菌落总数实验报告1

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1、禾阳金谷泉理农展韦限公司检验报告实验名称：菌落总数的检验 实验方法：平板计数法商品名称：夸夸唔、有友、奇爽、乐棒 棒、香猪脆、香脆肚。参照标准：GB4789-17 2011总负责人：熊经理检验人员：徐恒琴、崔艳霞、游惠检验时间：2011年7月26 8月6号2011年8月8日菌落总数的检测平板计数法一、实验目的为了进一步了解与熟悉我们产品的操作规范和关键点的控制，掌握菌落总数的检验方法和了解超净工作台的操作规范。二、实验仪器设备和所需试剂及试剂的配制。1 、实验仪器及设备杀菌锅YXQ-LS SU编号5090、无菌超净工作台SV CJ- IC编号24、JJ-Z型组织捣碎机、隔水或智能恒温培养箱GH

2、 9080、出厂编号13475、烘箱ZFD 5040（全自动型鼓风干燥箱）、蒸馏水制备机、灭菌过 的250ml锥形瓶、1ml吸量管、10ml的吸量管、酒精灯、锥形瓶1000ml、 培养皿、电子天平 AL104电磁炉、锅、锅铲、PH试纸、恒温水浴锅 HH 4出厂标号。2、试验试剂及配制主要试剂：琼脂、无菌生理盐水、无菌水、75%勺酒精、1moL/L氢氧化钠、1moL/L的盐酸。药品试剂琼脂：准确称取胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、琼脂、蒸馏水2500ml, 加入至锅中煮沸溶解，先加入琼脂将其熬化，在加入其它样品，直至样品 熬化即可关掉火，冷却后调解 PH值（左右即可）。酸性用氢氧化钠调节、 碱性用盐

3、酸进行调节，将在1200C高压灭菌15min即可。无菌生理盐水：准确称取氯化钠溶于 1000ml蒸馏水中无菌水：吸取1000ml的蒸馏水，将在1200C高压灭菌15min即可。1moL/L氢氧化钠：称取40g的氢氧化钠溶于1000ml的蒸馏水中在 1200C高压灭菌15min即可。75%的酒精：分别吸取400ml的95%勺无水乙醇和100ml的蒸馏水与 500ml的容量瓶中。1moL/LDE盐酸：移取浓盐酸90ml,用蒸馏水稀释至1000ml,在120C 高压灭菌15min即可。三. 试验步骤1、样品的稀释固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225 ml磷酸盐缓冲液 或生理盐水的无菌均质杯

4、内，8000 r/min10000 r/min 均质1 min 2 min，或放入盛有225 ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质 器拍打1 min2 min，制成1:10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取 25 ml样品置盛有225 ml磷酸盐缓冲 液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中， 充分混匀，制成1:10的样品匀液。36 C 1 C 48 h 2 h.2、检样与接种：25 g（ml）样品+225 ml稀释液，均质，10倍系 列稀释选择2个3个适宜稀释度的样品匀液，各取 1 ml分别加入 无菌培养皿内。用1 ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 ml，

5、沿管 壁缓慢注于盛有9 ml稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不 要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。.按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释 一次，换用1次1 ml无菌吸管或吸头。.根据对样品污染状况的估计，选择 2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸 取1 ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。3 、倒平板：在酒精灯开着的条件下进行到培养皿的3分之一即可，而其中琼脂的温度需要在 46 C即可倒入琼脂，不然

6、会影响其细 菌的生长繁殖。平板计数琼脂培养基，混匀4、培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36 C 1 C培养48 h 2 h。水产品30 C 1 C培养72 h 3 h。如果样品中可能含有在琼 脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄 层琼脂培养基（约4 ml ）,凝固后翻转平板，5、报告6. 菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和 相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units , CFU表示。6. 1选取菌落数在30 CFU300 CFU之间、无蔓延菌落生长的 平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数

7、，大于 300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。6. 2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到 平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板 后乘以2,代表一个平板菌落数。6. 3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条 单链作为一个菌落计数。7结果与报告菌落总数的计算方法若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两 个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（ml）样品中菌落总数结果。若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按

8、公 式（1）计算：N=刀 C/（Ni+d （ 1）式中：N样品中菌落数；艺C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；ni第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d稀释因子（第一稀释度）。上述数据按数字修约后，表示为 25000或X 104。若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300 CFU,则对稀释度最 高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均小于 30 CFU,则应按稀释度最低 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则 以小于1乘以最低稀释倍数计算。若

9、所有稀释度的平板菌落数均不在 30 CFU300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300CFU时，则以最接近30 CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。菌落总数的报告菌落数小于100 CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数 报告。菌落数大于或等于100 CFU时，第3位数字采用“四舍五入” 原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数 形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报 告。四

10、、数据处理及结果计算、乐棒棒菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白1细菌菌落数2细菌菌落数3细菌菌落数100373938100058010000000若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g(ml)样品中菌落总数结果。所以：N=37+38+39/3 X 10N=380 个/g二、奇爽菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白123100267281295100044342910000406若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式(1)计算：N=刀 C/(Ni+d ( 1)式中：N样品中菌落数;艺C平板（含适宜范

11、围菌落数的平板）菌落数之和；ni第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d稀释因子（第一稀释度）。N=267+281+295+44+34+29/（3+X 3）X 10N=2879个/g三、香猪脆菌落总数的数据分析结果1稀释倍数平板个数空白123100576034100012感杂410000001若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（ml）样品中菌落总数结果。所以：N=57+60+34/3 X 10N= 503个 /g结果2稀释倍数平板个数空白123100576034100012感杂41

12、0000001若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g(ml)样品中菌落总数结果。所以：N=36+35+12/3 X 10N=243 个/g四、夸夸唔菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白12310045233665010005311884100001587若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g(ml)样品中菌落总数结果。所以：N=53+118+84/3 X 100N= 8500五、有友菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白1231001721000

13、感杂感杂010000000只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g(ml)样品中菌落总数结果。所以：N=1+7+3/3 X 10N=33个/g六、香脆肚菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白123100131444376100015812113610000434755若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式(1)计算：N= 刀 C/（Ni+d （1）式中：N样品中菌落数；艺C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；ni第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d稀释因子（第一稀释度）。N=158+121+136+43+47+55/【3+X 3x 10-1N=16969五、数据分析。通过一系列的实验论证表明：自己的贴牌产品的菌落总数含量 较高，而其中香脆肚的菌落总数的含量更高，而泡椒风爪的菌落总 数都控制的都较好。因此，在以后的生产过程中药控制好贴牌产品 的环境和杀菌效果。菌落总数对环境的要求较高需要在无菌的条件 下进行，以免被污染。在倒平板时要注意琼脂的温度，温度控制在 46 C左右。还有在放入培养箱之前要将凝固好的琼脂倒置，以免水 蒸气影响其结果。