《小鼠去甲肾上腺素NA酶联免疫分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《小鼠去甲肾上腺素NA酶联免疫分析（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、小鼠去甲肾上腺素（ NA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。药品名称：通用名：小鼠去甲肾上腺素（NA ）酶联免疫分析试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、或其它相关组织液中去甲肾上腺素（NA ）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠去甲肾上腺素（NA ）水平。用纯化的小鼠去甲肾上腺素（NA ）抗体包被微孔板，往微孔中依次加入去甲肾上腺素（NA ），再与 HRP标记的去甲肾上腺素（NA ）抗体结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的去甲肾上腺素（ N
2、A ）呈正相关。 用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠去甲肾上腺素（NA ）浓度。试剂盒组成120 倍浓缩洗涤液30ml 1 瓶7终止液6ml 1 瓶2酶标试剂6ml 1 瓶8标准品（ 135ng/L ）0.5ml 1 瓶3酶标包被板12 孔 8 条9标准品稀释液1.5ml 1 瓶4样品稀释液6ml 1 瓶10说明书1 份5显色剂 A 液6ml 1 瓶11封板膜2 张6显色剂 B 液6ml 1/瓶12密封袋1 个标本要求1标本采集后尽早进行实验。2不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。3可将标本放于-20保存，但应避
3、免反复冻融。操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品 100l，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50l，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取 100l 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50l 弃掉，再各取 50l 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50l 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50l，混匀后从第七、第八孔中分别取50l 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀
4、释液 50l，混匀后从第九第十孔中各取50l 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50l，浓度分别为 90ng/L ， 60ng/L，30ng/L ， 15ng/L ， 7.5ng/L ）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37温育 30 分钟。4.配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30
5、秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀， 37避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（液后 15 分钟以内进行。OD值）。 测定应在加终止计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回
6、归方程式，将样品的OD 值代入方程式， 计算出样品浓度， 再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（n 5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6严格按照说明书操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.7本试剂不同批号组分不得混用。底物请避光保存。8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9如与英文说明书有异，以英文说明书为准检测范围：5ng/L -100ng/L规格：96 人份 /盒保存条件及有效期1试剂盒保存： ； 2-8。2有效期： 6 个月
