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1、实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0) 组份浓度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。PH值浓HC17.4约 70ml7.6约 60ml8.0约 42ml4. 将溶液定容至 1 L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大, 温度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。2)10xTE Buffer
2、 (pH74, 7.6, 8.0)组份浓度： 100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量： 1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于 1 L 烧杯中。1M Tris-HCl Buffer (PH7.4, 7.6, 8.0)100ml500mM EDTA(PH8.0)20ml2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定容至 1 L 后，高温高压灭菌。4. 室温保存。3) 1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度： 1.5 M Tris-HCl配制量： 1 L配制方法：1. 称量 181.7 g Tris 置于 1 L 烧杯中。2. 加入
3、约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调节 pH 值至 8.8。4. 将溶液定容至 1 L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大 温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。4) 3 M醋酸钠(pH52)组份浓度：3M醋酸钠配制量： 100ml配制方法：1. 称量40.8g NaAc3H2O (或者24.6g无水 NaAc)置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2. 加入冰醋酸调节pH值至5.23. 加去离子水将溶液定容至100ml4 高温高压灭菌后，
4、室温保存。5)PBS Buffer组份浓度： 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量： 1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6) 10 M 醋酸铵组份浓度
5、： 10 M 醋酸铵配制量： 100 ml配制方法：1. 称量77.1 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7) 苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1) 。氯仿可使蛋 白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/
6、异戊醇(24 : 1)混合均匀后，移入棕色 玻璃瓶中4C保存。8) 10 (W/V) SDS 组份浓度：10 (W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1. 称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68C加入溶解2. 滴加浓盐酸调节pH值至7.23将溶液定容至100ml后，室温保存。9) 2 N NaOH 组份浓度： 2 N NaOH配制量： 100 ml配制方法：1. 量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能 使玻璃烧杯炸裂)。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待Na
7、OH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10) 2.5 N HCl组份浓度： 2.5 N HCl配制量： 100 ml配制方法：1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸(11.6 N),均匀混合。2. 室温保存。11 )5 M NaCl组份浓度： 5 M NaCl 配制量： 1 L配制方法：1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。3. 高温高压灭菌后，4C保存。11) 20 (W/V) Glucose组份浓度： 2
8、0 (W/V) Glucose配制量： 100 ml配制方法：1. 称取20 g Glucose置于100200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 高温高压灭菌后，4C保存。12) Solution I(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose 配制量：1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于1 L烧杯中。1M Tris-HCl (PH8.0)25ml0.5M EDTA (PH8.0)20ml20 % Glucose (1.11M)45 mldH2O91
9、0ml2. 高温高压灭菌后，4C保存。3. 使用前每 50 ml 的 Solution I 中加入 2 ml 的 RNase A(20 mg/ml)。13) Solution II(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH, 1%(W/V)SDS 配制量： 500ml配制方法：1量取下列溶液，置于500ml烧杯中10 SDS 50ml2N NaOH 50ml2. 加灭菌水定容至500ml,充分混匀3. 室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月 注意： SDS 易产生气泡，不要剧烈搅拌14) Solution III(质粒提取用) 组份浓度： 3 M KOAc, 5 M CH3COOH 配制
10、量： 500 ml配制方法：1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。KOAc147gCH3COOH57.5ml2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。4. 高温高压灭菌后，4C保存。15) 0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度： 0.5 M EDTA配制量： 1 L配制方法：称取186.1 g Na2EDTA2H2O，置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3. 用 NaOH 调节 pH 值至 8.0 (约 20 g NaOH)。 注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 L。5.
11、适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。16) 1 M DTT 组份浓度： 1 M DTT 配制量： 20 ml 配制方法：1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。2. 力口 20 ml的0.01 M NaOAc (pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20C保存。17) 10 mM ATP组份浓度： 10 mM ATP配制量： 20 ml配制方法：1. 称取121 mg Na2ATP3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。2. 力口 20 ml 的 25 mM Tris-HCl (pH8.0)，搅拌溶解。3. 适量分成小份后，
12、-20C保存。一.常用贮液与溶液lmol/L亚精胺(Spermidine):溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10m 1。分装成 小份贮存于-20C。lmol/L精胺(Spermine)：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10m 1。分装成小份贮 存于-20 Co10mol/L乙酸胺(ammonium acetate)：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA)：加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级，无DNA 酶)于9.5ml水中(为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白)，盖好
13、盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶 解为止。不要涡旋混合。加水定容到10m l,然后分装成小份贮存于-20C。1mol/L二硫苏糖醇(DTT)：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20C。 或转移 100mg 的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾(potassium acetate)：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾(KCl)：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90
14、ml水中，用冰乙酸调溶液 的 pH 至 5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L)，混合后形成EDTA的三 钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH,并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES:将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH (6.8-8.2)，然后用水 定容至 100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPTG：溶解250mg的IPTG (异丙基硫代-0D-半乳糖苷)于10ml水中，分成小份
15、 贮存于-20C。lmol/LMgC12:溶解20.3g MgC126H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。 分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20 Co20mg/ml蛋白酶K （proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直 至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20C。10mg/mlRnase （无 DNase） （DNasefree RNase）：溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用 1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20C贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯
