Waters高效液相色谱仪标准操作规程

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1、5.1 目 的5.2 描 述 Waters 高 效 液 相 色 谱 仪 标 准 操 作 规 程 。5.3 适 用 范 围5.4 化 验 室 5.5 责 任 者5.6 化 验 员 应 严 格 遵 照 该 操 作 规 程 , QC 主 管 负 责 监 督 本 规 程 的 实 施 。 5.7 定 义5.8 HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高 效 液 相 色 谱 仪 。5.9 安 全 注 意 事 项5.10 有 机 溶 媒 有 害 健 康 ， 各 溶 剂 瓶 口 应 封 严 。 5.11 注 意 检 查 废 液 桶 中 废 液 应 避 光 ，

2、 防 止 废 液 桶 满 外 溢 。5.12 规 程 5.13 Waters HPLC的 组 成 ： 贮 液 器 输 液 泵 自 动 进 样 器 分 离 柱 (柱 温 箱 ) 紫 外 检 测 器 控 制 及 数 据 处 理 系 统(Breeze化 学 工 作 站 )。5.14 HPLC系 统 的 打 开 及 关 闭 顺 序 5.15 打 开 顺 序 5.16 对 于 分 体 式 ： 请 按 总电源、放射性物质检测器、检 测 器、泵 、 进 样 器 、 柱 温 箱 、的 顺 序 打 开 开 关 ， 待 各 部 分 分 别 显 示 初 始 化 完 毕 后 ， 最 后 打 开Breeze化 学 工

3、作 站 。5.17 泵 与 色 谱 工 作 站 的 连 接：对 于 510 泵，因 为 此 泵 与 色 谱 工 作 站 是 单 向 联 系 ， 如 要 使 泵 在 Remote 状 态 下 由 工 作 站 控 制 ， 首 先 要 在 泵 的 键 盘 上 按 Menu 键 ， 待 显 示 屏 切 换 至 Mode 状 态 下 ， 其 状 态 是 Loca ，按 Edit/Enter 键 ，在 Local 的 L 前 有 闪 动 的 光 标 显 示，按 键， Local 转 换 成 Rem， 再 按 Edit/Enter 键，此 命 令 已 输 入 进 去, 最 后 按 Stop/Run 键， 使

4、 泵 处 于Run 状 态 这 时 泵 和 工 作 站 的 连 接 即 告 成 功。 泵 的 任 何 动 作 都 可 由 工 作 站 来 控 制。还 应 注 意 这 一 步 工 作 在 每 次 开 机 时 都 要 进 行。5.18 对 于 Alliance 2690 系 统 ： 先 打 开 Alliance 2690 主 机 、 检 测 器 电 源 开 关，待 初 始 化 完 毕 后 ，再 进 入 Millennium 32 化 学 工 作 站。 5.19 对 于 流 动 相 的 要 求：对 于 液 体 试 剂 应 尽 量 采 用 色 谱 纯 试 剂； 对 于 所 用 到 的 固 体 试 剂

5、应 采 用 分 析 纯 试 剂； 对 于 水，应 采 用 经 纯 水 机 处 理 过 的 超 纯 水； 流 动 相 在 使 用 前 一 定 要 经 0.45mm 的 滤 膜（ 滤 膜 分 为 水 相 膜 与 有 机 相 膜， 确 保使 用 正 确 的 滤 膜， 参 见 附 表 ) 过 滤、超 声 真 空 脱 气 方 可 使 用， 严 禁 含 盐 的 流 动 相 未 经 过 滤 直 接 使 用。5.20 应 养 成 良 好 操 作 习 惯：5.21 规 范 操 作 ， 树 立 保 护 HPLC 整 套 系 统 的 概 念 ，尤 其 对 于 输 液 泵、色 谱 柱、检 测 器，在 使 用 后 应

6、及 时 冲 洗，以 免 污 染 而 使 其 寿 命 缩 短 或 损 坏，尤 其 如 操 作 者 使 用 了 含 盐 的 流 动 相， 更 应 注 意 清 洗 的 步 骤： 首 先 用 脱 过 气 的 纯 水 在 流 速 为1ml/min 左 右 冲 洗 3060 分 钟 ， 再 用 含 50 以 上 甲 醇 或 乙 腈 的 水 溶 液 以 相 同 的 流 速 冲 洗 2030 分 钟 左 右。5.22 如 要 卸 下 柱 子， 在 经 过 上 述 冲 洗 过 程 之 后，再 经 纯 甲 醇 或 乙 腈 以1ml/min 的 流 速 冲 洗 20 30 分 钟，柱 子 卸 下 后 应 马 上 拧

7、 紧 柱 堵。5.23 流 速 的 变 化 应 采 用 阶 梯 式 递 增 或 递 减 的 方 式， 启 动 泵 时， 应 在 2 分 钟 之 内 由 小 流 速 慢 慢 增 大 到 所 需 的 流 速， 泵 关 闭 时 亦 然( 流 速 递 减)。 切 忌 流 速 的 骤 变。5.24 关 闭 顺 序 5.25 首 先 退 出 Millennium 32化 学 工 作 站， 再 关 闭 系 统 的 其 他 部 分 。 5.26 Millennium 32化 学 工 作 站5.27 Millennium 32色 谱 管 理 系 统 是 集 数 据 采 集 、 处 理 、 HPLC系 统 的 控

