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1、OOClNOCH实验一黄柏皮中小檗碱的提取、别离与鉴定一、实验目的掌握从黄柏皮中提取小檗碱的原理和方法。掌握柱层析的根本操作方法以及其在中药有效成分提取别离过程中的应用。 掌握生物碱的鉴别方法。二、实验原理1、概述生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物，大都有明显的生理活性，是许多中 草药中的有效成分。它们是人类对植物研究得最早最多的一类有效成分，现已别离出有六千余种。这些生物碱在植物 体内一般均与有机酸或无机酸结合成盐而存 在,只有弱碱性生物碱往往呈游离状态，还有一些是与糖结合成苷而存在。小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨科黄连CoptischinensisFran和芸香 科黄柏（Phelloden
2、dronamurenseRup）等植物中提出的一种黄色生物碱。黄连属植物的根茎、须根、叶中等都含有小 檗碱、黄连碱、药根碱、巴马亭等生物碱，我国黄连药材产量占世界第一位。现已发现，唐松草属Thalictrum、 小檗科的小檗属（BerberisL）、十大功绩属（MahomiaNuff）及防己科的天仙藤属Fibraurea等都可作为提取小檗碱的资源植物本实验是从黄柏皮中提取小檗碱。黄柏皮是豆科植物黄皮树PhellodendronchinenseSchneid）或黄槃P.amurenseRupr的树皮，其主要有效成 分为小檗碱，小檗碱及其盐类有较好的抗菌作用，临床用以治疗菌痢和一般炎症。小檗碱是一
3、种季铵碱，其游离碱为黄色针晶C （乙醚），微溶于水，能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成 加成物。不同小檗碱盐类在水中的溶解度均有较 大差异。小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。溶解度分别 为:小檗碱,1：20冷水），1：100（冷乙醇）；盐酸盐,1：500（冷水）;硫酸盐,1：30（冷水），利用这些特性提取盐酸小檗碱。小檗碱加热至110C变为黄棕色，于 160C分解。盐酸小檗碱加热至220C分解，生成红棕色的小檗红碱，因此枯燥时温度不宜太高一般不超过80C。OONOCH3OCH31 / 11小檗碱盐酸小檗碱2、
4、 提取别离原理小檗碱属于季铵碱，其游离型在水中的溶解度最大。而其盐类以含氧酸盐在水中溶解度较大，不含氧酸盐难溶 于水，其盐酸盐在水中溶解度那么更小。利用此性质结合盐析法，可从黄柏皮中提取小檗碱。 由于黄柏中含有大量的粘液质，故采用石灰乳法，使药材的粘液质与石灰乳 生成难溶于水的钙盐，同时碱性条件下小檗碱游离出溶于水层， 加盐酸使其转变 为盐酸盐，降低其在水中的溶解度，再结合盐析法，使小檗碱以沉淀析出。三、仪器与试剂仪器：渗漉柱、层析柱、烧杯、布氏漏斗、抽滤瓶、蒸发皿、滤纸、锥形瓶、螺旋夹等 试剂与样品：黄柏皮粉、石灰乳、蒸馏水、食盐、10%盐酸、浓盐酸、95%乙醇、中性氧化铝100-200目、
