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1、实验六小麦萌发前后淀粉酶活性的比较姓名：班级：生工学号：56022130组员： 指导老师：吴老师、几 、前言淀粉是植物最主要的储藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业 的基本原料。淀粉经淀粉酶作用生成麦芽糖、葡萄糖等小分子物质而 被机体利用。淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。按照其水 解淀粉的作用方式，可以分成a 淀粉酶、0 淀粉酶等实验证 明，在小麦、大麦、黑麦的休眠种子中只含有0 淀粉酶淀粉酶， a 淀粉酶是在发芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发淀粉酶的种子 和幼苗中，这两类淀粉酶都存在。其活性随萌发时间的延长而增高。 本实验以淀粉酶催化淀粉生成还原的性糖的速度来测定酶的活力，淀 粉
2、水解 成还原性糖，还原性糖能使 3， 5二硝基水杨酸还原成棕色 的 3氨基 5硝基水 杨酸。可用分光光度计法测定， 2(C6H10O5)n + nH2 nC12H22O11。一、实验目的学习分光光度法测定酶活力的原理与方法 了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化二、实验原理淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。实验证明，在某些植 物如小麦、大麦的休眠种子中只含有0 -淀粉酶，a -淀粉酶是在发 芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发的种子和幼苗中，这两类淀粉酶 都存在。其活性随萌发时间的延长而增高。本实验以淀粉酶催化淀粉生成麦芽糖的速度来测定酶的活力。麦 芽糖是还原性糖，能使3， 5-二硝基水杨酸还原成
3、棕色的 3-氨基 5-硝基水杨酸，后者在 500 nm 处有最大吸光度，而进行定量测定。三、实验主要试剂与器材：-实验仪器：（1） 20mL试管7支 （2）不同量程移液管若干（ 3） 可见分光光度计（ 4 ）离心机（ 5 ）恒温水浴（ 6 ）研钵（7）移液枪实验用品：（ 1）小麦种子（休眠和萌发各十颗）（ 2） 1%氯化钠溶液（ 3 ）标准麦芽糖（ 4） 0.2%淀粉溶液（ 5 ） 3 ， 5- 二硝基水杨酸溶液（6）0.02 mol/L 磷酸缓冲液四、实验操作步骤： 麦芽糖标准曲线制作取7支干净的具塞刻度试管，编号，按下表加入试剂：试剂管号1234567麦芽糖标准液（ml）00.20.40.
4、81.21.62.0蒸馏水（ml）2.01.81.61.20.80.403, 5-二硝基水杨酸2222222摇匀摇匀，置于沸水浴中煮沸 5 min 。取出后流水冷却，加蒸馏水 定容至 20 m L 。以 1 号管作为空白调零点，在 500 nm 波长下比 色测定。以麦芽糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线2、萌发小麦种子浸泡小麦种子 24h ，入 25C 恒温箱或在室温下发芽。3、提取小麦萌发前后的酶液（1）幼苗酶的提取：取萌发的幼苗10 株，入研钵加石英砂0.2 g，1 % NaCI 3 ml,研磨成匀浆，0-4 C 下放置 20 min。离心，2000 r/min10 min .
5、测定上清酶液的总体积。 （2）种子酶的提取：取干燥种子10粒作对照，操作方法同上。4、二硝基水杨酸法测定酶活力量取待测酶液1 ml, pH6.9的0.02moI/L磷酸缓冲液稀释10倍，作为酶活力测定物。取 6 根试管按下表加各物质：表 2试剂试吕编号1/2 （种子酶稀释液）3/4 （幼苗酶稀释液）5/6（空白管）V （稀释溶液）/ml0.50.5V（0.2%淀粉溶液）/ml111V （蒸馏水）/ml0.5混匀各管，40 C恒温水浴，水解3 min，加入1% 3，5-二硝基水杨酸溶液2 ml。入沸 水浴，准确加热5 min，迅速冷却至室温，加水稀释至20 ml，混匀。测定各管的 A500nm
6、值五、实验数据处理：1、标准曲线的测定：以麦芽糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。（已知标准麦芽糖浓度为 3.6mg/mI）麦芽糖含量（mg）吸光度值000.720.0461.440.1912.880.4694.320.7665.760.9367.21.262标准曲线：2、小麦干种子酶及幼苗酶分解淀粉产生的麦芽糖的光吸收值：试管编号123456吸光度值0.2340.2190.4680.51600平均值0.2270.4920其中 1、2 号管是小麦干种子，3、4 号管是小麦幼苗，5、6 号管属于 空白管。将上面实验数据带入标准曲线直线方程即可计算出对应的麦芽糖含 量：所以小麦干种子的麦
7、芽糖含量:A=（0.227+0.0447）/0.1784=1.52mg 小麦幼苗中的麦芽糖的含量：B= （0.492+0.0447） /0.1784=3.01mg 其对应麦芽糖浓度分别为:小麦干种子的麦芽糖浓度： C1=1.52/20=0.076mg/ml小麦幼苗中的麦芽糖浓度： C2=3.01/20=0.151mg/ml3、计算酶活力单位总酶活力单位二（C酶一C0）X n X V酶式中： C 酶为种子酶或幼苗酶分解淀粉产生的麦芽糖的浓度mg/ml）；CO为表2中空白管的麦芽糖浓度;n 为酶溶液稀释的倍数；V酶为提取酶液的总体积（ml）。设在40 C、pH 6.9的条件下，3 min内水解淀粉
8、释放1 mg麦 芽糖所需要的酶量为1个活力单位（U）。由上述计算公式：种子酶总酶活力单位二（C酶一CO）X n X V酶=（ 0.076-0） *10（20/0.5）*4.6=140（ u）幼苗酶总酶活力单位二（C酶一C0）X n X V酶=（ 0.151-0） *10（20/0.5）*5.0=302（ u）六、实验思考题：1、为什么提取酶液的过程应该在0-4 C下进行？测定淀粉酶活性时 为什么要在40 C条件下水解淀粉？答：提取酶液的过程在0-4 C下进行是为了保护酶蛋白，防止其在较 高温度下变性，甚至滋生微生物对其进行分解。测定淀粉酶活性时在40 C条件下水解淀粉是因为酶活性相对于 温度是
9、一个先上升后下降的曲线，在40度左右酶活性最高，因此在 40 度下进行该实验时所得的数据较为准确。2、小麦萌发过程中淀粉酶活性升高的原因和意义是什么？ 答：原因：因为它需要能量,而产生淀粉酶,更多的生产出糖分来进行 一系列活动,呼吸,光合等作用；意义：小麦种子在萌发过程中淀粉酶活力升高的直接结果是淀粉 的水解增多，那么就可以提供较多的能量供应萌发时候的细胞分裂以及细胞生长使用，同时还能够为细胞的生命活动提供原料。能够更快 地将储存的有机物中的能量释放出来，保证萌发过程能量供应充足。七、参考文献：1、课前预习 ppt2、淀粉酶、DNS与还原糖作用原理百度百科3、小麦萌发前后淀粉酶火星的比较实验报告 ppt八、特别鸣谢：感谢实验前吴老师的详细的讲解实验内容，及实验一些的注意事项再者还有实验过程中学长的指导帮助，还有组员在实验中的配合帮忙。
