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1、地龙冻干粉效价测定方法学的验证1、概述为了符合 2010 年版 GMP 的要求，为了确保生产检验出符合预定治疗用途的产 品，确保产品质量控制合格，保证用药的有效性，本报告针对地龙冻干粉效价测 定方法学进行验证。2、验证目的 建立地龙冻干粉效价的测定方法，确认该方法适合于该品种的效价检查。3、适用范围本标准适用于地龙冻干粉效价测定方法学的验证。4、验证领导小组成员及职责部门及职务验证工作中职务职责公司副总经理验证领导小组组长负责领导验证工作，负责验证方案及报告 的批准。质监部经理验证小组组长负责协调领导验证工作，负责验证方案审 核、验证报告的审核等各项工作。QC主管组员验证方案、验证数据的审杳、
2、验证工作协 调安排。QC组员负责取样及提供验证所需检测数据。QC组员负责收集各项验证、实验记录，并对试验 结果进行分析。QA组员验证过程监督检杳，确保结果可靠性。设备员组员负责仪器、设备、仪表、量具等的校正。采购员组员负责试药、试剂、设备、对照品的购买。5、验证进度计划验证小组提出完整的验证计划，经批准后实施。从年月日至年月日6、相关文件国家食品药品监督管理局标准(蚓激酶) ；国家食品药品监督管理局标准WS361 (Z-047) -2003 (Z)； 2010年版药典一部附录XWA中药质量标准分析方法验证指导原则；实验室控制系统 GMP 实施指南第 11 章分析方法的验证和确认；药品生产验证指
3、南第三篇第一章检验方法验证；药品生产质量管理规范(2010年修订）第四章第四节分析方法验证。7、验证内容7.1 为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施 仪器：已经过校正并在有效期内 人员：均经过培训，熟悉方法及使用的仪器 对照品：均购自中国食品药品鉴定研究院 材料：所用材料，包括试剂、实验用容器等，均符合检验要求，不给实验带来污 染、误差。检查人： 日期： 确认人： 日期：7.2 验证方法7.2.1 效价测定方法7.2.1.1 试剂配制 磷酸盐缓冲液（PH7.8）取磷酸氢二钠21.4g,氯化钠5.26g，加水900ml，用1mol/L盐酸调节PH值至 7.8，再加水至 1000m
4、l。 （牛）纤维蛋白原溶液取70u纤维蛋白原，加磷酸盐缓冲液（PH7.8） 20ml，水浴微热使溶解。用 时取 20ml。 （牛）纤维蛋白溶酶原取12u纤维蛋白溶酶原，加磷酸盐缓冲液（PH7.8）12ml使溶解，制成每1ml含1酪蛋白单位的溶液，用时取3ml。 （牛）凝血酶溶液取70u凝血酶，加磷酸盐缓冲液（PH7.8） 7ml使溶解，用时取3ml。 琼脂糖溶液取琼脂糖330mg，加磷酸盐缓冲液（PH7.8）25ml,加热使溶后体积为20ml，置55 C水浴中恒温待用。7.2.1.2纤维蛋白板的制作将、按顺序依次加入混匀，迅速倒入水平放置的平皿（8.5cmX 23.5cm）中，若有气泡，可在未
5、凝固之前，用小钢铲将气泡赶走，待其凝固后， 盖上盖，放4C冰箱保存1小时后，取出，此板即为标准纤维蛋白板。7.2.1.3 检测取地龙冻干粉约10mg,加水制成每1ml含1mg的溶液作为供试品溶液。取 蚓激酶标准品，制成浓度分别为每1ml中含10000和8000蚓激酶单位的溶液。用直径约为 3mm 的不锈钢小管，在纤维蛋白板上打若干个小孔，精密量取蚓激 酶标准品溶液和供试品溶液10山，分别点在小孔中，将板水平放入37C恒温箱 中保温 18 个小时后，取出，测得各溶圈直径并计算出溶圈面积。以蚓激酶标准 品单位数与溶圈面积的比值为计算系数，乘以供试品的溶圈面积，计算供试品效 价单位数。标准品与供试品
