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1、.【讨论】高效液相色谱柱的保护各位，为保证我们的分析效果，延长色谱柱的使用寿命，大家一起来贡献一下自己在色谱柱使用过程中的护柱秘诀吧。 我先来聊聊，算是抛砖引玉了1、最好用预柱。但要注意，假设有时出峰异常，要先看看是不是它有问题了2、每次做完分析，都要进行冲洗，分析用流动相中假设无酸、碱、盐类物质，建议用90甲醇冲洗3060min；假设分析用流动相中含以上物质，要先用10甲醇或用与分析用流动相同比例，把含酸、碱、盐溶液换成水冲洗1小时左右，再梯度走到90甲醇冲洗3060min假设用多元泵。有必要时再循环几次，可以适当缩短时间。假设长时间不用该色谱柱，要冲洗好后，用纯甲醇或乙腈封存。3、假设流动
2、相中用到离子对试剂，更应该好好冲洗，且该色谱柱最好作为专用，不能再做其它物质分析用。因色谱柱填料性质已与原来所不同，在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现。4、尽量避免反冲，除非该色谱柱厂家明确说明允许。5、普通C18柱尽量避免在40以上的温度下分析。6、定期测柱效，有下降，可以用10异丙醇甲醇冲洗色谱柱。假设柱效还没有改善，可以再生，甲醇二氯甲烷甲醇。呵呵，还有的一时想不起来了，各位有经验的战友请发表高见！1 样品要采用0.22或0.45m滤膜过滤，流动相采用0.45m滤膜过滤并脱气。 2大多数反相色谱柱的pH稳定围是27.5，尽量不超过该色谱柱的pH围3避免流动相组成及极
3、性的剧烈变化。4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。5每次测试完毕，要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱分析色谱柱2504.6mm柱体积3.2ml。如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净，并保存于乙腈中。 6压力升高是需要更换预柱的信号。1：溶剂中的不溶物应使用色谱纯溶剂，膜过滤孔径不超过0.45m2：样品中的不溶物应对样品进行膜过滤孔径不超过0.45m3：泵，进样器等中的不溶物在泵和进样器之间安装置过滤器，在进样器和柱之间安装预过滤器4：柱不溶物的形成：由于溶剂的不互溶而产生的沉淀用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱；在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀检查样品液和流动相是
4、否互溶；由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀将色谱柱密封紧，并保持室温恒定！还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生：1 平衡色谱柱：反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用1020倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水过渡。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡如何平衡色谱柱？ 平衡过程中，将流速缓慢地提高；用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线缓冲盐
5、或离子对试剂浓度如果较低，那么需要较长的时间来平衡2 色谱柱的再生：进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱！ 偶也来参与一下，谈一点拙见1.对于一些特殊型号的柱子，例如不同型号的手性柱应严格按照柱子的相应说明书所要求的进行维护，并按照其规定的围选择试剂的种类，比例，PH ，等等；2.尽量避免柱子进气泡的现象出现，如在实验 过程中留心流动相的体积，同时对所需体积进行大概的估计，以免吸空，气泡进柱，尽管有多种排气泡的方法，但毕竟影响柱子的性能，尤其是比较“娇贵的柱子； 每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获
6、得最大的补偿，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！- 一定得做！ 新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。 卡套柱的安装不加预柱 1将卡套架套入柱芯2将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套见左图3将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片4将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧5然后依同样的顺序连接好柱子的另一端6连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；假设为不锈钢接头应使用专用扳手注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任
7、何时候都不能将卡套取下来，否那么会造成填料的流失。 卡套柱的安装加预柱1将卡套架套入柱芯2将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯见左图3将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片4将子弹头预柱放入卡套片5将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧6然后依同样的顺序连接好柱子的另一端7连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；假设为不锈钢接头应使用专用扳手 更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片同时可以修补色谱柱注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子的填料。 1将修补工具中的2套入柱
