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1、良性前列腺增生组织中IL-8、IL-6以及IFN-的表达研究 中英文及缩写对照英文缩写 英文名称 中文全称 良性前列腺增生一白细胞介素一一白细胞介素一?干扰素一下尿路病症 国际前列腺症状评分?样受体?。 一结合受体蛋白? 信号转导蛋白前列腺特异性抗原。慢性前列腺炎 慢性骨盆疼痛综合征维生素受体磷酸盐缓冲液、良性前列腺增生组织中 以及 的表达研究中文摘要目的:探讨白细胞介素一,、白细胞介素一,以及干扰素一,?在正常前列腺组织和良性前列腺增生组织 ,中的表达水平及临床意义。材料与方法:.实验标本:尸解后正常前列腺标本:经尿道前列腺电切术,的患者标本。以上患者均未罹患前列腺肿瘤及其他泌尿系统肿瘤。.
2、实验分组:正常前列腺组例岁,良性前列腺增生组例。.用免疫组织化学方法检测各标本中、以及的表达情况。结果:例中阳性表达例%;对照组例正常前列腺组阳性表达例%。在组中表达明显高于正常前列腺组织中的表达尸.。 例中阳性表达例.%;对照组例正常前列腺组阳性表达例%。在组中表达明显高于正常前列腺组织中的表达尸.。例中?阳性表达例.%;对照组例正常前列腺组?阳性表达例%。在组中表达明显高于正常前列腺组织中的表达.。例组织中与,与的表达有显著。性相关关系.。结论:的发生开展足多因素共同参与的结果,、以及?在中表达水平明显上调,与以及与之间均具有正相关性,提示它们的高表达在的发生开展中起协同作用,进一步说明炎
3、症在发病机制中的作用,为以后治疗提供新的靶点。硕士研究生:罗庚泌尿外科学指导教师: 王友宝教授关键词:良性前列腺增生;白细胞介素;白细胞介素:干扰素一、.丫:?一、一一, ., .: ? . . , .一、一 ?.:一,%. , 一% . ,.%一 . 一 , ?。?。一. .,.%。 .,?% . 尸. .? 一 一.:?. 一? 一。 , .: .: ;目录弓言第一章材料和方法?.标本收集?.主要仪器与试剂?“.实验方法?第二章结果.一、一和?在正常前列腺组织与组织中的表达.一及在组织中表达的相关性分析.及在组织中表达的相关性分析?第三章讨论?.?.结论;?附图 参考文献综麦盎 攻读学位期
4、间的研究成果?:致谢 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明?引言引言 良性前列腺增生是一种老年男性常见病,随着社会老龄化,发病率逐年增加,给老年男性带来相应临床病症,可以从轻微的排尿不适到肾功能衰竭。的发病机制主要关于激素、生长因子、细胞凋亡等方面,涉及多个环节和因素。到目前为止,我们对于的细胞和分子水平的病理机制没有确切的认识,而且对于如何引起病症的产生的机制也不明确。尽管雄激素和雌激素所起的作用已经被证明,但是单纯通过性激素来解释前列腺增生的开展过程仍然是不够的。目前研究发现慢性炎症在发病机制中也起重要作用。故需要进一步研究其发病机制,用于临床指导疾病的预防和治疗。目前研究发现与前
5、列腺增生症有关的炎症细胞因子主要包括,以及?等。其中家族包括、和等,他们的受体均有公有链。通过免疫组化分析,在正常的前列腺上皮细胞中可微量标记至。但是在组织中基质细胞和上皮细胞均可大量发现,尤其是上皮细胞中。可以推澳主要由上皮细胞分泌。属于趋化性细胞因子家族中的亚族,前列腺基质细胞和上皮细胞均可分泌,其主要功能为趋化并激活中性粒细胞,趋化嗜碱性粒细胞及细胞,刺激血管生成,还可直接促进前列腺上皮细胞和基质细胞的增殖。的增多会募集更多的白细胞以应对感染或者损伤,维持了慢性炎症的状态。目前研究发现是的细胞因子中检测前列腺炎具有代表性的生化指标,并且可以区分/ 和/,也是炎症过程中的一个重要媒介。与前
