过氧化物酶类活性测定药品配制

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1、1、可溶性蛋白含量的测定(1)考马斯亮蓝G250染色液称取考马斯亮蓝50mg,用25ml 95%乙醇溶解,加50ml 85%磷 酸,加水稀释至500ml,储于棕色瓶中。(2)标准蛋白溶液(0.1mg/ml)称取10mg牛血清蛋白,用0.9%的氯化钠溶解,定容至100ml。2、APX、CAT、POD、GR和IAA氧化酶的提取和酶活的测定(1)50mM磷酸缓冲液(pH7.8,含1%的PVP):A 液:Na2HPO12H2O: Mr=358.22, 0.2mol/L 溶液为 71.64g/L;B 液:NaH2PO2H2O: Mr=156.03, 0.2mol/L 溶液为 31.21g/L;取 A 液

2、(Na HPO 溶液)91.5mL 加 B 液(NaH P O 溶液)8.5mL,2424再加300mL蒸馏水,再加入4g的PVP。(2)50 mM 磷酸缓冲液(pH 7.8,内含 0.1 mM EDTA-Nq ,5 mM MgCl2):取50mM磷酸缓冲液(pH7.8)100ml,称取加入3.7224mg的EGTA-Na2,再加入 101.65mg 的 MgC。(3)20mM磷酸缓冲液(pH6.0)pH6.0 的,取 Na2HPO4 溶液 12.3mL 加 NaH2PO4 87.7mL,再加 900mL 蒸馏水。(4)EGTA-Na2+ASA 溶液(01mM EDTA-Na2,0.5mM A

3、sA):称取3.7224mg的EGTA-N和8.8065的ASA加蒸馏水溶解,定 容至100ml。(5)9mMH2O2 :称取30.618mg,加蒸馏水溶解定容至100ml。(6) 15mMHO :2 2称取51.03mg,加蒸馏水溶解定容至100ml。(7) l20mM愈创木酚:称取1.48968g愈创木酚蒸馏水溶解定容至100ml。(8) 10 mM NADPH :2(9) 10 mM GSSG:(10) 1mM2,4-二 氯酚:称取16.3mg2,4-二氯酚,用蒸馏水溶解并定容至100ml.(11) 1mM氯化锰:称取19.8mgMeCl2 - 4H2O,用蒸馏水溶解定容至100ml。(

4、12) 1mM吲哚乙酸:称取17.5mgIAA,用少量乙醇溶解,用蒸馏水定容至100ml。(13) 吲哚乙酸试剂(试剂B):2ml0.5MFeCl3溶液,100ml 35%过氯酸,使用前混合即可,避光保存。用时将1ml样品加入2ml试剂。配置0.5M的FeCl3溶液,称取3.37875g FeCl3,加水溶解定容至25ml;35%过氯酸:量取35ml过氯酸加水稀释至100ml;3、抗氧化剂的提取和测定(1) 0.3M (50g/l)三氯乙酸(TCA)溶液:称取5g三氯乙酸,用蒸馏水溶解,稀释至100ml。(2) 0.3M (50g/l)三氯乙酸(TCA)溶液:称取5g三氯乙酸,用蒸馏水溶解,稀

5、释至100ml。再称取 186mgEDTA-Na2,加入到100ml 50g/l三氯乙酸溶液中溶解。(3) 0.4%磷酸-乙醇溶液:量取0.47ml 85碱酸溶液加入到无水乙醇中,并用无水乙醇稀释至100ml o(4) 5g/lBP-乙醇溶液:称(5) 1.11mM (0.3g/l) FeCl3-乙醇溶液:称取0.03g FeCl3加入到100ml无水乙醇中,摇匀。(6) 100Pg/ml标准抗坏血酸溶液:称取10mg抗坏血酸,用0.3M TCA溶液溶解,定容至100ml,即1ml溶液含100%抗坏血酸。先用现配,保存于棕色瓶中,低温冷 藏。(7) 0.1M磷酸钠缓冲液(pH7.7):量取 89.5mlNa HPO 溶液,10.5ml NaHPO 溶液,稀释至 200ml。2424(8) 0.1M磷酸钠缓冲液(pH6.8):量取49mlNa2HPO4溶液,51ml NaHO4溶液,稀释至200ml。(9) 4mM二硫代硝基苯甲酸(DTNB )溶液:称取39.5mgDTNB,用0.1M、pH6.8磷酸缓冲液溶解,定容至25ml,混匀,4笆保存。现配先用。(10) 100MM还原型谷胱甘肽标准溶液:称取3. Img还原型谷胱甘肽,加入少量无水乙醇溶解,加蒸馅 水定容至100ml o

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