饲料非常规检测手册

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1、非常规项目检测方法手册00 八年九月一、 饲料中粗纤维含量的测定 3二、 中性洗涤纤维检测方法 5三、 油脂TBA值的测定方法 6四、 KOH溶解度的测定方法 7五、 尿素酶活性（快速简单的估测方法）8#六、 挥发性盐基氮（半微量定氮法） 9七、 枸溶磷含量的测定11八、 水溶液磷含量的测定12九、 油脂中过氧化值的测定12十、 皂化价的测定13十一、油脂酸价的测定15十二、 玉米脂肪酸值测定方法15十三、油脂碘价的测定19十四、真蛋白的测定21十五、糊化度的测定22十六、 配合饲料混合均匀度的测定25十七、 玉米酒精糟浆液测定判断26一、饲料中粗纤维含量的测定1、原理用浓度准确的酸和碱， 在

2、特定条件下消煮样品， 再用乙醇除去可溶物， 经高温灼烧扣除矿物质的量， 所余量为粗纤维， 它不是一个确切的化学实体， 只是在公认强制规定的条件下测出的概略成分， 其中以纤维素为主， 还有少量半纤维素和木质素。2、试剂本方法试剂使用分析纯，水为蒸馏水。标准溶液按GB601 制备。2.1 硫酸 （GB 625）溶液0.128 0.005mol/L ： 氢氧化钠标准溶液标定，7ml/1000。2.2 氢氧化钠（GB 629）溶液，0.313 O005mol/L :邻苯二甲酸氢钾法标定 13.04g/1000ml。2.3 酸洗石棉 HG 3-1062。2.4 95%乙醇 （GB 679）。2.5 乙醚

3、 （HG 3-1002）。2.6 正辛醇（防泡剂）。3、仪器设备3.1 实验室用样品粉碎机。 分样筛：孔径1mm， （18 目）。3.3 分析天平：感量0.0001g。3.4 电加热器（电炉 ） ，可调节温度。3.5 电热恒温箱（烘箱 ）：可控制温度在130。3.6 高温炉：有高温计可控制温度在 500c600C。3.7 消煮器：有冷凝球的600mL高型烧杯或有冷凝管的锥形瓶。3.8 抽滤装置：抽真空装置，吸滤瓶和漏斗。（滤器使用200 目不锈钢网或尼龙滤布 ）。3.9 古氏地竭：30mL,预先加入酸洗石棉悬浮液 30mL（内含酸洗石棉0.20.3g）再抽干，以石棉厚度均匀，不透光为宜。上下铺

4、两层玻璃纤维有助于过滤。3.10 干燥器，以氯化钙或变色硅胶为干燥剂。3.11 粗纤维测定仪器： 国内外生产的符合本标准测定原理， 且测定结果一致 的仪器。4、操作步骤称取12g试样，准确至0.0002g,用乙醴脱脂，(含脂肪大于10%必须脱脂，含脂肪不大于10%，可不脱脂) ，放入消煮器(3.7)，加浓度准确且已沸腾的硫酸溶液(2.1)200mL和1滴正辛醇，立即加热，应使其在2min内沸腾，调整加热器，使溶液保持微沸，且连续微沸30min,注意保持硫酸浓度不变。试样不应离开溶液沾到瓶壁上。 随后抽滤， 残渣用沸蒸馏水洗至中性后抽干。 用浓度准确且已沸腾的氢氧化钠溶液(2.2)将残渣转移至原

5、容器中并加至 200mL,同样准确微沸30min ，立即在铺有石棉的古氏坩埚上过滤，先用 25mL 硫酸溶液洗涤，残渣无损失地转移到坩埚(3.9)中，用沸蒸馏水洗至中性，再用15mL 乙醇 (2.4)洗涤，抽干。将培竭(3.9)放入烘箱(3.5),于130i2c下烘干2h,取出后在干燥器(3.10)中冷却至室温， 称重， 再于550 25高温炉中(3.6)灼烧 30min， 取出后于干燥器中(3.10)冷却至室温后称重。推荐方法：称12g试样(脱脂步骤同手工方法)于62玻璃沙漏斗中，用地竭夹将漏斗插入热萃取器；从顶部加入预先煮沸的硫酸溶液200mL 和两滴正辛醇，将加热旋扭开到最大位置，待溶液