6、列腺液中的白细胞具有高度相关性。也有研究发现,乩一的水平与前列腺组织的老化有高度相关性。且可促进前列腺上皮细胞和基质细胞的增生。可通过上皮一基质相互作用促进上皮细胞增生,该作用取决于基质细胞对的反响及其含量。本研究同时对增生前列腺组织中的细胞因子、?进行检测,以明确其在良性前列腺增生发生机制中的作用。并将炎症细胞因子与组织学、临床症状进行相关分析,了解其与临床病症的关系。以探讨良性前列腺增生的病因。材料与方法第一章材料与方法.标本收集、实验组:收集青岛海慈医疗集团泌尿外科年月一年月间住院,术前予以评分,手术切除并经术后病理证实的前列腺增生症患者的蜡块标本,对,有完整的临床资料例进行研究。、对照
7、组:对照组选取例尸解后正常前列腺标本。实验组与对照组标本均经%的中性多聚甲醛固定,石蜡包埋并常规切片。.主要仪器与试剂.主要仪器自动石蜡包埋机德国全自动组织浸腊脱水机 日本切片机?德国组织切片烤片机一日本恒温烤箱上海跃进医疗器械厂型光学显微镜日本恒温水浴箱江苏仪器厂移液器芬兰普通冰箱青岛海尔一.主要试剂兔抗人多克隆抗体购自北京博奥森生物技术兔抗人多克隆抗体购自北京博奥森生物技术兔抗人多克隆抗体购自北京博奥森生物技术检测试剂盒购自北京中杉金桥生物技术显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术青岛大学硕士论文抗原修复缓冲液购自北京中杉金桥生物技术柠檬酸抗原修复缓冲液购自北京中杉金桥生物技术磷酸盐缓冲液购自
8、北京中杉金桥生物技术磷酸盐缓冲液 ,:.:由磷酸盐.粉剂购自北京中杉公司加双蒸水配制而成。其它试剂有:不同浓度的乙醇溶液如%,%,%,%,二甲苯,.%的苏木素溶液,双蒸水,中性树胶等。.实验方法.抗原修复方法、以及均采用抗原热修复法。.石蜡切片及染色观察、固定。将行术后的标本取出约.大小,放入浓度为%的中性多聚甲醛中固定。、脱水。将已固定好的组织投入%的乙醇,;%的乙醇,;%的乙醇,;%的乙醇,;无水乙醇,;,每次,以保证脱水干净。、透明。放入至/酒精/甲苯中,再放入到二甲苯中,两次,每次为?具体的时间视情况定,在二甲苯中,当组织呈现棕黄或者暗红乞透明即可。、浸蜡。透蜡前应先将蜡融化,放入到熔
9、蜡箱箱内所用石蜡的熔点为,将已经透明组织放入/:甲苯/石蜡的混合液中,再放入纯蜡中进行透蜡,两次,第一次为,第二次为时浸蜡至组织柔软适中即可。所用的固定液、二甲苯、酒精、石蜡体积均为组织块体积的倍以上。、包埋。将熔化好的石蜡注入到包埋筐中,待底面的石蜡稍稍凝固时,用热的镊子夹取材料与方法组织放入到包埋筐中央,要切的面朝向盒子的底部。将病理号清楚的记录在包埋筐的一侧,待石蜡冷却完全后小心剥出蜡块,并修整好蜡块的边缘,以备切片。、切片、展片与贴片切片:将蜡块固定于切片机上,调整刻度指针至 ,左手握转轮把柄,摇转切片机,右手执毛笔托住石蜡组织切片,随着切片机的转动,毛笔慢慢转动将蜡片展开,挑断蜡片后
