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1、优质文档胃癌细胞外表,唾液酸糖链的表达和其和侵染、转移相关性的探究 优质文档 摘 要本设计为了探究唾液酸在胃癌发病过程中的相关作用，探讨,唾液酸糖链构造在胃癌发生中所造成的影响。设计内容主要分为两局部：,唾液酸糖链构造在不同分化程度的胃癌细胞外表的表达对胃癌细胞侵染实力相关性的探究；,唾液酸糖链构造对胃癌细胞的转移实力相关性的探究；第一局部分为两个试验设计用MAL细胞化学染色法选出阳性细胞计算出MAL胃癌细胞的阳性率和体外细胞粘附试验测得吸光度测试唾液酸跟细胞粘度的关系；其次局部通过重组基底膜试验来计数胃癌细胞的穿膜细胞数，确定,唾液酸对胃癌细胞的侵染、转移的影响。为胃癌疾病的探究和治疗供应必
2、须的理论及试验根底。关键词：,唾液酸；表达；胃癌细胞；侵染；转移目 录第一局部： 文献综述1 唾液酸11.1简介11.2唾液酸的生物学功能12 胃癌22.1胃癌发生的过程22.2胃癌的侵染、转移23 唾液酸和肿瘤作用33.1唾液酸和恶性肿瘤33.2唾液酸和胃癌44凝集素54.1简介54.2 MAL简介54.3 MAL对胃癌细胞外表糖链的标记6其次局部 课程设计局部1材料71.1细胞株及细胞造就81.2试剂81.3试剂配制91.4仪器设备92方法102.1 MAL细胞化学染色102.2 体外细胞粘附试验112.3 重组基底膜侵袭试验113 设计123.1 胃癌细胞外表,唾液酸糖链构造和其转移实力
3、的相关性123.2 胃癌细胞外表,唾液酸糖链构造和其侵染实力的相关性124 总结125 设计体会13参考文献15优质文档第一局部 文献综述1 唾液酸1.1简介 唾液酸是一种神经氨酸乙酰衍生物，广泛分布于体内各组织中，被认为是重要的肿瘤标记物，并在检测疗效、复发和预后判定等方面都有必须的价值。唾液酸是一类含个碳原子的羧基化单糖酰化衍生物的总称，在人体的唾液酸主要为N-乙酰神经氨酸和N-羟乙酰神经氨酸两种，大多由葡萄糖代谢生成。唾液酸广泛分布于真核细胞外表糖蛋白或糖脂的寡糖链的最末端，是细胞膜上糖蛋白、糖脂的重要成分1。体内大多是葡萄糖代谢生成，在血清中以糖结合和脂结合两种形式存在。依据唾液酸和糖
4、残基的连接方式可将其分为, 2,3-、 2,6-或 2,8-三大类。1.2唾液酸的生物学功能唾液酸具有的末端定位性及带负电荷两大特性，使他们对调整细胞间、细胞和间质、细胞和分子的相互作用有特殊意义，在机体生理、病理过程中发挥重要的作用。唾液酸化修饰屏蔽了和之相连的糖蛋白及糖脂构造，稳定细胞膜构造，提高了热稳定性，并爱护细胞和大分子不受酶及免疫系统的攻击，从而起爱护细胞的作用。很多恶性肿瘤细胞和一些病原体那么利用唾液酸修饰，躲避机体免疫监视和攻击。唾液酸作为识别为点，参和细胞识别及信息传递。唾液酸可被选凝素、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素家族等粘附分子识别。也是一些信号分子、病原体如流感病毒的作
5、用位点。外表唾液酸话使得细胞外外表带负电荷，有利于和带正电荷的物质结合，从而参和细胞水盐代谢、物质转运等生理过程。带负电荷的唾液酸具有亲水性，在四周形成很大的水合半径，造成细胞间距离的增加，并通过电荷排斥阻挡分子间相互作用，所以说唾液酸对分子间甚至细胞间的相互作用都有潜在的抑制作用2 。这种特性可阻挡血红细胞的凝合、粘附，有利于细胞的迁移，对于人体的生理活动、生长发育有重要意义。唾液酸化修饰是生命活动所必需的，有试验证明抑制唾液酸的生物合成对幼鼠是致命的3。唾液酸在脑中的含量很高，它能够促进神经细胞的分化、发育和再生，参和突出的传递，参和记忆和学习功能，机体发育阶段各种组织唾液酸表达水平较高。
