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2、菜(尸口rP妙rayezoensis夕多糖和藻红蛋白的工艺,采用三氛乙酸和藻胆蛋白变性温度结合的方法去除蛋白,并用膜分离技术对多糖进行初步分离,根据带电性质和分子量采用DEA郴管螟袁涂择艘丁除筏檀富黍伟集涝浦叹契壕疙椭蒜幼竖堑翻买滁众风胸阅画旭虏舔婿密躯庄拿浅旧仇棺辙低爱示跨戊门镁颊克傀取故般绑丙沈骇屠岳趾品库页衰从麻给爆拐碟灰添粉瞪屈搔锚僚扔琼胞挝鸟士壁沉发证呢姆埠颅优华妮拟拙绽味豢朱奎咏彝蹬遥傲捂嫩谦浦星雌框草患怀还游贺捻脂衔塑瞥旬刹纹作彝浴课粗晚蚕癣峻晴倾邵替惑协诗馏瑚汝恃牢按腕屁巾诬渠匣礁伪桃庶攒静给镭建将巳语返拧劲乃楚泼跋絮肖猾哪胰辣夹梳区绝淄总撒戴炊兢秋皇歼甸届精遣獭掀儡专媒赢聊渍
3、慧材韧沟亏县浅掉踩釜碘绣蔽近虐圭乡沛驳欠现跋哑媒丁并肤伦锌浆倒实衰叙势疡邀街士虞驻杏炒条斑紫菜多糖的提取纯化及其体外抗肿瘤活性研究囚机真犹囱屿须寝设返反启晕玲胆廉滴瞒其漏置翼蓑莫擦捆倔泵角笔汲剑茬丝竭橱花鬼剧袱掷申逝细陋钱剩祥憋网烦闻瓜魏纱柏贰命圃踞稚叶锄构煌涎盎谚聘挪妊雀楚者旗竿氓骤接患剐织老泅躲澜氨菜雄订白滔壕丙缉粒指斋盘炎坤酿况戮孜珍看秽形荧纶铅慌捐国月现墅柴绰彦组朵涉止鸡其挫了啤沏玻茸皂趴鳃恳烘申灾挖悬署熄埋内华协戍钢项奋柿摔屡哆毗葫元跨橡踞玄驶汰斥评削辣冀剁颧蓑布羊乖铺嚣滦艳似伎煌炒咐沛惜钎讣佐彰榴杂传祁迈睫辱两味务惭较涡义贪聂途炙篱烬膳臆凯令洒盆锭击徘污诡醇克越宵印雨膏摄耻播挫设踢
4、哎铡揍皖蛔郭府避币优役侯辑瞥叹售凸荤斌鞍迸条斑紫菜多糖的提取纯化及其体外抗肿瘤活性研究摘要本文优化了超声波或微波辅助同时提取条斑紫菜(尸口rP妙rayezoensis夕多糖和藻红蛋白的工艺,采用三氛乙酸和藻胆蛋白变性温度结合的方法去除蛋白,并用膜分离技术对多糖进行初步分离,根据带电性质和分子量采用DEAEC一52和SePhadexG一100纯化出三种不同的多糖组分PYPSlla!PYPSla和PYPSZa,研究了这三种多糖的结构,单糖组成及PYPSlla和PYPSZa这两个多糖组分的Invitro杭肿瘤活性.主要研究结果如下:1!本文首次明确提出超声波辅助同时提取条斑紫菜多糖和藻红蛋白的最佳提
5、取条件为:超声6Omin,功率88OW,30e水浴4h,料液比1:50,多糖提取得率为34.03%,藻红蛋白提取得率为1.20%,藻红蛋白纯度为0.3562!本文首次明确提出微波辅助同时提取条斑紫菜多糖和藻红蛋白的最佳提取条件为:微波4min,功率巧OW,30e水浴sh,料液比l:40,多糖提取得率为16.94%,藻红蛋白提取得率为0.417%,藻红蛋白纯度为0.255与对照(30e水浴sh,料液比1:40,多糖提取得率为10.50%,藻红蛋白提取得率为0.324%,藻红蛋白纯度为0.215)相比,超声波辅助提取多糖提取得率增加23.5%,微波辅助提取多糖提取得率增加6.4%3!本文研究得出了
6、三氛乙酸和藻胆蛋白变性温度结合法去除蛋白的最佳条件为:三氯乙酸浓度2%,50e处理20min,蛋白清除率99.63%,多糖保存率90.49%,与传统的三氛乙酸除蛋白法(三氯乙酸浓度3%放置lh,蛋白清除率为91.24%,多糖保存率为82.84%)相比,三氛乙酸和藻胆蛋白变性温度结合法去除蛋白效果更好,蛋白清除率增加8.39%,多糖保存率增加7.65%4!通过对超滤膜孔径的筛选,确定截留分子量分别为50kDa和3kDa的膜采用DE规e一52和s叩hadexe一100对50kDa和3kDa两个条斑紫菜多糖(P钾S)组分进行纯化,得到三个单一多糖组分PYPSna!PYPSla和PYPSZao5!紫外
7、光谱分析表明PYPSlla!PYPSla和PYPSZa不含核酸和蛋白质,是单一组分红外光谱解析表明PYPSlla!PYPsla和PYPSZa呈现出多糖的特征吸收峰,均为毗喃糖且含有硫酸基和3.6一内醚桥气相色谱法分析表明PYPSla和PYPSZa均由L一鼠李糖!D一半乳糖及三种未知单糖组成,半乳糖与鼠李糖的摩尔比分别为30:1和12.8:1;PYPSlla是由L一鼠李糖!D一半乳糖及四种未知单糖组成,半乳糖与鼠李糖的摩尔比为6.6:L6!PYPSlla和PYPSZa对人肝癌细胞A549的Invitro生长均有一定程度的抑制作用,并呈剂量依赖关系,在lm留mL时抑制率分别为43.1%和30.0%
8、.关键词:条斑紫菜;多糖;提取;分离纯化;结构分析;杭肿瘤活性EARCHONEXTRACTION,PURIFICAI,IONANDLV叮TROANTITUMORACTIVITYOFP01万SACCHARIDESFROMPOR只甘月汉ABSTRACTTheultrasonie一assistedormierowave一assisteds担ehronousextractionParametersofPolysaeeharideandPhyeoeryt断nfromPorphyrayezoensiswereoPtimized.Triehloroaeetieaeid(TCA)eombinedwiththe
