detectionofmethylation概念：DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一，真核生物中的甲基化仅发生于胞喀咤，即在DNA甲基化转移酶(DNMTs的作用下使CpG二核甘酸5'-端的胞喀咤转变为5'-甲基胞喀咤DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达这种DNA修饰方式在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控脊椎动物DNA勺甲基化状态与生长发育调控密切相关，比如在肿瘤发生时，抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加，CpG岛中的CpG则呈高度甲基化状态，导致抑癌基因表达的下降现有检测方法1. 甲基化特异性的PCR(Methylation-specificPCR，MSP)用亚硫酸氢盐处理基因组DNA所有未发生甲基化的胞喀咤被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR通过电泳检测MSFT增产物，如果用针对处理后甲基化DNAJ的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在甲基化；反之，说明被检测的位点不存在甲基化2. 亚硫酸氢盐测序法(BisulfitesequencingPCR，BSP)用亚硫酸氢盐处理基因组DNA则未发生甲基化的胞喀咤被转化为尿喀脸而甲基化的胞喀咤不变。
随后设计BSP引物进行PCR在扩增过程中尿喀咤全部转化为胸腺喀咤，最后对PCRT物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP直接测序方法将PCR产物克隆至载体后进行测序，可以提高测序成功率，这种方法称为BSP-克隆测序法3. 高分辨率熔解曲线法（HighResolutionMelting，HRM）在非CpG岛位置设计一对针对亚硫酸氢盐修饰后的DNA＜链的引物，这对引物中间的片段包含感兴趣的CpG^o若这些CpG岛发生了甲基化，用亚硫酸氢盐处理后，未甲基化的胞喀咤经PCRT增后转变成胸腺喀咤，而甲基化的胞喀咤不变，样品中的GC含量发生改变，从而导致熔解温度的变化送样要求细胞（A106个）、组织（A300mg）、血液（A1ml）、血清（A1.5ml）等样品材料，基因组DNA体积A20”,浓度A50ng/屋）。