细菌+总大肠+粪大肠

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1、细菌学监测+细菌总数+总大肠菌群+粪大肠菌群第一节细菌学监测（一）基础知识一、填空题1. 用于细菌学检测的吸管上端要用普通棉花填塞，并注意松紧适度，使其快速、准确流出所用体积。2. 测定水中细菌学指标的采样瓶口用牛皮纸等防潮纸包扎后，置于干燥箱中，于160170。干热灭菌2 h， 或用高压蒸汽灭菌器121C灭菌15 min；不能用加热方法灭菌的塑料瓶，应浸泡在O. 5%过氧乙酸lO min或环 氧乙烷气体进行低温灭菌；聚丙烯耐热塑料瓶，可用12TC高压蒸汽灭菌器灭菌15 mina3. 测定自来水样中的细菌学指标时，采水前将水龙头开至最大，放水王min，然后关闭水龙头，用酒精灯 火焰灼烧约3 I

2、nin消毒水龙头或用75%酒精溶液消毒水龙头，再打开水龙头、开足放水l min，以充分去除水管 中的滞留杂质。4. 测定水样中细菌学指标时，从取样到检验不宜超过Jh，否则应使用1 0C以下冷藏设备保存样品，但 不得超过_6_h5. 分层检测地表水中的细菌学指标时，应自 上而下（方向）进行采样，以免不同层次的搅扰；与理 化监测项目同时采样时，应先采集细菌学检验样品。6. 配制好的用于细菌学检测的培养基，不宜保存过久，以少量勤配为宜。每批应注明配置日期，已灭菌的 培养基可在410C存放一个月，存放时应避免阳光直射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。二、判断题1. 检测水中的细菌学指标时，每次试验要以无

3、菌水为样品，对培养基、滤膜、玻璃器皿和冲洗用水做无菌 性检验。（”）2. 新购置的用于细菌学指标测定的玻璃器皿，因含游离碱，应先在2%盐酸中浸泡数小时，用自来水冲洗 干净后，再用蒸馏水冲洗12次沥干备用。（”）3. 培养细菌的玻璃器皿，应先经灭菌，倒出培养基，用肥皂水或洗涤剂刷洗残渍，再用清水冲洗干净，最 后用蒸馏水冲洗l2次，沥干备用。（”）4. 细菌学检测用的高压蒸汽灭菌器，每次使用时，在压力上升之前，必须先用蒸汽将器内的冷空气完全驱 尽，并要记录温度、气压和灭菌的时间。（”）5. 采集细菌学检测的水样时，不需用水清洗已灭菌的采样瓶，一般采样量为采样瓶容量的80%左右，以便 接种时充分混匀

4、样品。（”）6. 制备大量培养基时，除玻璃器皿外，还可用搪瓷桶或铝锅等容器，但不可用铜或铁锅，以免金属离子进 入培养基中影响细菌生长。（”）三、选择题1. 在同一采样点，同时进行细菌学监测项目与理化监测项目采样时，应里。A.先采集细菌学检验样品B.后采集细菌学检验样品C.同时采集细菌学检验样品2. 测定含有高浓度重金属水样中的细菌学指标时，在灭菌前要在采样瓶中加入螯合剂，以减少金属毒性。按500 ml采样瓶计，加入螯合剂的浓度和体积为A。A. 1 5%EDTA，1 ml B. 1%EDTA，1 5 ml C. 1 5%EDTA，l 0 ml3. 为去除水中余氯对细菌学指标检测的干扰，在灭菌前要

5、向采样瓶中加入足量的硫代硫酸钠，按500 ml采样瓶计，加入1 0%硫代硫酸钠的体积为皿。A. 3 B. O. 3C. 14. 用于测定细菌学指标的培养基，配制好以后不宜保存过久，已灭菌的培养基可在41 0C保存_BA. 1 0 d B. 一个月C.三个月四、问答题1 .简述细菌学检测实验室的基本要求。答案：（1）通风良好，要避免尘埃、过堂风和温度骤变，保持空气清洁和实验用具整洁。（2）室内墙壁要刷 漆覆盖，地板要使用光滑和防透水材料，便于刷洗和消毒。（3）工作台要宽敞，光滑防透水、抗腐蚀，表面材料 具有最少接缝，室内光照要均匀宜人。（4）有专供培养基制备、各类器皿消毒灭菌用的准备室和供应室，

