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1、胸腔积液DNA倍体分析的临床应用吕程丁燕玲刘宇蒋洪昆黎华莲作者单位:广西柳州市人民医院检验科邮 编545001收稿日期2008 - 06 - 13【摘要】目的探讨胸水脱落细胞DNA倍体分析的临床应用价值。方法应用流式细胞术测定35例胸水脱落细胞DNA含量，并与细胞学检查进行比较分析。结果 流式细胞术DNA倍体分析用于 恶性胸腔积液诊断的阳性率为73. 33 %，敏感性为79. 00 %，特异性为95. 24 %，准确性为87. 50 %。结 论胸腔积液脱落细胞DNA倍体分析,有助于判断胸水的良恶性质。对于了解肿瘤细胞的增殖情况 及恶性程度有重要的临床意义。【关键词】 胸腔积液DNA倍体分析 流
2、式细胞术用流式细胞术(FCM)进行DNA倍体分析，在肿瘤学 及其他疾病的诊断中已获得广泛的应用，本实验应用流式细胞术测定胸腔积液脱落细胞DNA含量，探讨DNA 倍体分析在胸腔积液中的临床应用价值。1 资料与方法1. 1 研究对象2007年4月2008年2月本院收治的胸腔积液患者35例。男21例，女9例，年龄3280 岁，平均年龄(56.6 10. 2)岁。全部病例均经临床最终确诊。恶性肿瘤15例，其中肺癌12例，乳腺转移癌2例, 胃癌1例。非恶性肿瘤20例，其中结核性胸膜炎7例,肝硬化1例，肺部感染12例。所有检查均采用同一次抽 取的胸水标本。1. 2 仪器与试剂 仪器采用美国BD Biosc
3、iences公司生产的BD FACSCalibur型流式细胞仪及DNA倍体 分析配套试剂盒。1. 3 试验方法1. 3. 1流式细胞仪DNA含量测定 用8001 000 r/ min离心沉淀收集新鲜胸水中的细胞，用PBS洗涤2次，用350目的滤网过滤除去细胞团块，将脱落细胞数调整为1 X106个/ml，按照DNA Stain Kit说明书进行操 作，用Cell Quest软件自动获取50000细胞/样品，再用ModFit L T 2. 0软件进行分析，同时以正常人外周血淋 巴细胞作为正常二倍体对照，被测标本细胞DNA含量峰值与对照标本细胞二倍体峰值之比为DNA指数(DI)， 二倍体DI为(1
4、0. 1)，DI不在(1 0. 1)范围者为异倍体。1. 3. 2 细胞学检测 胸水经离心沉淀后制片用苏木素伊红染色光镜下观察脱落细胞形态。阳性为发现肿 瘤细胞。1. 4 统计学处理 率的比较采用x2检验。2 结果DNA倍体分析结果和细胞学检查结果比较:15例胸腔积液DNA异倍体阳性率较细胞学检查阳性率高，但 无统计学意义(P 0. 05)。35例胸腔积液DNA倍体分析与细胞学检查的敏感性、特异性、准确性均无显著 差异(P 0. 05)。结果见表1。表135例胸腔积液各组结果比较恶性胸液15例良性胸液20例敏感性特异性准确性阳性阴性阳性率阳性阴性阳性率DNA 异倍体 11 4 73. 33 1
5、 19 5. 0 79. 00 95. 24 87. 50细胞学 8 7 53. 30 0 20 0 68. 18 100 83. 333 讨论胸腔积液是胸膜疾病最常见的临床表现，其发病机制复杂，根据病因可大致分为恶性胸腔积液和良性胸腔 积液，鉴别两者时很困难，脱落细胞学检查是诊断恶性胸腹水强有力的证据,但灵敏度较差，易于漏诊。近年来 应用流式细胞仪检测DNA含量，作为检测肿瘤细胞的一个标志，已得到越来越多的临床医师重视。正常人体 细胞具有较恒定的DNA含量,为整倍体细胞，处于S期的细胞仅占少数，但肿瘤组织常发生染色体突变，结果 导致异倍体细胞的出现和S期细胞比例增高。国外有文献报导DNA倍体
6、分析在恶性胸腔积液方面有较好的 临床应用价值1 。本法采用FCM测定胸腔积液DNA的含量以异倍体作为诊断恶性胸水的标准，结果显示，阳性率为73. 33 % , 敏感性为79. 00 %，特异性为95. 24 %，准确性为87. 50 %。其阳性率明显高于细胞学检查。这可能是由于在癌 前病变时DNA倍体发生改变，出现异倍体随细胞增生程度而提高，而此时细胞形态尚未发生改变2 。因此胸腔 积液异倍体的存在高度提示恶性病变,因进一步进行胸膜活检和反复细胞学检查。由于实验原理，利用FCM DNA倍体分析来判断胸水的良恶性质存在一定的假阳性和假阴性。造成假阴性属不可避免,主要原因是肿 瘤细胞未脱落至胸腔或
7、肿瘤本身为二倍体细胞。假阳性可能与在标本制备过程中某些染色体发生机械性缺 失有关，尽管存在一定的假阳性和假阴性，本实验的准确性还是达到87. 50 %，与文献报导相符3 ，表明FCM DNA倍体分析在良恶性胸腔积液的鉴别中可作为一项重要的参考指标，另外FCM DNA检测可以进行细胞 周期分析，了解细胞的增殖能力,有研究报导,DI值越高，生存期越短，异倍体肿瘤的S期细胞较二倍体肿瘤高, 提示异倍体肿瘤的增殖活性高,生长快，侵袭力强,预后差4 。总之，利用FCM进行细胞DNA定量分析,对鉴别 良恶性胸腔积液有一定的临床价值，联合细胞学检查可提高诊断水平，同时对判断肿瘤的生物学行为有一定 意义。参考
8、文献 1 Saha I ,Dey P ,Vhora H , et al . Role of DNA Flow Cytomet ryAnd Image Cytomet ry In Effusion Fluid J . Diag Cytopat hol , 2000 ,22 (20) :81 2 冯萍,单卫民，俞秋兴.浆膜腔积液脱落细胞DNA倍体分析在肿瘤良恶性判断中的应用J.苏州医学院学 报,2001 ,21 (1) :423 钟任翔，丁韧烨，孙建良.胆胰液脱落细胞DNA倍体分析在诊断胆道和胰腺良恶性疾病中的价值J .中华检验医 学杂志,2004,27 (8) :511 - 5134 胡艳平，贺兰湘，于丁，等.非小细胞肺癌细胞DNA含量与其生物学行为关系的初步研究J.中华肿瘤杂志,2003 ,25 ( 1) :55 - 5
