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1、药理学实验指导邵阳医专药理学教研室前言药理学既是理论科学，又是实践科学。药理学实验课是药理学教学的一个重要组成部 分。它的目的一方面是验证理论，巩固并加强对理论知识的理解；另一方面是学习和掌握 药效学与药代动力学实验的基本操作方法和技能，培养学生对科学工作严肃的态度，严密 的方法、严格的要求及科学的思维方式，学习实验设计及实验数据统计处理的有关知识， 初步具备客观地对药理学实验现象进行观察、比较分析、综合和解决实际问题的能力。从 而更深入、准确地理解和掌握药理学基本知识，指导临床合理用药；并为研究开发新药、 发现药物新用途，为其他生命科学的研究探索奠定初步基础。一、药理实验注意事项实验前 仔细
2、阅读实验指导，了解实验的目的、要求、方法和操作步骤，领会其设 计原理；结合实验内容，复习有关药理学和生理学、生化学等方面的理论知识，达到充 分理解；估计实验中可能出现的情况和发生的问题。实验时严格按照实验指导上的步骤进行操作，准确计算给药量，防止出现差错造 成实验失败；认真、细致地观察实验过程中出现的现象，随时记录药物反应的出现时间、 表现以及最后结果，联系理论内容进行思考；实验过程中要注意节约药品及实验材料， 避免造成浪费。实验后 认真整理实验结果，经过分析思考，写出报告，按时交给指导教师；整 理实验器材，洗净擦干，妥为安放。将实验后的动物按要求放到指定地点，课后认真做好 实验室的清洁卫生工
3、作。二、实验报告的书写：每次实验后应写好实验报告，交给实验教师批阅。实验报告要求结构完整、条理分明、 文字简练、书写工整，措辞应注意科学性和逻辑性。实验报告一搬包括下列几项内容： 实验题目与日期 实验目的 实验的意义所在，要做什么，用什么方法，达到什么目的 实验材料 包括动物、实验药品、主要使用仪器、也包括手术器材、玻璃器材等的 数量，及实验条件。 实验方法 步骤要清晰、使别人能看懂、能重复。如果实验方法临时有变更，或者 由于操作技术方面的原因影响观察结果时，应做简要说明。 实验结果 可用文字，也可表格或图示多种方法表示，是实验报告中重要的部分， 需保证其绝对的真实性。应随时将实验中观察到的现
4、象在记录本上记录，实验告一段落后 立即进行整理。不可单凭记忆或将原始记录搁置很久之后再做整理，这样易致实验结果遗 漏或错误。实验报告上一般只列经过归纳、整理的结果。但原始记录应保存备查。 分析讨论 应针对实验中所观察到的现象与结果，联系课堂讲授的理论知识，进行 分析和讨论。要根据实验内容详细讨论实验结果说明了什么，是否达到实验目的要求和观 察到设计的现象；各项指标说明了哪些问题；实验成功或失败的原因，应吸取的经验教训。 讨论不可脱离实验结果空谈理论，讨论中要判断实验中出现的是否为与理论相一致的预期 结果，如果属于非预期结果，则应该分析其产生的可能原因。 结论 应是简短的一两句话，实验是否达到预
5、期的目的，实验观察药物作用的结果 有无预期的药理作用。实验结论是从实验结果归纳而得的概括性判断，也就是对本实验所 能说明问题、验证的概念或理论的简要总结。实验一 药理实验基本知识与技术1实验动物的选择 首先应根据实验目的选择动物，其次要考虑动物的来源、饲养 及价格等方面条件。选择实验动物的原则应选择对被试药物或被研究物质最敏感的动物作 为实验对象，实验动物选择不当，则可导致实验得出不正确的甚至相反的结论。(1) 小白鼠(小鼠) 医学实验中应用最广泛的动物。特别适用于需要大量动物的药 物筛选、半数致死量测定、药效评价等实验研究。因其繁殖能力强，妊娠期仅为21 天，因 而也常用于避孕药的研究。由于