6、应各作两点，以平均值计算。7.2.2 耐用性试验7.2.2.1 不同琼脂糖对试验结果的影响按照效价测定方法测定，批地龙冻干粉的效价，分别用 2个批号的琼脂糖铺板。a、可接受标准干扰较小b、验证实施记录和结论表 1 不同琼脂糖的检测结果琼脂糖批号样品效价（u）样品效价（u）结论：检验人：日期：复核人：日期：7.2.2.2 不同纤维蛋白溶酶原对试验结果的影响按照效价测定方法测定，批地龙冻干粉的效价，分别用 2个批号的纤维蛋白原。a、可接受标准干扰较小b、验证实施记录和结论表 2 不同纤维蛋白原的检测结果纤维蛋白溶酶原批号样品效价(u)样品效价(u)结论：检验人： 日期： 复核人： 日期：7.2.3
7、 准确度试验取蚓激酶对照品加水，制成每1ml含蚓激酶分别为10000, 8000, 5000u的对 照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液8M点样，每个浓度各分别点样3次。 按效价测定方法检测并计算回收率。7.2.3.1 可接受标准回收率为95.0-105.0%，回收率RSDW5.0%7.2.3.2 验证实施记录及结论检验人：日期：复核人：日期：表 3 蚓激酶加样回收率对照品浓度(u/ml)点样 次数理论效价(u)测得效价(u)回收率()RSD (%)1000012380001235000123结论：7.2.4 重复性和中间精密度试验取供试品溶液（批号 ），由两位检测人员按照效价测定方法，测定样
8、 品中蚓激酶的效价。每人检测 6 次记录检测结果。将各 6 组数据进行对比求出平 均值，再求出重复性 RSD 值，将两人的检测结果进行对比求出 12 组数据的平均 值，再求出中间精密度 RSD 值。7.2.4.1 可接受标准重复性RSDW5.0%，中间精密度RSDW5.0%。7.2.4.2 验证实施记录及结论表 4 效价检测结果次数检测结果1 （u）检测结果2（u）123456平均值（u）重复性RSD值（）总平均值（u）中间精密度RSD值（）结论：检验人：日期：复核人：日期：7.2.5 专属性试验阴性对照溶液：水溶液10p l对照品溶液：10000u/ml的蚓激酶溶液10p l空白回收溶液：水
9、溶液10p l+10000u/ml的蚓激酶溶液10p l7.2.5.1 可接受标准阴性对照无干扰。7.2.5.2 结论检验人： 日期： 复核人： 日期：7.2.6 线性范围取蚓激酶对照品加水，制成每lml含蚓激酶分别为10000, 8000, 5000u的对照 品溶液。分别精密吸取上述10000u/ml对照品溶液9M, 8M,和上述8000u/ml对照 品溶液9M,8M,以及上述5000u/ml对照品溶液10M, 8M, 6M点样，测定溶圈直 径，并计算出溶圈面积。以点样量(u )为横坐标，溶圈面积(mm2)为纵坐标求 得回归方程。7.2.6.1 可接受标准相关系数r$0.9807.2.6.2
10、 验证实施记录及结论积面圈溶点样量与溶圈面积的关系图160.00140.00120.00100.0080.0060.0040.0020.000.0030.00 40.00 50.00 64.00 72.00 80.00 90.00表 5 线性范围检验结果1234567点样量(u)溶圈面积(mm2)图 1 点样量与溶圈面积关系的线性关系图点样量6 / 7结论：检验人： 日期： 复核人： 日期：8、偏差分析 在验证过程中，应严格按照验证方案进行操作和判定。8.1指标全部符合标准，无偏差。匚8.2当出现偏差时，应按偏差处理操作规程(S0P-ZL-00-009)进行处理：针对偏差应展开调查分析，对于确认是因操作不当等自身原因造成，应重新进行测试。序号偏差处理办法123确认结果是否达到标准是匚1否检查人：日期：确认人：日期：9、验证结论结论人： 日期：10 、再验证10.1 当分析方法发生较大变更需要再验证；10.2 在日常监测中发现分析方法异常需进行再验证；10.3 再验证时应按照前期验证采用的方法对地龙冻干粉效价测定方法学进行再 验证，或根据实际情况修订补充验证方案后进行再验证。