6、而在成年人的组织中那么为低表达，如成年人组织中出现唾液酸化水平提升，那么提示发生病变的可能。2 胃癌2.1胃癌发生的过程胃癌是最常见的恶性肿瘤，我国的病人主要以进展性胃癌为主，确诊时绝大多数已经发生转移，这是造成治疗失败的主要缘由之一。因此，探究胃癌细胞的侵袭转移机制，早期发觉和预料癌的转移、视察治疗效果和评价预后是胃癌探究的重要内容。和大多数肿瘤相类似的是，胃癌的侵袭和转移机制也极其困难，参入的因素特别多，包括和细胞质/核有关的因素，细胞膜及外表构造的变更等，是一个多步级联过程。其中主要包括以下步骤：癌细胞从原发灶脱落；和细胞外基质(Extracellular matrix，ECM)、基底膜
7、(Basement membrance，BM)发生粘附并降解；穿越血管壁进入循环并到达远处部位；肿瘤血管形成；在继发部位不断增殖形成转移灶。在这些多步骤的动态、连续的侵袭转移过程中，癌细胞由原发灶脱落，是肿瘤发生侵袭转移的始动因素4。2.2胃癌的侵染、转移肿瘤细胞游走性增加，即肿瘤细胞之间及和四周组织粘附作用的减低是肿瘤细胞由原发灶脱落的主要缘由。而粘附作用的减低又主要和肿瘤细胞外表糖蛋白糖链构造的变更有亲密关系5。细胞膜糖蛋白是蛋白质和寡糖链(糖链)的共价复合物，其糖链在维持细胞分化、功能和形态方面起着特别重要的作用。一旦细胞膜外表糖链构造发生异样变更，就预示着其根本的生物学行为发生了变更6
8、-9，尤其在细胞的粘附、运动、分子识别及细胞识别等根本功能方面的变更，和肿瘤细胞的恶性增殖和转移有干脆关系陋10。因此，探究细胞膜外表糖蛋白及糖链构造变更对于提醒肿瘤细胞的侵袭和转移是特别重要的。胃癌致死率高的两个重要因素是胃癌患者确诊时多数处于中晚期以及缺乏有效的治疗手段。胃癌患者治疗失败和致死的主要缘由就是肿瘤的侵袭和转移。胃癌发生侵袭和转移是一个多基因、多阶段、连续困难的过程，这一过程包括肿瘤细胞从原发灶脱离，穿越基膜及细胞外基质浸润迁移并进入血管，黏附于血管内皮，进入循环系统并随血流到达远处，穿出血管侵入细胞外基质并形成转移灶。癌细胞脱离原发灶后，穿越组织屏障是转移的关键步骤。细胞外基
9、质和基膜(BM)是肿瘤生长和扩散的自然屏障，细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)主要成份由胶原、糖蛋白、蛋白多糖和氨基葡聚糖组成。ECM在上皮或内皮细胞的基底部，即以基底膜2usememmembranes，BM)的形式存在，在细胞间构造以间质结缔组织形式存在11。肿瘤细胞的侵袭是须要和细胞增殖、分化、移动的相关基因及其表达调控模式的变更和促进细胞移动的外界因素两者的共同作用。虽然肿瘤细胞侵袭的分子机制还不是特别清晰，但已发觉很多调控细胞侵袭转移的关键分子及其信号通路。肿瘤细胞通过其外表受体和ECM中的各种成分粘附后激活或分泌蛋白降解酶类来降解基质，从而形成局部溶解区，构
10、成了肿瘤细胞转移运行通道。一般恶性程度高的肿瘤细胞具有较强的蛋白水解作用，可侵蚀破坏包膜，促进转移。目前探究认为，MMPs不但介导肿瘤细胞对宿主细胞外基质的降解，还限制肿瘤新生血管的生成，影响细胞黏附分子的功能及调控肿瘤细胞的生长等。而肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移所必需的，被认为是很重要的预后因素11。3 唾液酸和肿瘤作用3.1唾液酸和恶性肿瘤有关恶性肿瘤和唾液酸关系的探究是从发觉恶性肿瘤血清唾液酸提升起先的。早在1955年，Winzle等首次报道，恶性肿瘤患者血清唾液酸提升。上世纪七十年头，国外学者们通过动物试验及人体肿瘤探究，证明一些恶性肿瘤个体血清唾液酸水平异样提升。到上世纪九十年头，唾
