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1、无菌操作注意事项体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成功或失败的首要 条件。即便使用设备完善的实验室。若实验者粗心大意，技术操作不规范 ,也会 导致污染。因而，为了在一切操作中为最大可能的保证无菌。每一项工作都必须 做到有条不紊和完全可靠。【培养前准备】在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。 根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所（培养 室、超净台）内，然后开始消毒。这可以避免开始实验后，因物品不全往返拿取 而增加污染机会。【操作野消毒】无菌培养室每天都要用 0.2%的新洁尔灭拖洗地面次（拖布要专用）。紫外 线照射消毒30-5
2、0min,超净工作台台面每次实验前要用75%酒精擦洗。然后紫 外线消毒30min。在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线, 消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置,否则会遮挡射线降低消毒效果。一 些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用 75%酒精擦洗后置于台内同 时紫外线消毒。【洗手和着装】原则上和外科手术相同。平时仅做观察不做培养操作时,可穿装细胞培养室 内紫外线照射30min的清洁工作服。在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱 内,应着长袖的清洁工作服,并于开始操作前要用 75%酒精消毒手。如果实验 过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手。进入原
3、代培 养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。【火焰消毒】在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时,首先要点燃酒精灯或煤气灯。以 后一切操作,如按装吸管帽、打开或封闭瓶口等,都需在火焰近处并经过烧灼进 行。但要注意：金属器械不能在为焰中烧的时间过长,以防退火,烧过的金属镊 要待冷却后才能挟取组织,以免造成组织损伤。吸取过营养液后的吸管不能再用 火焰烧灼,因残留在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜,再用时会把有害物带入营 养液中。开启、关闭长有细胞的培养瓶时,火焰灭菌时间要短。防止因温度过高 烧死细胞。另外胶塞过火焰时也不能时间长,以免烧焦产生有毒气体,危害培养 细胞。【操作】进行培养时,动作要准确敏捷,但
4、又不必太快,以防空气流动,增加污染机 会。不能用手触及已消毒器皿,如已接触,要用火焰烧灼消毒或取备品更换。为 拿取方便,工作台面上的用品要有合理的布局,原则上应是右手使用的东西放置 在右侧,左手用品在左侧,酒精灯置于中央。工作由始至终要保持一定顺序性, 组织或细胞在未做处理之前,勿过早暴露在空气中。同样,培养液在未用前,不 要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口。吸取营养液、 PBS、 细胞悬液及其它各种用液时，均应分别使用各自的吸管，不能混用，以防扩大污 染或导致细胞交叉污染。工作中不能面向操作野讲话或咳嗽，以免唾沫把细菌或 支原体带入工作台面发生污染。操作前用酒精擦拭超净台面及双手。手或相对较 脏的物品不能经过开放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液时如吸管尖碰到瓶口， 则应将吸管丢掉。
