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1、实验3液相色谱法测定酚含量一、实验目的1. 了解现代液相色谱分析技术及其仪器的主要流程。2. 熟悉本实验所用仪器的基本操作。3. 掌握高效液相色谱法定性定量分析的基本方法。二、实验原理高效液相色谱的基本原理与气相色谱相似，仅流动相为液体，且溶质在流动相中的纵向 扩散可以忽略。对于液一液色谱法来说，若流动相极性小于固定相的极性，这种情况成为正相液液色 谱法。反之，若流动相极性大于固定相的极性，则称为反相液一液色谱法。液一液色谱法属 于分配层析类型，即利用各组分在两相中分配系数K的差异而实现分离：CK = qcm式中c、c分别代表各组分在固定相与流动相中，分配达到平衡时的浓度。分配系数大的组 分，
2、保留值大，流出色谱柱慢。液相色谱法中，流动相的种类对分配系数有较大的影响。高效液相色谱仪一般由四部分组成：高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。高效液相色谱法的定性、定量分析方法与气相色谱法基本相同。液相色谱定量比较常用 的是标准曲线法，是一种简便、快速、准确的定量方法，所不足的是每次试样分析的色谱条 件和进样量要完全一致。三、仪器和试剂1. 仪器：高效液相色谱仪，超声波清洗器，100p L微量注射器，试样过滤膜。其他基本信息：色谱柱C18，流动相(100%甲醇)，流量(0.5mLmin-i)，检测器(紫 外、254nm)2. 试剂：甲醇(AR)，间苯三酚(AR)，邻硝基苯酚(AR)，超
3、纯水。四、实验内容1. 仪器的稳定及试液配制(1) 按要求配制流动相，并脱气和过滤。(2) 开启仪器的泵和检测器电源，根据实验要求选择合适的参数，用流动相平衡色谱柱 至基线稳定。(3) 配制溶液2. 进样及仪器后续处理(1) 用被测试液反复清洗微量注射器。抽取试液60p L以上。进样，一段时间后得到色 谱图。(2) 重复操作步骤(1)，得到所有试液的色谱图。(3) 用纯甲醇冲洗并平衡色谱柱。用干净的溶剂清洗进样器。(4) 关闭仪器。3. 数据处理定性分析将标准物和未知样中未知峰的保留时间进行比较。Fig1：邻硝基苯酚高效液相谱线(保留时间：5.513 min)1cCL(X-isacLtM-i4
4、oo_or12DCLOO-M 1MCLOO-affl-DrMLDIb4O1DC-OCK-1.C02.D01.006 .CO6.DD无标题报告样品信息林出依：Sistmi枷201S5h20U*D:2J1test72015-5-20 14.10:362D.C0 UI处履焙maofi2运0柿1:3.0 MinnasSatin Ch 1姓23D0 5用户油：System自动株尺色落段20OCLKH色音峰斯果wm iEI5.513223629652C1236&Fig2:样品1高效液相谱线（保留时间1： 4.592 min；保留时间2： 5.518 min）M无标题报告用户抻rSystem项目君眼s实验样
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7、色碧崎结果725277264aW6114611121119-545史堂免笛骨可向枳5 .Si 2Fig4:间苯三酚高效液相色谱图（保留时间：5.354 min）JJ 用户M血System项目名制shiyan桦品信息年苗克称：侗羊盘System岸备类型：未成采第时间：2015-5-20 Tz1-01.30:41版与，1弟来方法坦：test上林胸景：52015-5-20 下午 02:00:24斐样住奥：2C.0D ul灯邑方法；间旱虺区If时间，G.Q MinutesSatin Ch 1印祖名歌姓理退谊注在：220-0.6自动标尺色洁图色启衅折果名字fiaHiw（附）雌言量15.354I41771
8、B舶60愤根据以上结果可判断，样品是间苯三酚与邻硝基苯酚的混合物。五、思考题1. 影响柱效能的主要因素是什么？答：影响柱效的主要因素有：1）涡流扩散项He； 2）纵向扩散项Hd； 3）传质阻力项（固 定相传质阻力项、流动相传质阻力项）。其他：填料、柱压、温度和流速等。2. 影响各组分出峰面积的主要因素是什么？答：峰形，检测器灵敏度。3. 如何在紫外光检测时选择最佳测量波长？答：先对纯样品做全波长扫描，吸收最大处即为最佳测量波长。4. 标准曲线法与内标法、归一化法相比，具有哪些优缺点？答：面积归一法：以总面积为100%计算纯度；外标法：需单独用标准品做一标准曲线， 用于分析供试品；内标法，除标准品外，还需引入一种合适的内标物，以标准品与内标物响 应值的比值作标准曲线，求解供试品与内标物响应值的比值所对应的供试品的量。六、误差分析
