《萤光共振能量转移》由会员分享，可在线阅读，更多相关《萤光共振能量转移（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、QQC88K03E8C8XXXMUUC8$WOJU关于“荧光共振能量转移”荧 光 共 振 能 量 转 移 （ fluorescence resonance energy transfer，FRET ）是一种高效的光学“分子尺”，是研究活细胞生理 条件下蛋白质与蛋白质相互作用的方法之一。一、 FRET 原理：荧光共振能量转移是指两个荧光 发色基团在足够靠近时，当供体分子吸 收一定频率的光子后被激发到更高的 电子能态，在该电子回到基态前，通过 偶极子相互作用，实现了能量向邻近的 受体分子转移（即发生能量共振转移）。 当供体荧光分子的发射光谱与受体荧 光分子的吸收光谱重叠，并且两个分子的距离在10n
2、m范围以内时, 就会发生一种非放射性的能量转移，即 FRET 现象，使得供体的荧光 强度比它单独存在时要低的多（荧光猝灭），而受体发射的荧光却大 大增强（敏化荧光）。、实例：例如要研究两种蛋白质a和b间的相互作用，可以根据FRET原理构建融合蛋白当蛋白质a与b没有发生相互作用时，CFP与YFP相距很远不能发生荧光共振能量转移，因而检测到的是CFP的发射波长为476nm的荧光；但当蛋白质 a 与 b 发生相互作用时，由于蛋白质 b 受蛋白质 a 作 用而发生构象变化，使 CFP 与 YFP 充分靠近发生荧光共振能量转移， 此时检测到的就是 YFP 的发射波长为 527nm 的荧光。将编码这种融合蛋白的基因通过转基因技术使其在细胞内表达， 这样就可以在活细胞生理条件下研究蛋白质-蛋白质间的相互作用。三、 PRET 技术的应用此外，RRET主要有以下重要应用：1、检测酶活性变化（1）活细胞内检测蛋白激酶活性（2）关于 细胞凋亡的研究；2、关于膜蛋白的研究（1）受体激活效应在细胞膜上的横向扩 散（2）膜蛋白的定位修饰；3、细胞膜受体之间相互作用；4、细胞内分子之间相互作用。
