-EDTA的螯合物，必须单独配制。配制时， 按照扩大10 0倍的用量（如表4-3），分别称取FeSO47H2 O和N a2-EDTA，分别溶 解后，将Na2-EDTA溶液缓缓倒入FeSO4溶液中（需加热溶解），搅拌均匀使其充分 螯合，用蒸馏水定容到500mL后贮放于棕色玻璃瓶中，贴好标签，保存于4C冰 箱中。表 4-3 MS 培养基铁盐母液（100倍）的配制剂量母液化合物名称培养基用 量（mg/L）扩大倍 数铁盐Na2-EDTA37.3100FeSO47H2O27.8母液体 积称取量(mL) (mg)500186590配1L培养基吸取母液 量（mL）104有机物母液的配制按照
6、表4-4中各成分浓度扩大100倍后的用量，用感量0.0001g电子天平分 别称量各有机物。分别溶解定容后装入试剂瓶中，也可以混合溶解定容，装入同 一试剂瓶中，写好标签，放入冰箱中保存。一般有机物都溶于水，但叶酸（VBc） 先用少量稀氨水或1mol/L NaOH溶液溶解；VH （生物素）先用1mol/L NaOH溶液溶解；VA、VD3、Vb12应先用95%乙醇溶解，然后再用蒸馏水定容。表 4-4 MS 培养基有机物母液（100 倍）的配制剂量母液有机物名称培养基用 量（mg/L）扩大倍 数母液 体积（mL）称取量（mg）配1L培养基 吸取母液量（mL）甘氨酸2.0100有盐酸硫胺素（VB1）0.
7、15机盐酸吡哆素（VB6）0.51005002510物烟酸0.525肌醇1005000注：表中各成分的扩大倍数与称取量仅是举例，可以根据各实际需要，确定 扩大倍数、计算实际称取量。5激素母液的配制激素母液必须分别配制，浓度根据培养基配方的需要量灵活确定，一般是0.12mg/ml，根据需要确定配制的浓度。称量激素要用感量万分之一天平。配 制激素母液时应注意，各激素的溶剂不同，具体见表 4-5。表 4-5 常用植物激素及生长调节物质的溶剂中文名缩写溶齐U2, 4-二氯苯氧乙酸2,4-DNaOH/乙醇吲哚乙酸IAANaOH/乙醇吲哚丁酸IBANaOH/乙醇a-萘乙酸a-NAANaOH/乙醇6-苄基氨
8、基腺嘌呤6-BANaOH/ HCl腺嘌呤AdeH2O激动素KTHCl / NaOH玉米素ZTNaOH赤霉素GA乙醇脱落酸ABANaOH注：称取10mgNAA溶解后定容至100ml，即得到0.1mg/mlNAA贮备液。称取100mg 6-BA溶解后定容至100ml，即得到1 mg/ml6-BA贮备液。激素称配量（mg）定容体积（ml）浓度（mg/ml）6在配制母液时应注意：（1）培养基各试剂应使用分析纯，用蒸馏水溶解及定容。（2）在称量时应防止药品间的污染，药匙、称量纸不能混用，每种试剂使 用一把药匙，多出的试剂原则上不能再倒回原试剂瓶。（3）使用电子天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用洗耳球将 天平内的脏物清理干净。（4）母液配制好后，贴上标签，标明母液名称、试剂浓度或扩大倍数、配 制日期，并存放在4C冰箱中。使用前，要进行检查，若发现试剂中有絮状沉淀、 或长菌、或铁盐母液的颜色变为棕褐色，都不应再使用。五、结果与分析1 为什么要配制培养基母液？2 在配制培养基时，配制 1 升 MS 基本培养基应吸取本实验中所配制的四种 混合母液各多少毫升？3 仔细观察在配制母液过程中的现象与遇到的问题，如是否产生浑浊或沉淀，并 分析出现混浊的原因。
