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1、植物生理学实验希尔反应的观察和反应速率的测定摘要：本实验以新鲜的菠菜叶片为实验材料；以菠菜的离体叶绿体为实验对象，由离体叶绿体 悬浮液在光下能还原某些氧化剂，根据2,6 -二氯酚靛酚在光下从蓝色到粉红色再到无色的变化， 观察希尔反应。在本实验中观察到，加入叶绿体悬浮液的试管， 在光下由蓝色变为绿 色（由于叶绿体存在的原因） ；暗处的试管仍为蓝色。一、实验原理与实验目的实验原理：希尔发现，离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂（如2,6 -二氯酚靛酚、高铁氰化钾、苯醌、NADP+、草酸等）2H2O+2A2AH2+O2希尔反应的测定的方法是（ 1）放氧速率；（2）氧化剂被还原的速率。本实验中 2,
2、6 -氯酚靛酚还原后，溶液由兰色变为无色。实验目的：观察和测定希尔反应，了解叶绿体在光合放氧中的作用。二、实验材料和方法实验材料：菠菜 实验器材：离心机、分光光度计、天平、研钵、漏斗、容量瓶、量筒、烧杯、纱布、移液管、 台灯等实验试剂：（1）提取液（0.067M磷酸缓冲液，pH 6.5 + 0.3M 蔗糖+ 0.01M KCI ）;（2） 0.1%2,6 -二氯酚靛酚（溶于 0.067M 磷酸缓冲液 +0.01%KCl ）三、实验步骤1. 离体叶绿体悬浮液的制备称取 8克叶片 ,加 10mI 预冷提取液研磨 ,在研钵中捣碎 30秒钟后 ,继续加入 15mI 冷提取液 ; 经过二层纱布过滤 ,去
3、残渣 ,挤出滤液 ,置于离心管中。以 1000 转/分离心 3 分钟 ;弃去沉淀。以 3000 转/分离心上层液 ,8 分钟,弃去上清液 ,沉淀为破碎的叶绿体。用 20mI 提取液悬浮沉淀 ,置于冰浴备用。2. 离体叶绿体对 2,6 -二氯酚靛酚的还原作用取 2 支试管，分别加入 5mI 叶绿体悬浮液和 1mI 0.1%的 2,6 -二氯酚靛酚。一试管照光， 另一试管置于黑暗。 5-10min 后观察溶液颜色的变化。四、实验结果与讨论实验结果：黑暗处的试管颜色未发生变化，一直都是蓝绿色;光照下的试管颜色明显变浅，由较深的蓝绿色变为浅绿色，证明希尔反应的存在，可见 离体叶绿体悬浮液在光下能还原某
4、些氧化剂。实验讨论：1 、 离体叶绿体对染料的还原作用实验中,比较两个处理的溶液颜色有何不同,并解释实验结果。答：现象：两份叶绿体悬浮液，分别加入1ml 0.1%的 2,6 -二氯酚靛酚后，一份在光照条件下，一份在黑暗条件下；在黑暗条件下的叶绿体悬浮液一直是蓝绿色的；而在光照条件下 的叶绿体悬浮液在加入 1ml 0.1%的 2,6 -二氯酚靛酚后为蓝绿色， 而放在光下一段时间后叶 绿体悬浮液又慢慢变为原来的颜色，浅绿色。原因： 这是由于叶绿素在光照条件下被激活， 而释放出电子， 从而还原某些氧化剂。 2,6 -二氯酚靛酚本来是蓝色的， 加入后使得叶绿素提取液变为蓝绿色， 而 2,6 -氯酚靛酚还原后， 溶液变为无色，这时叶绿素提取液又变为原来的颜色，浅绿色。参考文献：王英典，刘 宁. 植物生物学实验指导 . 北京：高等教育出版社 .（第 2 版）最新文件 仅供参考 已改成 word 文本 。 方便更改