6、还要有 灭菌接种间。2. 简述细菌学监测实验室应做好哪些供应品的质量控制。答案：（1）玻璃器皿的质量控制。（2）纯水质量的控制。（3）试剂的质量控制。（4）染吟料和着色剂的质量 控制。（5）滤膜和吸收垫的质量控制。（6）培养基的质量控制。3. 简述江、河、湖、库等地表水细菌学检测的采样步骤及注意事项。答案：（1）已灭菌和封包好的采样瓶，要小心开启包装纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶子颈部受杂菌污染。（2）要 注意使用船只或附加设备采样时可能造成的污染。（3）采集水样时，用手握住瓶子的下部直接将已灭菌的带塞采 样瓶插入水中，距水面l01 5 cm处，拔玻塞，瓶口朝水流方向，使水样灌入瓶内后盖上瓶塞，再将采

7、样瓶从水 中取出；如没有水流，可握住瓶子水平前推，直到充满水样为止；采好水样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。（4）采 样时不需用水样冲洗采样瓶，一般采样量为采样瓶容量的80%左右，以便充分振摇混合样品。.（5）在同一采样 点与理化监测项目同时采样时，应先采细菌学检验样品；同一采样点分层采样时，应自上而下进行。（6）采样完 毕，应编号并做好采样记录。（7）在危险地点或恶劣气候条件下采样时，必须有防护措施。4. 测定细菌学指标的水样应如何保存？答案：采好的水样，应迅速运往实验室，进行细菌学检验。一般从取样到检验不宜超过2 h，否则应使用10C 以下的冷藏设备保存样品，但不得超过6 h。实验室接样后，应将

8、水样立即放入冰箱，并在2 h内着手检验。如 因路途遥远，送检时间超过6 h者，则应考虑现场检验或用延迟培养法。5. 简述测定自来水中细菌学指标的采样步骤及注意事项。答案：（1）已灭菌和封包好的采样瓶，无论在什么条件下采样，均要小心开启包装纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶 颈受杂菌污染。（2）选择不漏水的龙头，采水前先将水龙头打开至最大，放水35 rain，然后关闭水龙头，用酒 精灯火焰灼烧约3 min灭菌或用70%酒精溶液消毒水龙头，再打开水龙头，放水 1 min，以充分除去水管中的 滞留杂质。（3）采样时不需用水冲洗已灭菌的采样瓶；采样量为采样瓶容量的80%，以便混匀样品。（4）采样 完毕，应做好记录

9、，并将采样瓶编号。6. 简述如何进行培养基的质量控制。答案：培养基的质量控制主要包括以下内容：（1）每批培养基在使用前，需经无菌检验。可将培养基在37C 温箱内培养24 h,证明无菌，同时再用已知菌种检查在此培养基上的生长情况，符合后方可使用。（2）对每批培 养基要做阳性和阴性对照培养检查试验。（3）配制每批培养基都要做好记录，包括配制日期和橱培养基名称、成 分、pH值，灭菌条件，配制方法，配制人员等；配好的培捐不宜久放，以少量勤配为宜.（二）水中细菌总数一、填空题1、细菌总数的菌落数在100以内按实有数 报告，大于100时采用两位有效数字，用10的指数表示， 在报告菌落数为无法计数时，应注明

10、水样的稀释度。二、判断题1. 细菌总数培养后，应立即进行细菌总数平皿菌落计数，如果计数必须暂缓进行，应将平皿存放于51 0C 冰箱内，且不超过24 ho （V ）2. 细菌总数菌落计数在求同稀释度的平均数时，如果其中一个平皿有大片状的菌落生长，不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数。（V ）三、选择题1. 我国目前细菌总数以为报告单位。A.个/L B.个/ml C.个/1 00 ml2. 细菌总数监测中，若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则细菌总数菌落计数应d 报告。A.按稀释倍数最大的平均菌落数乘以稀释倍数B .按稀释倍数最小的平均菌落数乘以稀释倍数C.任选一个稀释倍