6、沸腾后，将旋扭调到合适位置，使溶液保持微沸30min ，抽滤，用沸蒸馏水洗至中性，加入预先煮沸的氢氧化钠溶液200mL ，同样准确微沸30min ，抽滤，用沸蒸馏水洗至中性，将坩埚(3.9)转移至冷萃取器，加入25mL95%乙醇，抽干，将漏斗转移到烘箱(3.5),于130i2c下烘干2h,取出后在干燥器(3.10)中冷却至室温， 称重。 再放入500 25高温炉(3.6)中灼烧1h，干燥器(3.10)中冷却至室温后称重。型号不同的仪器具体操作步骤见该仪器使用说明书。5、计算粗名维()= (m1-m2)/m式中：m1130烘干后培竭及试样残渣重，g; m2 550(或500C)灼烧 后培竭及试样

7、残渣重，g; m试样(未脱脂)质量，go6、注意事项：每个试样取两平行样进行测定，以算术平均值为结果。粗纤维含量在 10%以下，绝对值相差0.4。粗纤维含量在10%以上，相对偏差为 4%。、中性洗涤纤维检测方法1、试剂（ 1 ）中性洗涤剂（ 3%十二烷基硫酸钠）准确称取18.6g 乙二胺四乙酸二钠（Ci0Hi4N2O8Na2 2H2O ）和 6.8g 硼酸钠（Na2B4O7 10H2O ）, 一同放入 1000mL烧杯中，加入 600mL 蒸馏水，加热溶解后，加入30g 十二烷基硫酸钠（Ci2H25NaO4s ）和10mL乙二醇乙醴，搅拌并微热使其溶解；另称取4.56g无水磷酸氢二钠，置于另一

8、烧杯中，加 200mL 蒸馏水微微加热溶解后，倒入第一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000mL 。此溶液 PH 值在 6.9-7.1 左右。（ PH 值一般不需要调整）（ 2）无水亚硫酸钠A?R2、步骤（1）称量0.5-1.0g（准确至0.001g）样品于250mL三角烧瓶中（样品粉碎20-40目）。（2）向三角烧瓶中加入事先煮沸的中性洗涤剂100mL,消泡剂3滴，力约0.5无水亚硫酸钠。（3）在三角烧瓶上放置一个漏斗，将三角烧瓶放在电炉上保持微沸1h.其间要多次适量的向三角瓶中补充一些蒸馏水（保持 100mL）。（4）煮沸完毕后冷却10min,将已恒重的G1（G0）砂芯培竭安在抽滤瓶上，将三角

9、瓶内的物质全部移入砂芯坩埚中，抽滤，并用适量的沸水冲洗2 次。（ 5）用20mL 丙酮冲洗两次，抽滤。（6）取下培竭在105OC烘干到恒重（约3-4h）,冷却后称重。3、计算NDF%=（ 烘干后总重量 空坩埚重量）/样品质量*100指标： NDF32% 质量佳，NDF35% 合格。三、油脂 TBA 值的测定方法1、原理油脂受到光、热、空气中氧的作用，发生酸败反应，分解出醛、酸之类的化合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA （硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在532nm 波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。2、试剂2.1 TBA 水溶液：准确称取T

10、BA0.288g 溶于水中，并稀释至100mL （如 TBA不易溶解，可加热至全溶澄清，然后稀释至100mL）,相当于0.02M;2.2 三氯乙酸混合液：准确称取三氯乙酸（分析纯）7.5g及0.1gEDTA,用水溶解，稀释至100mL ；2.3 氯仿（分析纯）；2.4 丙二醛标准溶液：称取0.315g1， 1 ， 3， 3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000mL，此溶液每mL相当于丙二醛100仙g置于冰箱内保存。准确吸取10mL, 稀释至100mL,此溶液每mL相当于丙二醛10g备用。3、操作步骤（ 1）标准曲线的绘制准确吸取每相当于丙二醛 10g的标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.