6、其器官易发实质性损害，常用于致畸、致癌药及抗癌药的 研究。(2) 大白鼠(大鼠) 大鼠也是较常用的实验动物，常用作亚急性和慢性毒性实验。 大鼠的血压反应比家兔好，常用来直接描记血压，进行降压药的研究。它的垂体-肾上腺 系统功能发达，可作为应激反应和肾上腺、垂体及卵巢等内分泌实验。大鼠无胆囊，因此 用其做胆管插管收集胆汁，进行消化药的研究。大鼠的踝关节对炎症反应敏感，也用于治 疗关节炎的药物研究。(3) 青蛙和蟾蜍 青蛙和蟾蜍为冷血动物又经济易得，其离体心脏对维持其正常功能 的环境条件要求低，在人工营养液、室温及pH渗透压接近于它的血液等简单条件下，蛙心 即能节律性搏动很久，因此常用于强心药物的
7、实验；其腓肠肌和坐骨神经可用来观察药物 对周围神经、横纹肌或神经肌肉接头的作用；其腹直肌还可用于检测胆碱能神经系统药物 的作用。(4) 豚鼠 豚鼠对组织胺等收缩支气管物质很敏感，常用于平喘药及抗组织胺药的研 究，以及进行过敏反应及免疫方面的实验。又因豚鼠对结核分支杆菌较敏感，也用于抗结 核药物的实验研究。(5) 家兔 家兔驯服、易得，且便于静脉注射和灌胃给药，因而广泛用于科研教学中。 常用于直接描记呼吸、血压的药效学实验及进行卵巢、胰岛等内分泌实验。家兔心脏在离 体情况下可搏动很久，是观察药物对哺乳动物心脏直接作用较合适的模型。家兔体温变化 敏感，常用于体温实验及热源检查。(6) 猫 猫有较发
8、达的神经系统和循环系统，常用于如去大脑僵直，姿势反射实验； 观察刺激交感神经、瞬膜及虹膜的反应实验，阿托品解除毛果芸香碱作用等实验。猫血压 比较稳定，观察血压反应时猫优于兔，因此猫也用于心血管及镇咳药物实验。(7) 狗 狗具有发达的血液循环和神经系统,以及基本与人相似的消化过程，因此是药 理学研究中常用的动物之一。如药物对心血管作用的实验，由于动物较大，可用于同时记 录多项指标，如血压、心电、心音、呼吸及血流量等的实验。也可用于条件反射、高血压 等慢性实验,手术造胃瘘、肠瘘以观察药物对胃肠蠕动、分泌及消化过程的影响等实验。不同种类动物对药物的反应是有差异的，不同药效反应在一定程度上可阐明药物作
9、用 机制。因此，对一些药理作用尚不清楚的药物进行研究时，最好选用几种不同动物进行实 验。宜从小动物开始，然后在如狗等大动物身上进行反复验证。2实验设计原则（1）随机原则：按照机遇均等的原则进行分组。其目的是使一切干扰因素造成的实验误 差减少，而不受实验者主观因素或其他偏性误差的影响。（2）对照原则：空白对照（指在不加任何处理的条件下进行观察对照）；阴性对照也称 假处理对照（给予生理盐水或不含药物的溶媒）；阳性对照也称标准对照（指以已知经典药 物在标准条件下与实验药进行对照）。（3）重复原则：能在类似的条件下，把实验结果重复出来，才能算是可靠的实验，重复 实验除增加可靠性外，也可以了解实验变异情
10、况。3实验动物的编号 根据动物的种类、数量和观察时间长短等因素来选择适当的标 记方法。实验用动物小鼠，一般用量大，每笼共 养个体数多，外表无显著特征可供区别，故需采 用特殊的标记方法加以区别。良好的标记方法应 满足标号清晰、耐久、简便和实用的要求。常用 的方法有染色法、耳缘剪孔法、烙印法和号牌法， 前者最常用。表 1-1编号标记图示表图 1-1 编号标记图编号1234567891326标记105947常的化学染色剂有：3%5%的苦味酸溶液 （黄色）;2%的硝酸银溶液（咖啡色）；0.5% 的中性红溶液（红色）。实验中应用最普遍的是苦 味酸染色剂。标记方法见（图 1-1）和表（1-） 所示。此方法