11、数的平均菌落数乘以稀释倍数3. 报告细菌总数测定结果时，首先应选择菌落数R进行计算。A. 300（三）水中总大肠菌群一、填空题1. 总大肠菌群多管发酵法测定的复发酵试验，是每一管接种完同一发酵管的最典型菌落13个后，将发酵 管置于W7 C恒温箱中，培养里生h，有产酸产气者，则证实有大肠菌群存在。2. 总大肠菌群多管发酵法测定的步骤分为初发酵试验、平板分离和复发酵实验。3. 总大肠菌群测定的滤膜灭菌是将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水后置于沸水浴中煮沸灭菌：_3次，每次 15min，前两次煮沸后需更换水洗涤23次，以除去残留溶剂；也可用1 2 1C蒸汽灭菌1 0 nlin。二、判断题总大肠菌群测定时，

12、如果不能实现常规的检验步骤，例如水样运输途中不能保证所要求的温度，或采样后不能在允许的时间内进行检验等，都可采用延迟培养法。（V ）三、选择题1. 我国目前以C为总大肠菌群的报告单位，MPN值再乘工即为该体积水样中的总大肠菌群数。A. 1 00 ml，1 0 B. 1 L，1 C. 1 L，l 02. 对受污染严重的水体，可选择_测定总大肠菌群。A.滤膜法B.多管发酵法C.延迟培养法3. 我国目前总大肠菌群以 d为报告单位。 A.个/L B.个/ml C.个/1 00 ml四、问答题1 .简述多管发酵法测定水源水中总大肠菌群的初发酵操作步骤。答案：（1）将水样做1： 1 0稀释。（2）在各装有

13、5 ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管） 各加入1 0 ml水样；在各装有1 0 ml乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管）各加入1 ml水样；在各装有 1 0 ml乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管）各加入l mll”1 0的稀释的水样。（3）将各管充分混匀，置 37C恒温箱培养24 h。2.简述总大肠菌群革兰氏染色的操作步骤及主要注意事项。答案：（1）操作步骤依次为：涂片，固定，结晶紫染色，水洗，碘液媒染，水洗，酒精脱色，水洗，番红复 染，水洗，干燥，镜检（低倍钦油镜）。（2）应注意：涂片：涂片要使菌体薄而且均匀；固定：应自然风干或微 热促干，然后在火焰上通过12次；

14、酒精脱色：用95%酒精脱色，直到酒精不出现紫色时即停止；同时应注意 控制各步骤的操作时间。（四）水中粪大肠菌群一、填空题粪大肠菌群多管发酵法的初发酵试验，是将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中，在工C培 养里h，产酸、产气发酵管表明试验阳性。二、判断题1. 对受污染严重的水体样品，如果在初发酵中未发现产气，则应将其培养到48 h，然后再进一步证实有无 大肠菌类细菌。（”）2. 如果粪大肠菌群测定的接种体积为10 ml，则试管内应装有三倍乳糖蛋白胨培养液10 ml，如接种量为l ml， 则接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10 ml中。（X ）3. 粪大肠菌群多管发酵法的复发酵试验，是将

15、培养物转接到EC培养液中，在35C下培养24 h。（X ）4. 粪大肠杆菌的延迟培养步骤类似于总大肠菌群的延迟培养法。但是只有在不能对粪大肠杆菌进行滤膜试 验时，才可使用延迟培养法。（”）5. 水中总大肠菌群和粪大肠杆菌的快速测定法，适用于医院污水、生活污水、垃圾渗滤液以及其他行业（如 餐饮业、食品加工等）排入地表水中的污水。（”）三、选择题滤膜法测定水中总大肠菌群和粪大肠菌群时，放置滤膜的操作应为；用已灭菌的镊子夹取灭菌滤膜的边缘， 将其卫，贴放在已灭菌的滤床上，稳妥地固定好滤器。A.粗糙面向下B.粗糙面向上四、问答题如果总大肠菌群和粪大肠菌群测定水样接种量不是10 ml、l ml和0. 1 ml，而是较低或较高三个浓度的水样， 应如何计算总大肠菌群数或粪大肠菌群数?试写出计算公式。答案：如果接种的水样量不是10 ml、l ml和0. 1 ml，而是较低或较高的三个浓度的水掌，可先查MPN表 求出MPN指数，再经过下面的公式换算成每l00ml的MPN值。MPN值乘以10，即为1L水样中的总大肠菌群 数（或粪大肠菌群数）10( ml)MPN =MPN指数=接种量最大的一管（ml）