11、4、0.5、0.6mL 置于纳氏比色管中，加水至总体积为5mL ，加入5mLTBA 溶液，然后按样品测定步骤进行，测得光密度绘制标准曲线。（ 2）样品测定：准确称取融化均匀的油脂样品30g,置于100mL有盖三角瓶内，加入50mL三氯乙酸混合液，振摇半小时（保持油脂融溶状态，如冷结即在70水浴上略微加热使之融化后继续振摇） 用双层滤纸过滤， 除去油脂。 滤液重复用双层滤纸过滤一次。准确移取上述滤液5mL 置于 25mL 比色管内，加入 5mLTBA 溶液，混匀，加塞，置于90c水浴内保温40min,取出，冷却1h,摇匀，静置，分层，吸出 上清液于 532nm 波长比色，对照标准曲线得到微克数（

12、同时作空白试验）。4、计算丙二醛含量(mg/kg) =CX50 5xm式中C一从标准曲线查得丙二醛的微克数(ug)m-样品质量(g)四、KOH溶解度的测定方法1、试剂(1) 0.2%的氢氧化钾(KOH)溶液，相当于0.042当量,pH为12.5。(2)其它试剂为凯氏定氮所需的试剂。(3)称取2.360g KOH于溶量瓶中，加水溶解并稀释至 1000mL。注意补充KOH试剂的纯度。2、测定步骤(1)称取1.5g过60目筛的豆粕，置于 250mL烧杯中，力口入 75mL0.2% 的KOH溶液，在磁力搅拌器上搅拌20分钟；(2)之后，移入50mL溶液于离心管中，以2700转/分的速度离心10分 钟。

13、(3)取15mL上精液进行凯氏定氮。(4)用标准定氮法测定15mL溶液中的蛋白质含量，若按此法测定，该15mL 上精液相当于0.3g原样本。3、计算方法蛋白溶解度()=0.3g样本的粗蛋白含量/原样本的粗蛋白含量。注：当比较不同豆粕样品时，它们的粒度应一致的，样品在0.2% KOH溶液 中搅拌的时间也应一致。五、尿素酶活性(快速简单的估测方法)一、尿素苯酚磺法1、原理：在有指示剂酚红存在的条件下，豆粕(饼)中的尿素酶活性可按尿素转变成氨的方法定性测定。2、设备（ 1）稀硫酸（H2SO4）0.2N 或更稀些，带滴管。（ 2）尿素一苯酚磺试剂。a 将1.2克苯酚磺溶解于30mL0.2N的NaOHK

14、b 用蒸馏水将之稀释至约300mL。c 加入 10g 尿素并溶解之。d 用蒸馏水稀释至2L。e 加入 7mL 1.0N 的 HSO或 70mL 0.1N 的 HSO。f 用蒸馏水稀释至最后体积3L。g 溶液应具明亮的琥珀色。3、测定步骤（ 1） 在一个 150ml 的烧杯中倒入少量试剂， 注意溶液必须呈明亮的琥珀色。若溶液已转变为深桔红色，滴人稀硫酸深液并搅拌之，直至溶液再度呈境拍色。（ 2）量一场匙粉碎很好的豆饼粉，放置于陪替氏（petri ）培养皿中。（ 3）在样品上加入两场匙试剂，轻轻搅拌，将样品平铺于培养皿中。若仍有干豆饼斑点，则再加入试剂，直至将豆饼浸湿。（ 4）放置5 分钟后观察：

15、a. 没有任何红点出现：再任其放置25 分钟，若仍无红点出现，说明豆饼过熟。b. 有少量红点：少量尿素酶活性，豆饼可用。c. 豆饼表面约有25为红点覆盖：少量尿素酶活性；豆饼可用。d. 豆饼表面约有50为红点覆盖：有尿素酶活性。e. 豆饼表面的 75100为红点覆盖：尿素酶活性很高，不应接受这种原料，因为豆饼过生。二、酚红法1、适用范围： 适用于大豆制品 , 但不能作为仲裁法2、 原理 ： 酚红指示剂在pH6.4-8.2 时由黄变红, 大豆制品中所含的尿素酶, 在室温可将尿素水解产生氨. 释放的氨可使酚红指示剂变红, 根据变红时间的长短来判断尿酶活性的大小 .3、仪器和试剂(1) 粉碎装置(2