11、可标出1999 个编号，充分满足药 理学教学与科研的需求。4.实验动物的抓取与固定 在进行动物实验时，首先要限制动物的活动，使其保 持安静状态，以便操作和准确记录动物的反应情况， 同时还要防止被动物咬伤，并保证动物不受伤 害，这就需要掌握合理抓取、固定实验动物的 方法。图1-2小鼠的抓取与固定（1）小鼠 小鼠性情比较温顺，但抓取 时动作也要轻缓。通常是用右手抓住小鼠尾部 将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前爬行时，迅速用左手拇指和食指抓住其双耳 及颈后部皮肤，将小鼠置于左手掌心中，再用 无名指和小指将小鼠尾压在手掌上，即可将小鼠完全固定。可进行腹腔注射、采腹腔液、 测肛温、作阴道涂片等操
12、作。如（图1-2）所示。（2）大鼠 大鼠的牙齿尖锐，在惊恐或激怒时易将操作者手指咬伤，故在抓取时要 小心。抓鼠时右手轻轻抓住大鼠尾巴向后拉，左手抓紧大鼠头、颈部皮肤，并将鼠固定在 左手中，此时即可进行腹腔注射、灌胃等操作。如要做尾静脉取血、注射等操作，可将鼠 置于使用台上，用玻璃钟罩扣住或置于大鼠固定盒内，露出尾部，其他较精细的操作应在 乙醚麻醉下进行。（3）豚鼠 豚鼠胆小易惊，抓取时必须稳、准、迅速，先用手掌迅速扣住豚鼠背部， 抓住豚鼠肩胛上方，以拇指和食指扣住颈部，其余手指握持躯干，即可轻轻提起、固定。 对于体重大的豚鼠，要用另一只手托住臂部。（4）家兔 家兔比较驯服，但前爪较尖，应避免抓
13、伤。家兔的抓取方法一般是用一只图1-3兔的台式固定法手抓住兔的颈部将兔提起，然后用另一只手托其臀部。不能采取单手抓提家兔双耳、腰部或四肢的方法，以免造成双耳、颈椎或双肾的损伤。家兔固定方法可根据实验需要而定。如作兔耳静脉取血、注射或观察兔耳血管变化，可采用盒式固定方法。如要作测量血压、呼吸等实验或手术时，需将兔固定在手术固定台上，并将兔置于仰卧位（图1-3）,其头部要固定。5.实验动物的给药途径和方法 实验动物的给药途径和方法有很多种，可根据实 验目的、动物种类和药物剂型、剂量确定。（1）皮下注射法 皮下注射时用左手拇指和食指轻轻提起动物皮肤，右手持注射器将针 头斜刺入皮下，刺穿皮肤后，平行再
14、进入针头的 2/3，若见针头能在皮下摆动则证明针头 已到达给药位置，可推注药液。皮下注射进针的部位，一般在小鼠腹部两侧，大鼠为背部 或下腹部两侧，豚鼠在后大腿内侧或下腹部，家兔为背部或耳根部，狗、猫则常选用大腿 外侧。（2）肌肉注射法 肌肉注射一般选用肌肉发达、无大血管经过的部位。注射时要将针头 垂直快速刺入肌肉，回抽针芯，如无回血即可注射。家兔、狗、猫等大动物多在臂部注射 每只每次射量不超过2ml；大鼠和小鼠因体型小，肌肉少，很少使用肌肉注射，如必须肌 注常在股部注射。（3）腹腔注射法 大、小鼠的腹腔注射方法为：用左手固定动物，右手持注射器，在下 腹部左侧或右侧沿小鼠纵轴与横轴成45角刺入皮
15、下，沿皮下向心方向推进，同时保持针 头与腹平面和垂直面亦呈 45角穿过腹肌刺入腹腔，约刺入针头的 2/3 深度，此时有落空 感，回抽无肠液、尿液或血液后，缓缓推入药液（图1-4）。家兔、狗、猫等动物进行腹腔 注射时应先行固定。一般小鼠每只每次注射量不超过0.5cm，大鼠不超过2ml。图1-4小鼠的腹腔注射图 1-6 小鼠灌胃法（4）静脉注射法 大鼠和小鼠的静脉注射常采用尾静脉注射。鼠尾静脉 共有 3 根，左右两侧和背部正中各1 根，两侧尾静脉比较 容易固定，故常被采用。先将鼠装入固定器内，露出尾巴， 用4550C温水浸泡或用75%酒精擦拭使血管扩张，并可 使表皮角质软化。握住鼠尾两则，使静脉充盈，注射器针 头尽量与鼠尾角度平行，以利于进针。先缓缓推入少许药 液，如针头已进入静脉推药时感觉无阻力；如阻力较大， 并出现白色皮丘，则表示未刺入血管，应换部位重新注射。 如需反复注射，应尽量从鼠尾的末端开始，如（图 1-5） 所示。（5）经口给药法 口服法 将药物放入饲料或溶于饮水中让动物自动摄取的给药法。此法简单方便， 但是剂量不易掌握。 灌胃法 灌胃器由注射器和特殊的灌胃针头构成。小
