《观察细胞骨架实验报告》由会员分享，可在线阅读，更多相关《观察细胞骨架实验报告（13页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.观察细胞骨架实验报告篇一：洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告 洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告 吴若自然科学大类 单周四119 XX/11/17一、实验目的：1. 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法。2. 认识细胞骨架的形态，联系细胞骨架的功能。二、实验原理：细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。广义的 细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞 外基质。根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不 同可分为微丝、微管和中间纤维。细胞骨架对于维持细胞的 形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信
2、号传导和细 胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂TritonX-100的 缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质 抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马 斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。三、操作步骤：1. 取洋葱内皮表层膜1cm2(可多取两片)左右置于含 2mlPBS液的小皿中湿润5min后，吸去PBS2. 向小皿中加入 1.5mlTritonX-100(1%)，浸没 20min后，吸走 TritonX-1003. 向小皿中加入2mlMbuffer浸没置于摇床上5min，重 复两次后，吸走Mbuffer4. 向小皿中加入105ml戊二醛（3%）
3、，浸没30min后， 吸走戊二醛5. 向小皿中加入2mlPBS，浸没置于摇床上5min，重复 两次6. 取出表皮平铺于载玻片上，滴加100微升，静置 100min后吸取染料7. 向表面滴加蒸馏水洗涤后用纸巾洗去液体，重复两 次8. 盖上盖玻片，擦去残余液体，用光学显微镜观察并 拍照记录四、实验结果：如图所示，洋葱内表皮细胞轮廓清晰可见，细胞壁及其 分界明显可见。可观察到线性纤维交织而成的网状结构，同 一细胞内各处骨架密集度不均匀，细胞核区域纤维较密集，蓝色较重。调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切 面的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维立体结构的形式 分布在整个细胞内。五、思考题：1. 简述细胞
4、质骨架的基本类型及结构特征 答：微管： 中空的圆筒状结构，直径为18nm25nm,构成微管的主要成 分是微管蛋白。这种蛋白有两个亚基，即a，B亚基它们成 螺旋形排列。进化高度保守。微丝：由肌动蛋白组成的直 径约为7nm的骨架纤维，单体形式的球形肌动蛋白聚合形成 纤维形肌动蛋白，在微丝结合蛋白的辅助作用下形成微丝高 级结构，行使功能。中间纤维：中空的骨状结构，直径介于微管微丝之间， 具有明显的组织细胞特异性，基本结构为一个中央a螺旋杆 状区辅以两侧大小和化学组成不同的端区。2. 本实验观察到的蓝色纤维主要是哪种细胞骨架？ 答：应为微丝和中间纤维。3. 考马斯亮蓝染色方法的优缺点。答：优点：反应相
5、对迅速，其结合物在室温下1h内保 持稳定，试剂配置简单，操作简便。缺点：用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，仍有一些 物质干扰此法的测定。六、实验讨论：1. 观察和分析细胞骨架的意义？答：细胞骨架是细胞结构的重要组成部分，也是细胞行 为与功能的重要调节系统，观察和分析细胞骨架的性质与变 化将帮助我们更好地认识和研究细胞性质、功能与机制。2. 考马斯亮蓝是一个理想的细胞骨架染料吗？本实验的优点和缺点是什么？答：不是，特异性荧光染料可能更好。本实验优点是反 应相对迅速，其结合物在室温下1h内保持稳定，试剂配置 简单，操作简便。缺点是无法直观分辨微管，微丝和中间纤 维等。篇二：实验四 细胞骨架观察实验
6、五细胞骨架观察一、实验目的了解用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观 察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。二、实验原理细胞骨架（cytoskeleton）是指细胞质中纵横交错的纤 维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管（MT， 20 25nm）、微丝（MF，5-7nm）和中间纤维（IF，8 11nm）。 它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和 物质运输等起重要作用。光学显微镜下细胞骨架的观察多用1% Triton X 100 （聚乙二醇辛基苯基醚，是一种非离子型表面活性剂或称去 污剂）处理细胞，可使细胞膜和细胞质中的蛋白质和全部脂 质被溶解抽提掉，而细胞骨架系统的蛋
7、白质不受破坏被保存， 经戊二醛固定，考马斯亮兰R250（Coomassie brilliant blue R250是一种蛋白质染料）染色后，用光学显微镜观察，可以 见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。微管不够稳定，其 他类型纤维太细，无法分辨，只能观察到由微丝组成的微丝 束（40nm）为网状结构。M缓冲液使细胞骨架中的微丝保持 稳定，在M缓冲液中，其中咪唑是缓冲剂EGTA和EDTA螯合 Ca离子，溶液并提供Mg离子，在低钙条件下，骨架纤维保 持聚合状态并且较为舒张，便于观察。三、实验仪器、材料和试剂（一）仪器、用具：光学显微镜，镊子，剪刀，试管， 载玻片，盖玻片，培养皿，烧杯。（二）材料：新鲜
8、洋葱鳞茎。（三）试剂：1. 2%考马斯亮蓝R250染色液：0.2g考马斯亮蓝R250 粉加入甲醇46.5mL、冰醋酸7mL、蒸馏水465mL。2. 磷酸缓冲液（pH 6.8） : 0.2149g Na2HPO4 12H2O、 0.0816g KH2PO4 加入 100ml 蒸馏水。3. M 缓冲液（pH7.2）50mmol / L 咪唑，50mmol/L）氯化钾、 0.5mmol / L氯化镁、1mmol/L乙二醇（a-氨基乙基）醚四乙酸、 0.1mmol/L乙二胺四乙酸；1mmol/L巯基乙醇，调至pH 7.2。4. 1%TrionX-100（聚乙二醇辛基苯基醚）：0.5ml 100% Tr