10、轻轻放于水浴中。展片与贴片:用多聚赖氨酸处理好的载玻片从水浴中将蜡片捞起,并放于的电热板上,待载玻片上的水分流下后,置于烘箱中烘烤、时,储藏在切片盒中。、染色脱蜡:二甲苯中,二甲苯中,无水乙醇中,无水乙醇中,%的乙醇中,%的乙醇中,%的乙醇中,%的乙醇中,蒸馏水中。苏木精液染色,流水冲洗苏木精液。分化与蓝化。%的盐酸乙醇分化;稍水洗。伊红染色。%的乙醇中;%的乙醇中;.%的伊红染液中。洗涤。%的乙醇中,根据染色结果调整。%的乙醇中,时间长短视伊红染色的情况而定。假设伊红染色深,那么浸泡时间长;假设伊红染色浅,那么浸泡时间。短。脱水,透明,封片。无水乙醇中;无水乙醇中;后二甲苯中;后二甲苯中。待
11、切片稍干后中性树胶封片;自然风干或烤干,显微镜观察。.免疫组织化学步骤如下:青岛大学硕士学位论文、石蜡切片置于恒温烤箱中烤片小时,常规经二甲苯、脱蜡各。、石蜡切片置于梯度酒精%、%、%、。%分别浸泡、石蜡切片置于自来水洗 .冲洗次,溶液.,。每次、除去溶液,每张切片上加%的过氧化氢溶液 ,以阻断内源性过氧化物酶活性,室温下孵育。、将石蜡组织切片置于溶液., .中冲洗次,每次。、抗原修复、及抗原的修复:采用柠檬酸抗原修复缓冲液高压热力修复法,即将石蜡组织玻片置于装有柠檬酸抗原修复缓冲液.,.的切片缸中,再浸泡于高压锅内已沸腾的柠檬酸缓冲液.,.中,盖上锅盖,继续加热到高压锅喷气持续分钟,移开热源
12、冷却至室温?。、取出石蜡组织切片,置于溶液., .中冲洗次,每次、除去溶液,每张切片加%羊血清工作液室温封闭分钟,倾去,勿洗。、除去溶液后,每张切片参加约 第一抗体使其覆盖所有的组织第一抗体的浓度经预实验,均采用:稀释,以溶液替代一抗作阴性对照,室温下孵育时。、取出石蜡组织切片,置于溶液., .中冲洗次,每次,、除去溶液后,每张切片参加 第二抗体使其覆盖所有组织,室温孵育。、取出石蜡组织切片,置于溶液., .中冲洗次,每次。、除去后,每张切片参加 新鲜配制的显色试剂显色,显微镜下控制显色,以背景不着色而特异性显色较好为准,达最正确效果后,蒸馏材料与方法水冲洗,终止反响。、石蜡组织玻片经苏木素复
13、染,然后自来水冲洗。、石蜡组织玻片经%盐酸酒精溶液浸泡秒,然后自来水冲洗。、石蜡组织玻片经.%氨水返蓝提插?次,然后自来水冲洗。、石蜡组织玻片放入梯度酒精溶液中各分钟%的酒精;%酒精;%的酒精;无水乙醇:、石蜡组织玻片放入二甲苯、二甲苯溶液中透明,每次分钟:、用中性树胶封固石蜡组织玻片。注:室温。.免疫组化对照的设立阳性对照:购置各指标阳性切片作阳性对照,结果阳性。阴性对照:用液代替一抗孵育阳性切片作阴性对照,结果阴性。.结果判定根据参考文献来确立三种细胞因子的判定标准。、一主要在前列腺上皮细胞基底部表达,腺泡内也有少量表达,前列腺间质及浸润的炎症细胞上也有表达,具体表现为胞浆、腺泡内呈棕黄色
14、颗粒。?主要在前列腺上皮细胞内表达,胞浆内可见大量棕黄色颗粒。黄色颗粒为阳性表达。在双盲条件下,由两名病理科的中级及以上医师对标本进行观察,每个标本随机选择个高倍镜视野倍,结果判定采用半定量积分分级。标准如下:按染色强度评分:分为无色,分为淡黄色,分为棕黄色,分为棕褐色。再按阳性细胞所占百分比评分,阳性细胞数:分为阴性,分为阳性细胞%,分为%,分为%,分为%。积分为以上两项的和,分级标准为:分为阴性一,分为弱阳性,?分为阳性,?分为强阳性,其中和判定为阳性。.统计学处理青岛大学硕士学位论文.统计学处理以.件进行所有的数据处理及分析,指标之间的阳性率比拟以及关联性分析均采用检验,.有统计学意义。嘉;。驴,套曩心。奠点一噙谤憾,公,。.。努射矿,嘉。;,.,墓,.结果第二章结 果. 、 在正常前列腺组织与组织中的表达、和?的阳性表达均表现为细胞浆及腺泡内棕黄色颗粒。在正常前列腺组织中,阳性表达多为淡黄色且多表达在上皮细胞基底部;在组织中