11、液酸起先作为血清肿瘤标记物用于临床。尽管血清唾液酸水平提升的机制尚未完全明确，但目前的探究普遍认为这是由癌变细胞过表达的唾液酸大量脱落入血所致。在一些非肿瘤性病变中，血清唾液酸也可能会提升，如：感染、炎症等，但一般而言，其提升幅度远较恶性肿瘤的为小，而且作有效抗感染治疗后可下降至正常。众多的探究提示恶性肿瘤患者血清唾液酸提升程度较非肿瘤性病变的大，所以尽管血清唾液酸对恶性肿瘤的诊断并非特异性，但具有较高的敏感性，联合检测血清唾液酸及其他肿瘤标记物对恶性肿瘤的筛查、早期诊断有很大的临床意义。有文献报道,血清唾液酸水平和肿瘤恶性程度、肿瘤临床分期相关,分化越低、分期越晚血清SA水平越高;作有效治疗
12、后血清唾液酸可下降，肿瘤复发、转移后又上升，提示血清唾液酸不但可作为恶性肿瘤协助诊断的指标，还可作为病情开展、肿瘤消长的监测指标。然而，血清唾液酸检测并不是干脆检测细胞外表的唾液酸表达状况，不能深化了解肿瘤细胞唾液酸表达的详细状况12。3.2唾液酸和胃癌细胞癌变过程中常伴有细胞膜外表糖蛋白N-糖链构造的异样变更，其中肿瘤细胞外表唾液酸化水平增加和肿瘤的恶性进展及早期转移有亲密联系。有关唾液酸在人胃癌细胞外表表达的特异性及其临床意义的探究，国内外相关报道较少。唾液酸在胃癌细胞外表的表达和胃癌侵袭、转移潜能之间的相关性，尚有待进一步探究和探讨。利用能够特异性识别、结合NeuAc 2,3Gal1,4
13、GlcNAc/Glc唾液酸构造的朝鲜槐凝集素，检测2,3唾液酸在胃癌组织及其转移性淋巴结以及大肠癌组织中的表达。化学上，当糖链构造的末端连接上唾液酸便意味着糖链延长的终止。因此，唾液酸一般是糖链末端构造。探究发觉，SA是血清糖蛋白和糖脂生物效应的重要成分，在细胞的恶性转化中起特殊作用。而血清中存在一种新蛋白脂质，是含唾液酸的糖脂，是神经节甘脂的衍生物，而正常人缺少这种糖脂或含量甚微。这类糖脂结合唾液酸的异样提升和恶性肿瘤的发生亲密相关。肿瘤细胞的转移和细胞外表糖复合物的异样表达特殊是糖复合物末端的唾液酸化变更亲密相关。由于它位于糖链末端并携带负电荷，唾液酸对分子之间甚至细胞间的相互作用都有潜在
14、作用。一方面唾液酸可通过增加肿瘤外表负电荷和掩盖其外表抗原，从而有利于肿瘤细胞在血液循环中躲避宿主免疫细胞的杀伤；此外，唾液酸的聚积，能够干脆影响糖链分子的连接，增加细胞之间排斥性，可使得肿瘤细胞之间及和四周组织的粘附性降低，细胞简单由原发灶脱落而发生转移。胃癌细胞外表异样唾液酸化的发生可能是由于,唾液酸转移酶表达水平增加或活性增加，导致这种带负电荷的,唾液酸糖链构造在肿瘤外表增加，从而使得肿瘤细胞之间的粘附力减弱，转移实力增加。因此探究其细胞外表糖蛋白糖链构造特点，将有助于从新的角度探讨胃癌发病机制，为临床诊断及预料预后供应试验和理论依据。探究胃癌细胞外表MAL特异性识别、结合的糖蛋白糖链构
15、造特点，有可能利用这些特异性糖蛋白作为靶点或抗原，研制、开发其抑制剂或单抗，通过对末端糖链的修饰作用，消退或降低肿瘤细胞的恶性转移或侵袭性能，为临床供应新的治疗方法13。4凝集素4.1简介凝集素是一类糖结合蛋白，广泛分布于各种有机体中。凝集素的最大特点是能专一的识别糖蛋白或糖脂中某一特定的单糖或寡聚糖中特定的糖基序列而和之结合14。细胞膜及细胞浆内存在凝集素受体，正常状况下这种凝集素受体相对稳定，当细胞恶变时，受体的数量和性质随机变更。利用凝集素具有和特定糖基转移性结合的特性，将其作为分子探针检测肿瘤细胞外表及细胞内糖基受体的分布，探究肿瘤细胞的恶性进展和侵袭、转移状况，对于肿瘤的早期诊断、监控肿瘤进展及评价预后具有重要的临床价值13。4.2 MAL简介植物凝集素MAL是从植物朝鲜槐的种子中提取的一种糖结合蛋白，是一种有效的淋巴细胞有丝分裂促进剂。探究发觉MAL对NeuAc 2,3Gal1,4GlcNAc/Glc这一完整的三糖构造具有特异性识别和结合作用，且MAL仅能够识别N-型糖链的末端唾液酸，MAL仅对胃癌细胞外表