9、itonX-100 加入 M 缓冲液 49.5ml。5. 3%戊二醛：6mL25%戊二醛加入磷酸缓冲液44mL。四、实验方法与步骤1. 用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片 约1cm2大 小若干片），置于50mL烧杯中，加 入pH6.8磷酸缓冲液， 使其下沉；2. 吸去磷酸缓冲液，用1%TritonX100处理20min。3. 吸去Triton X100，用M缓冲液洗3次，每次5min。4. 用3%戊二醛固定30min。5. 磷酸缓冲液（pH 6.8）洗3次，每次5min。6. 0.2%考马斯亮蓝R250染色10min。7. 蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上，加盖玻片， 于普通光学显微镜下观
10、察。8. 如果染色效果好，则可依次用50%乙醇、70%乙醇， 95%乙醇、正丁醇、二甲苯处理样品，各5min，然后将样品 平展于载玻片上，加一滴中性树胶，盖上盖玻片封片，制 成永久切片。五、结果光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见（如图）， 细胞壁及其分界明显10X10倍镜下可粗略观察到细胞内粗 细不等的蓝色纤维、团块形成的网状结构。同一细胞内各处 骨架的密集度不均匀，细胞核区域的纤维相对密集，蓝色浓 重，甚至分辨不出网络结构，另外可见细胞壁区域有零星蓝 色纤维分布；相邻细胞的密集程度基本一致，但有少数细胞 有较大不同。10X40倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构确实由线 性纤维交织成，纤维
11、间的结合点稍膨大。细胞边缘骨架较稀 疏，但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的细胞质膜的轮廓， 与细胞内部的纤维通过纵向的纤维相连。相邻细胞有纤维穿 过胞间的细胞壁。调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面 的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维立体结构的形式分 布在整个细胞内。篇三：细胞生物学实验报告实验一：细胞的形态观察及其大小测量一、实验目的：1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察， 了解细胞的形态及其显微结构；2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。二、实验材料和仪器：小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片； 普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片； 盖玻片。三
12、、实验步骤：(一)细胞形态观察1、动物细胞的观察(1)人肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。（2）鸡血细胞涂片的观察：观察血细胞的组成；红细 胞、白细胞、血小板的形态特点。2、植物细胞的观察（1）取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉 细胞的基本结构。（二）细胞的大小和测量1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目 镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺 分度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺（如目镜测微 尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦），使两尺左边的 一直线重合，然后由左向
13、右找出两尺另一次重合的直线。4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。 按下式计算目镜测微尺每格等于多少m：镜台测微尺的格数目镜测微尺每格的微米数=X10目镜测微尺的格数四、实验结果：1、目镜校正：40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.242、细胞大小的测量：五、作业与思考：1、血细胞按含量高低，主要含有：红细胞，白细胞， 血小板。白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。红细胞：主要 的功能是运送氧。白细胞：主要扮演了免疫的角色，当病 菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵 部位，将病菌包围，吞噬。血小板：止血过程中起着重要作 用。细胞形态见下图。2、植物细胞一
14、般比动物细胞大一些。形态图见下。3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小基本一致， 但有一些偏差。放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的 两点视野距离更大，而更容易测量准确。实验二：PAS (Periodic Acid Schiff)反应显示糖原和其它多糖物质一、实验目的1、熟悉PAS法原理及操作步骤；2、观察PAS反应的染色结果，并观察多糖在组织细胞 中的分布。二、实验原理多糖是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。一些 不溶性的多糖构成植物和动物的骨架，如植物的纤维素和动 物的甲壳素，一般称为结构多糖。另一些多糖在生物体内作 为能量贮存，如淀粉（植物）和糖元（动物），在需要时可 以通过生物体内
15、酶系统的作用分解，释放出单糖。三、实验用品：过碘酸酒精溶液、Schiff试剂、亚硫酸水溶液、苏木精 溶液、二甲苯、100%乙醇+二甲苯（1： 1）。梯度乙醇溶液：100%, 95%, 90%, 80%, 70%, 50% 各两份，一份用于脱腊复水，一份用于脱水。载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜、小烧杯、胶头滴 管、镊子、刀片、土豆；小鼠肝细胞石蜡切片。四、实验步骤：（一）土豆切片的观察制作土豆徒手切片过碘酸处理1530min70%乙醇 1minf schiff试剂15min f 亚硫酸水漂洗23次f 蒸 馏水漂洗f镜检（二）小鼠肝细胞切片的观察取鼠肝石蜡切片 f 二甲苯脱蜡约10min f 二甲苯 +100%乙醇（3 min）f梯度乙醇脱二甲苯，在各浓度乙醇（100%, 95%, 90%, 80%, 70%, 50%）中约 23 min f 过碘酸 氧化1530 min f蒸馏水漂洗 f Schiff试 剂1530 min f亚硫酸水漂洗23次f蒸馏水漂洗f苏木精染色10 min -流水冲洗一梯度乙醇脱水(50%,70%, 80%, 90%, 95%, 100%),在各乙醇浓度中约23 min 一100%乙醇+二甲苯