8、 制 、 结 果 的 管 理 、 报 告 的 打 印 为 一 体 的 综 合 系 统 。 下 面 就着 重 介 绍 该 系 统 的 基 本 操 作 知 识 。 5.28 Millennium 32化 学 工 作 站 的 进 入 5.29 打 开 化 学 工 作 站 ， 系 统 自 动 进 入 Program Manager界 面 ， 双 击 Millennium 肖 像 ， 这 时 进 入Millennium界 面 ， 双 击 Session Manager 图 标 ， 系 统 将 自 动 初 始 化 ， 以 使 工 作 站 和 HPLC整 套 系 统 进 行 联 接 。 初 始 化 后 ，

9、按 系 统 要 求 键 入 你 的 User Name和 Password， 这 时 你 已 进 入 该 系 统 。 5.30 Project的 进 入 和 建 立 5.31 Project的 进 入： 在 Session Manager窗 口 下 ， 击 Project肖 像(或 从 View中 选 择 Projects), 在 其 中 有 已 建 好 的 Project， 双 击 你 所 需 的 Project肖 像 ， 再 进 行 你 想 做 的 工 作 。 5.32 Project的 建 立 5.33 从 File中 选 择 New， 即 显 示 New Project的 画 面 。

10、5.34 在 Project Name 中 输 入 你 的 Project 名 称 。 5.35 在 Initiallze Project 项 目 中 选 择 Copy 中 的 filter and fields 或 Methods。5.36 在 From Project 中 选 择 要 拷 贝 的 现 存 Project。 5.37 选 择 Tablespace size。 5.38 选 OK， 存 贮 并 退 出 。 5.39 当 Millennium 软 件 在 建 立 一 个 新 的 Project 时 ， 在 屏 幕 上 及 时 显 示 出 完 成 建 立 新 Project 的 百

11、 分 比 。 当 达 到 100% 时 ， 在 SessionManager 画 面 即 出 现 一 个 新 的 Project 肖 像 。5.40 收 集 数 据 的 一 般 过 程 5.41 使 用 Millennuium32收 集 数 据 的 一 般 过 程 如 下 ：在 Project 窗 口 内 建 立 收 集 数 据 所 需 仪 器 的 仪 器 方 法； 建 立 包 括 此 仪 器 方 法 的 方 法 组 ； 使 用 此 方 法 组 收 集 数 据 。5.42 本 部 分 包 括 ： 建 立 仪 器 方 法 ， 建 立 方 法 组 ， 收 集 样 品 。 5.43 建 立 /修 改

12、 仪 器 方 法 5.44 从 Sessoin Manager窗 口 ， 打 开 所 需 的 Project。 5.45 选 择 Method 按 钮 ， 现 存 的 方 法 的 肖 像 即 出 现 在 屏 幕 上 。5.46 从 命 令 菜 单 中 选 择 File， 然 后 选 择 其 中 的 New Instrument Method， 即 出 现 System Open 对 话 框 。 5.47 在 目 录 中 选 择 收 集 数 据 需 要 使 用 的 色 谱 硬 件 系 统 的 名 称 ， 如 ： System_1。 按 OK， 这 时 Instrument Method 窗 口

13、即 显 示 出 来 。 5.48 窗 口 的 上 部 分 是 该 系 统 的 所 有 仪 器 的 肖 像 。 用 鼠 标 器 将 需 要 设 定 仪 器 参 数 的 仪 器 部 件 激 活 ， 然 后 在 仪 器 肖 像 上 双 击 两 下 ， 即 出 现 Instrument Dialog Box 画 面 。 5.49 对 各 个 部 件 设 置 操 作 条 件 ， 或 通 过 输 入 新 的 参 数 来 更 改 以 前 的 参 数 。 例 如 ： 定 义 泵 参 数 ， 先 双 击 SIM/PCM 的 肖 像 。 填 写 泵 参 数 ， 按 OK。5.50 当 所 有 参 数 设 置 完

14、成 后 ， 按 OK。 即 回 到 Instrument Method 窗 口 。 选 File 中 的 Save As 存 贮 仪 器 方 法 文 件 ， 如 有 需 要 ， 起 一 文 件 名 ， 按 OK。 5.51 选 择 File 中 的 Exit， 即 回 到 Project 窗 口 。 新 的 仪 器 方 法 肖 像 即 出 现 在 此 窗 口 下 。5.52 建 立 方 法 组 (Method Set)5.53 仪 器 方 法 编 好 后 ， 必 须 存 于 一 方 法 组 中 ， 才 能 在 Quick Set Control 中 调 用 。 5.54 在 Project 窗

15、 口 下 选 方 法 肖 像 。 5.55 选 File 中 的 New Method Set， 即 显 示 出 Method Set 对 话 框 。 5.56 在 此 画 面 的 Instrument Method 一 栏 ， 选 择 已 确 定 的 仪 器 方 法 。 其 他 项 目 可 空 着 不 填 。 然 后 选 File， Save As。 输 入 方 法 组 名 后 ， 按 OK。 5.57 选 File， Exit。 即 退 回 到 Project 窗 口 。 新 设 置 的 方 法 组 肖 像 即 出 现 在 此 窗 口 下 。 5.58 收 集 样 品 ：完 成 以 上 各 步 骤 后 ， 即 可 收 集 样 品 。 5.59 在 Project 窗 口 下 选 择 Quick Set Control 肖 像 。 出 现 System Open 对 话 框 。5.60 选 择 建 立 仪 器 方 法 时 确 定 的 色 谱 硬 件 系 统 ， 按 OK。 即 出 现 Quick Set Control 窗 口 。 5.61 在 此 窗 口 下 的 Sam