8、芯的顶端2将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧3一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网4用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料5将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平6照左图装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端7柱芯顶端套上2，然后参照左图将滤网放入8压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平 平衡色谱柱 反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用1020倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱
9、；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水过渡。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡如何平衡色谱柱？ 平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线缓冲盐或离子对试剂度如果较低，那么需要较长的时间来平衡色谱柱的再生 进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。 表1建议用来冲洗的溶剂体积色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积 125-4 1.6ml 30ml250-4 3.2ml 60ml 250-10 -20ml 400ml 请根据下表选择您的再生
10、方法：极性固定相如Si，NH2*，DIOL基色谱填料的再生：正庚烷氯仿乙酸乙酯丙酮乙醇水*非极性固定相如反相色谱填料RP18，RP8，CN等的再生：水乙腈氯仿或异丙醇乙腈水0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱注意：在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 *如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。色谱柱的维护 1使用预柱保护分析柱硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度2大多数反相色谱柱的pH稳定围是27.5，尽量不超过该色谱柱的
11、pH围3避免流动相组成及极性的剧烈变化4流动相使用前必须经脱气和过滤处理5如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中6压力升高是需要更换预柱的信号 对于高效液相色谱柱的保护我也来谈谈吧。1.首先，溶剂、样品要前处理，溶剂要用色谱级别的并用0.45um的滤膜过滤并脱气，样品要用0.22um的滤膜过滤。2.做样前，柱子要平衡一段时间，先用甲醇平衡30-60分钟，再用纯化水平衡30-60分钟，然后用流动相平衡，直到基线走平时，再进样。3.做样结束后，柱子要用甲醇和水冲洗，冲洗顺序与2步相反，最后柱子用甲醇95%保存。4.如果柱子里东西太多，可以用甲醇，乙腈，水反
12、复冲洗。 谈谈关于启用新柱子(C18)的考前须知:1、首先应检查一下，看是否为原装产品和外观完好情况。2、保存好供应商随柱提供的“关于柱性能测试报告，其中包含了新柱子的最正确性能指标，如在某预定色谱条件下的柱压、柱效等。3、重现流动相条件，主要观察柱压的变化100%甲醇、100%乙腈、50%甲醇-50%水等，并将数据记录在“性能报告上，以便今后对照。4、启用新柱子时的流动相流速应慢一点，如0.3-0.5ml/min，经过10-15min后可以加快。5、对于25cm柱子，流速一般不超过1.0ml/min，能用慢速流量时尽量使用慢一点，当然要考虑分离效果和分析时间。 加预柱喽！ 以上大家都说了很多
13、柱子保护方面的容,已经很全了,但我想补充一个方面:用离子对色谱法时柱子使用的一个问题.我们知道,一般我们分析样品时,常采用有机相(甲醇,乙腈)-水体系作为流动相,对于大部分的分析工作,这个体系就能胜任了,但是,当我们遇到弱酸碱时,比如生物碱,容易拖尾，这时候我们可以采用离子对色谱法进行分离,常用的离子对试剂有庚烷磺酸肭和十二烷基磺酸钠,这时候,我们常采用pH3-5的缓冲盐体系,我们在 采用离子对色谱进行分离时,该怎么保护色谱柱呢一个很重要的问题是,当我们冲柱子的时候,应该先采用有机相-水体系冲,再用水冲,然后用有机相冲，比如我们的流动想是甲醇-0.5%的庚烷磺酸钠(pH3.3)(50:50),
14、我们在冲柱子的时候,应该先用50%的甲醇水冲柱子,然后用水冲,然后用甲醇冲,这是为什么呢我们知道,通常的洗衣粉的主要有效成分是十二烷基硫酸钠(表面活性剂),它可以把一些脂肪油洗下来(烷烃及其衍生物),庚烷磺酸纳也是表面活性剂,如果先用水冲洗,会产生用洗衣粉洗衣服时的效果(ODS的固定相是长链烷烃),会造成固定相的损失,如果我们采用有机相-水体系先冲柱子,由于表面活性剂在有机相中有一定的溶解度,并且流动相的量比较大(相对于固定相,因为流动相是在不停的流动嘛)会使表面活性剂逐渐溶解在流动相中而被冲出,当表面活性剂被冲干净之侯,我们就可以采用水冲,然后采用有机相保存柱子了. 我也说说色谱柱的保护首先要看清楚说明书，是属于何种色谱柱，楼上各位所说都是集中在反相柱上，而正相色谱柱的保护和处理那么有很大不同其次，色谱柱优良好坏的指标有柱效、柱压等如果在实验的某一天突然发现柱压升高，或者峰形脱尾等现象，那么有必要对色谱柱进行处理。处理方法，反相柱楼上的已经说了很多第三，色谱柱在进样时一定要过滤，最好加上预柱再附上一篇英文的色谱柱保护方法 colcare.pdf (100.25k) 我们的液相，既没有在线流动相过滤器，也没有预柱，可能是经济原因不给配，所以，做样都要万分小心，但是，柱压还是会莫名其妙的升高。从最初的100%甲醇600psi慢慢到最后1800psi，这个