5、脱脂棉、漂白粉水溶液、碘化铋钾试剂、碘化汞钾试剂、碘化碘钾试剂、硅乌酸试剂。四、实验内容及流程 一 小檗碱的提取称取黄柏皮粗粉200g，参加150ml石灰乳拌湿，溶胀30min后参加8倍量水浸渍90min后渗漉。渗漉液参加总体积 20%的食盐缓慢参加，局部未溶解NaCl用玻棒缓缓搅拌，静置30min,抽滤，得小檗碱粗品。二 小檗碱的精制将所有粗品湿品称重，放入烧杯中，加 20倍量蒸馏水，加热至沸，趁热抽滤，略放冷后向滤液中滴加浓盐酸，调pH到2, 放置2h，过滤，滤出的沉淀用少量蒸馏水洗至pH值为5,抽 干，80C以下枯燥，称重，得精制盐酸小檗碱。三 柱层析演示实验四检识 1生物碱的一般鉴定反
6、响 去少量精制盐酸小檗碱,用酸水溶解,分成四份,分别滴加试剂1碘化铋钾试剂,观察产生沉淀颜色；2碘化碘钾试剂,观察产生沉淀颜色；3硅乌酸试剂,观察产生沉淀颜色或溶液浑浊情况。 记录观察到的现象和反响结果以及得出结论。 2、小檗碱的特殊鉴别反响3滴,即产生樱红色。取盐酸小檗碱少许，加稀盐酸2ml溶解后，加漂白粉液2 / 11实训思考1从黄柏皮中提取小檗碱是利用了它的什么性质？2提取别离过程中加NaCl起什么作用？黄柏皮粗粉200g参加150ml石灰乳拌湿，溶胀30min后再参加8倍量水浸渍80min后渗漉渗漉液 参加总体积 静置抽滤药渣弃去20%的食盐滤液沉淀小檗碱粗品溶于20倍量沸水，趁热抽滤
7、丨 滤液T不溶物加浓盐酸调pH2左右，放置，抽滤滤液沉淀“r用蒸馏水洗至中性，80C下烘干盐酸小、檗碱3 / 11实验二 虎杖中蒽醌类成分的提取别离与鉴定 【实验目的】1了解苷和苷元的提取别离方法2掌握pH梯度萃取法在别离重要有效成分中的应用，并能通过被别离化合 物的结构分析实验结果3掌握蒽醌类化合物的鉴定方法实验原理】1、概述虎杖为蓼科植物虎杖PolygonumcuspidatumZucc） 的枯燥根茎和根。具有祛风利湿，散瘀定痛，止咳化 痰的成效。虎杖中的成分主要含蒽酿的大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等游离蒽酿，大黄素-6 -甲醚-8-0-D- 葡萄糖苷、大黄素-8-0-D -葡萄糖苷等。尚含
8、非蒽酿成分，主要是白藜芦醇葡萄糖苷，又称虎杖 苷、云杉新苷，用于防止细胞癌变和恶性肿瘤的扩散，对艾氏腹水瘤有抑制作用。白藜芦醇还具有扩张血管降压、抗血栓形成、降血脂等方面的作用。此外还有鞣质等成分。1大黄素emodin本品系橙黄色长针晶乙醇，溶点256257C，几乎不溶于水，易溶于乙醇及碱液（NH40H, Na2C03,NaOH水溶液）。2大黄酚chrysophanol本品为六角形片状结晶，或针状结晶，熔点196C,能升华，不溶于水，溶 于苯、三氯甲烷、乙醚、冰醋酸，难溶于石油醚，可溶于NaOH水溶液及热的Na2C03水溶液。3大黄素一6-甲醚phyclone4 / 11本品为黄色针状结晶，熔
9、点 207C,乙醚、乙醇、冰醋酸,难溶于石油醚,能升华不溶于水，溶于苯、三氯甲烷、 易溶于NaOH溶液。4.白藜芦醇resveratrol本品又称菧三酚，为无色片状结晶或针晶，熔点256257C，能升华，易溶于乙醚、三氯甲烷、丙酮、甲醇等。分子结晶水者在138140C熔融，继白藜芦醇datin5白藜芦醇苷polydatinpeceid又称菧三酚苷，为无色针状簇续加热又固化，至225226C全融。难溶于乙醚，可溶于醋酸乙酯，易溶于丙 酮、乙醇、甲醇、热水和Na2CO3、TaOH水溶液。2、提取别离原理工I I /H./=-:根据虎杖中游离蒽醌和苷溶于乙醇而提取，因苷和苷元在水和乙醇中 的溶解度不
