《水产食品公司实验室出口食品单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《水产食品公司实验室出口食品单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、水产食品公司实验室出口食品单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法1仪器和设备1 1 恒温培养箱： 36 11 2 恒温水浴箱： 45 11 3 高压灭菌锅1 4 均质器1. 5冰箱： 0-4 和 -15 -20 1 6 试管 :18 150mm 12 mm100 mm1 7 锥形瓶 :500ml 250ml1 8 平皿：直径为90mm1 9 灭菌吸管1 10 灭菌均质杯1 11 酒精棉1 12 天平 : 感量 0.1g2培养基的制备2 1 含 0.6 酵母浸膏的胰酪大豆肉汤（TSB-YE）称取3.6g药品溶入100ml蒸馏水中， 水浴加热30min ，分装试管，121高压灭菌15min ，冷却后0
2、4冰箱保存备用。2.2 含0.6 酵母浸膏的胰酪大豆琼脂（TSA-YE）称取4.7g药品溶入100ml蒸馏水中，121高压灭菌15min ，冷却50左右倒平板，待琼脂凝固后，放入0 4冰箱保存备用。2.3 Fraser肉汤增菌液（ FB1 、 FB2）FB1 ：称取 12.38g 药品溶入 225ml 蒸馏水中， 121高压灭菌 15min ，冷却至 50左右加入 FB1 添加剂 1 和添加剂 2 各1 支备用。FB2：称取 1.1g 药品溶入 20ml 蒸馏水中，水浴加热 30min ，分装试管， 121高压灭菌 15min，冷却至 50左右加入 FB2 添加剂 1 和添加剂 2 各 1 支
3、备用。2.4 PALCAM 琼脂称取 6.61g 药品溶入 100ml 蒸馏水中，121高压灭菌 15min ，冷却至 50左右加入 PALCAM添加剂 1 和添加剂 2 各 0.4ml ，倒平板，待琼脂凝固后，放入 04冰箱保存备用。2.5 OXA 琼脂称取 5.85g 药品溶入 100ml 蒸馏水中，121高压灭菌15min ，冷却至 50左右加入吖啶黄素、放线菌酮、多粘菌素E 各支，倒平板，待琼脂凝固后，放入0 4冰箱保存备用。12.6 7羊血琼脂2.7 SIM动力培养基称取 3.0g 药品溶入 100ml 蒸馏水中， 水浴加热 30min ，分装试管， 121高压灭菌 15min，制成
4、高层斜面， 冷却后 04冰箱保存备用。2.8 硝酸盐培养基2.9 缓冲葡萄糖蛋白胨水2.10 糖发酵培养基2.11 过氧化氢酶试验3. 操作程序3.1 样品的培养和分离称取 25g样品放入30 1培养 25 1h225ml FB 1培养基中前增菌3 2 生化鉴定取 1 环划线分离于挑取可疑菌落， 接种321OXA 和 PALCAM平板TSA-YE 琼脂平板典型运动镜检取菌落于载玻片上，呈短棒杆菌， 见有轻微旋转翻滚吸取 1ml 培养物， 加30 1培养 25 1h入 FB1 增菌液中，二次增菌35培养 24h用 0.85灭菌生理压上盖玻片，于显盐水制成悬浊液，微镜下观察322以革无兰菌氏操染作
5、色取25g 样品323过氧化氢酶试验菌落呈短杆状革兰氏阳性去菌落于洁净载玻滴加 1 滴 3的 H2O2菌落呈过氧化氢酶片上，溶液，阳性反应324溶血试验325蓝色菌落检验3251将羊血琼脂平板划分为 25 个小格，转种典型菌于TSB-YET 肉汤中，每格刺种1 个菌落，菌落呈 -型溶血环30培养 28 48h，30培养 24h，动力试验取培养物穿刺接种室温（ 20 25）培在半固体试管内呈SIM 半固体培养基，养 48h 至 7 天，典型伞状生长。3252硝酸盐还原试验2min内呈红色为阳性3253MR-VP 试验加5 -萘 酚 溶 液0.5ml ，3254三出糖现铁红试色验为 MR 阳性反应
6、。3255糖发酵试验阴性继续培养到第 5 天，3256尿素酶试验取培养物接种硝 酸盐肉汤中，取培养物接种 MR-VP 肉汤中，再加入 4氢氧化钾溶液 0.2ml,摇匀，取培养物接种于 三糖铁琼脂，取培养物分别接 种于 0.5葡萄糖、结果分别是 （）取培养物穿刺接 种尿素酶琼脂斜面上，35培养 5 天，加入甲液0.2ml 再加入乙液 0.2ml ，混匀，35培养 48h，取 1ml 培养物于洁净试管中，呈红色为VP阳性 ,剩余培养物继续培养 48h, 加甲基红 1d,35培养 5 天，斜面和底层产酸， 不产硫化氢。麦芽糖、七叶苷、甘木糖发酵管内， 35露醇、鼠李糖、培养 24 48h,35培养 5 天，呈阴性反应， 斜面无颜色变化。李斯特菌菌种鉴别特征蓝典过革溶动尿硝MR-色型氧兰血力素酸VP菌运化氏试试酶盐试菌名动氢染验验试还验落酶色验原单 /核细胞增生李斯特氏菌绵 /羊李斯特氏菌三 糖糖发酵利用铁 试葡麦七甘鼠木验萄芽叶露李糖糖糖苷醇子产酸，V b不 产H 2S产酸，不产H 2S英 /产酸，V b诺不 产克H 2S李斯特氏菌威 /产酸，V b尔不 产斯H 2S李斯特氏菌西 /产酸，尔不 产李H 2S斯特氏菌格