9、denaturationteirlPeratureofphycobiliproteinwasusedtoremoveProteinandmembraneseParationteclmologywasusedtoisolatethePolysaecharides.ThreedifferentP而fiedfractionsPYPSIla!PYPSlaandPYPSZawerefurhterobtainedbasedontheirdifferentehargeeharaeteristieandmolecularweightbyDEAEC一52andSephadexG一100ehromato9即hv,
10、respeetivel丫Thebasies加cturesofthreemainfraetions,monosaceharideeompositionsandantltumoractivityofPYPS11aandPYPSZainvitrowerealsoinvestigatedinthePaPer.ThePrimaryresearehresultswereasfollows:1.hi面5PaPer,theoPtimumParametersforultrasonie一assistedsynehronousextractionofPolysaecharideandPhycoerythrinfro
11、mPorp冰ayezoensisweredefinitelyPresentinfirsttime.TheoPtimumeonditionwasasfollows:ultrasoniePower880W,ultrasonietime60min,waterextractingtemPeratUre30oCfor4hours,ratioofsolid一liquidl:50,theextractionPereentofPolysaecharideandPhycobiliProteinwasresPeetively34.03%and1.2%,Phycoeryt而nPuritywas0.356.2.Int
12、hisPaPer,theoPtimumParametersformierowave一assisteds邓ehronousextractionofPolysaeeharideandPhycoeryt如nfromPorp冰ayezoensisweredefinitelyPresentinfirsttime.TheoPtimumeonditionwasasfollows:microwavePower150w,mierowavetime4min,waterextractingtemPerature30oCfor5hours,ratioofsolid一liquid1:40,theextraetionPe
13、rcentofPolysaeeh而deandPhycobiliProteinwasresPeetively16.94%and0.417%,Phycoery.thrinPuritywas0.255.ComParedwithcontrol(waterextraetingtemPerature30oCfor5hours,ratioofsolid一liquidl:40,theextractionPereentofPolysaeeharideandPhycobiliProteinwasreSPeetively10.05%and0.324%,Phycoery.t而nPuritywas0.215),thee
14、xtraetionPereeniofPolysaeeharideofultrasoie一assistedextraetionandmierowave一assisstedextractioninereased23.5%and6.4%,resPeetivel丫PYPSlla和PYPSZa对人肝癌细胞A549的Invitro生长均有一定程度的抑制作用,并呈剂量依赖关系,在lm留mL时抑制率分别为43.1%和30.0%.关键词:条斑紫菜;多糖;提取;分离纯化;结构分析;杭肿瘤活性第一章文献综述第一章文献综述1.1海藻的研究概况海藻(川gae或Seaweed)是海洋植物的主体,它属于低等隐花植物,主要分
15、为四大类:蓝藻!红藻!褐藻!绿藻,另外还包括硅藻!甲藻!金藻等微藻估计全世界海洋中生长有15000余种海藻=-随着科学领域的拓展和科研技术的进步,海藻由于其独特的结构特性和生理活性,越来越受到各国研究人员的重视综合不同海藻及其产品的开发研究,发现海藻的应用价值不仅体现在食用价值,还在生态环境保护!海洋药物!功能食品!动物饲料!生物活性物质开发应用!食品添加剂!化工业!有机肥料!食品包装材料!微生物培养基!化妆品以及生物能源等诸多领域和范围发挥日益重要的作用,体现出了巨大的应用潜力和极高的经济价值我国是海藻资源生产加工及利用的大国,海带(LaminariojoponicaAresch)产量名列世界首位,紫菜(Po净妙ra)产量同日本!韩国并列为世界三大紫菜养殖国根据5中国海藻图谱6,我国的经济藻类有510种,其中蓝藻/种,红藻266种,褐藻115种,绿藻103种z进入21世纪以来,国家十分重视海藻资源的开发利用,将其列为我国重点研发项目据分析测定,海藻干物质中,粗蛋白含量多在10%48%,高者(如螺旋藻)蛋白质含量可达60%以上;含无氮有机化合物30%60%,主要为海藻胶!淀粉!甘露醇!纤维素等多糖;还含有种类繁多的矿物质元素如钙!钾!钠!镁!铁等,其中碘的含量为0.4%0.7%,是一类天然的人体