10、同采取萃取方法，以石油醚别离出极性小的苷元游离蒽酿，以水别离 出极性大的苷类成分，再进一步用pH梯度萃取法使酸性强弱不同的游离蒽酿得 以别离。【实验材料】烧杯、渗漉柱、水浴锅、铁架台、分液漏斗、锥形瓶、外表皿、 试管、层析缸、量筒、抽滤瓶、布氏漏斗、pH试纸、橡皮管、螺旋夹、载玻片、 显微镜、石棉网、酒精灯、镊子、棉花、滤纸5 / 11虎杖粗粉、95%乙醇、石油醚、5%NaHC03溶液、20%盐酸、5%Na2C03溶 液、2%NaOH溶液、30%H O溶液、氨水、薄层硅胶 G、CMC-Na、蒸馏水、甲2 2醇、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、环己烷、0.5%醋酸镁乙醇溶液【实验步骤】一、提取别离工
11、艺流程 一蒽醌的提取与别离虎杖根茎粗粉(200g)195%乙醇拌湿，装柱295%乙醇200ml浸泡过夜 3渗漉渗漉液 减压回收乙醇至70ml左右 乙醇总提物 抽滤滤液石油醚100ml+50ml*2)萃取人、z i田用石油醚层(苷丨 5%NaHCO (50ml*3)3下层NaHC3 层石油醚上层层h)20%HCl，调 pH1-2T2抽滤5%Na CO23忘31p母1液沉淀水洗至中性，枯燥称重(上层石油醚层Na2C O3层下层1)20%HCl，2调 pH1-2%NaOH强酸性成分2抽滤、水洗、(50ml*3枯燥6 / 11NaOH层下层1)20%HCl,调 pH1-22抽滤、水洗、枯燥 大黄酚+大
12、黄素甲醚混合物2395%乙醇重结晶石油醚层大黄素1上层水层含白藜芦醇苷1挥去乙醚 加热煮沸， 搅拌 2倾去上清 液 上清液 冷却、过滤7 / 11二白藜芦醇葡萄糖苷二、鉴定1、游离蒽醌类化合物的一般鉴别反响 将上述别离得到12各少许，加95%乙醇使溶解，分别做以下试验， 观察颜色变化。1Borntr?gers 反响取上述样品溶液分别加数滴2-3滴2%NaOH水溶液，观察颜色变化，再加少量30%H O液，加热后观察颜色，然后加酸至酸性时，再碱化，观察反响过 程中颜色变化凡具有邻位或对位羟基的蒽醌类化合物加碱液后呈紫兰色；其他羟基蒽醌呈红色 2醋酸镁试验上述样品溶液分别加05%醋酸镁乙醇溶液数滴，
13、观察颜色变化几乎有邻位或对位羟基的蒽酿呈红紫色兰色, 有二个2-羟基的或与之互成间位羟基的蒽酿呈橙红红色，只有一个a-羟基或一个B-羟基或二个羟基互为间位 羟基的蒽酿呈黄橙f橙色。3升华实验 取虎杖粉末少许，平铺于载玻片中部后放在垫有石棉网的小铁圈上，玻片两 端各放一小棍，再盖上另一载玻片，其上置一块润湿棉花注意上面的玻片勿触 及粉末。用酒精灯小心隔石棉网加热检品，边加热边移动酒精灯，以免过热烧 焦检品。当上面玻片上凝结有明显升华物时，停止加热。冷却后，取下盖片，置于显微镜下观察，多数为黄色针晶或羽毛状晶体，加碱液呈红色反响。2、虎杖苷的鉴别1三氯化铁反响样品3数毫克，溶于乙醇中，滴加1%FeCl3溶液数滴，观察颜色变化有酚羟基者常呈黄、绿、紫、红等色。8 / 112香草醛反响取样品数毫克，加乙醇，1ml溶解后，加香草醛盐酸试剂，凡有间苯二酚或间苯三酚结构者呈红色。3重氮盐反响去样品数毫克，加5%NaC0溶液，滴加新配置的重氮盐试剂1-2滴, 凡酚羟基邻位或对位无取代者呈红色。3、薄层鉴定1制版称取2g层析用硅胶G于小乳缸中，加5-7ml5%oCMC-Na水溶液研磨成糊状，待气
