《薄层色谱实验》由会员分享，可在线阅读，更多相关《薄层色谱实验（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、薄层色谱（TCL）实验一、实验目的1、掌握薄层色谱按作技巧2、了解薄层色谱的基本原理和应用 二、实验原理1、原理薄层色谱是一种微量分析的分离过程，它将样品点在以玻痛板或铝、塑料等片材为载体 的多孔吹附剂薄层的网定相上，利用流动相在特定的展开室中将混合物中的组份推移到不同 距离处，在色谱展开签个过程中，样晶的成份受到正反不同的力的作用。（1）流动相利用毛细管力带着祥品穿过同定相。 样品与冏定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶牧-（诱导）-傍枕相互作用，氢镀和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、叹附、分散、离子交换和络合等分离机理。由于样品组份与流动相和冏定相之间的相互作用力程度不同，鑒个毛细
2、管流动过程中分 离运动都在进行。基于这点，TLC系统（流动相和固定相）必须与样品很好地匹配。用显色试剂处理，许多组份可在日光或紫外灯光下检视。色谱可用肉麻或使用光密度计 和照相机记录或影像系统方法来评价。2、薄层色谱的用途1）化合物的定性检验通过与巳知标准物对比的方法进行来知物的鉴定。在条件一致的悄况下，纯化合物在楚 层色谱中呈现一定的移动距离，称比移值（凡值）。利用薄层色谱法可鉴定化合物的纯度或 确定两种性质相似化合物是否为同一种物质。影响比移債的因素很多，如薄层的厚度，吹附剂颗粒的大小，酸碱度、活性、外界遍度 和展开剂纯度、组成、挥发度等。所以要获得比移值重现性就比较嗣难。为此，在测定某一
3、 式样时，晟好用对照品和祥品同时对照进行。R广半厶2）快速分离少量物质（几到几十連，甚至0.01 ug）3）跟踪反应进程，在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失，来 判断反应畏否完成。4）化合物纯度的检验（只出现一个斑点，且无脱尾现象，为纯物质）3、主要操作步骤薄层板的制备；薄层板的活化；薄层板色谱展开；薄层色谱显色与分析。四、薄层色谱操作技巧1、手工自制板1玻璃扳的要求：用于制备薄层板的玻璃板要求表面光洁、平整，晟好使用厚薄l-2mm 的优质平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄层板，玻璃极需洗净至不挂水，晾干，贮 存于干燥洁净处备用。玻痛板反复便用时，应注意经常用洗液氏碱液
4、清洗，保持玻痛板面的 光洁是保证薄层板质t的最基本要求。1.2制作方法：除另有规定外，将1份呎附剂加适量的水（如1份硅胶G般加3份水）， 在研钵中用研杵沿一个方向小心研磨至成均匀的有适当粘稠度的胶浆，立即倾入涂布器中， 均匀地向前推进涂市在玻璃板上，或按照不同涂布器的规定操作涂布，涂布好的薄层板于室 遍下在水平台上晾干，再在规定的遍度（一般为105C110C）下活化约30分钟，贮于干燥器 中备用。薄层板的厚度一般为0.250.5mm.o1.3商品化供应的预制板和高效板板的尺寸一般有 20 X 20cm , 10X20cm , 20X 10cm, 10X 10cm2、TLC/HPTLC板的预洗及
5、活化一般来说，色谱板应用溶剂如氯仿-甲醇（8:2）,甚至用更强的洗脱溶剂的混合物进行预 洗。具体操作可通过空白色谱展开来实现。色谱板预洗完后，应在105 C加热1小时进行干燥，再在室温下趣放至少2小时（需 采取保护描施以防止实验室空气中的汚染物重新附著在其上面，如放宣在空的干燥器中）。3、样品点样3点状点样和条带状点样每次点样前，TLC/HPTLC板应在正常光线下和紫外灯下用肉眠检查薄层的损伤悄况和 杂质，只有无损伤、清洁的TLC/HPTLC板方可使用。样品可进行点状或条带状点样。要想获得晟佳的薄层分辨率，必须保证移行方向中的起 点要小，常规的TLC薄层点状点样每次点0.5至5微升。点样量较大
6、的祥品可便用自动化装 虽点样，喷雾成条带状畏一种可以点样量大而同时又能促成最有效分离的点样方法。在常规 操作过程中，人工点样一殻使原微量毛细管（0.5/1/2/3和Rd）,点样时毛细管必须完全充 满和完全排空，要以垂賣方向小心接蝕TLC/HPTLC板而，不要损伤薄层，受损的薄层会导 致溶剂不规律地流动而在色谱上产生失真的TLC谱带。3.2样晶点样位罢起点下缘的最小距离b取决于溶剂量。两个起点之间的距离c必须令平行移行的主成份 不会柯互触氏。点状点样时原点的直径应小于或等于3mm （高效板原点的賣径应更小），条 带的长度d由点样样品体积或样品的种类和相对于板的尺寸点样的数目来决定。到板侧边的 距
7、离a必须足够大以避免分离区失真变形。4、层析4.1展开室4.1.1宜立式双槽展开室具有节筍溶剂、便于预平衡、可控制展开箱內的湿度等优点。4.1.2水平展开室可以从薄层板的两侧向中间水平地展开，这样可便一块薄层板所承受 的样品个数比常规上行展开的薄层板增加一借。4.1.3自动展开室（AMD）可使用五种溶剂对同一薄层进行多次展开，自动控制预饱和、 展开方式、展开距离和干燥条件，分离效率比传统方式提高三倍（可在80mm 分离40 种成分），符合GLP/GMP要求。4.2溶剂使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇/冰乙酸 /水=4:1:1,V/V/V）,或者绝对量（如1
8、8ml甲苯+2 ml甲醇）。其总量应足以使TLC/HPTLC 板的漫入深厦约为5tnm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复便用，如需分层，则按要求 放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。五、本实验操作内容山楂有效组分熊晃酸含量的鉴定。呎附剂/快板：硅胶G3g, 10ml 0.5%甲垄纤维亲钠。供试品：取山楂0.5g,加乙酸乙酯2ml,法泽24h,取上清液备用。对照品：加甲醇制备成lml合有Img的溶液。点祥：供试晶溶液点祥4ul,对照品溶液点#2ulo展开剂：甲苯/乙酸乙酯/甲酸（20: 4: 0.5）o显色剂：硫鸡乙醇溶液（3-10%）显色操作：喷显色剂后，在80C加热數分钟，至斑点显色清晰为止，虽日光或紫外灯 （365nm）下检测。六、实验注意事项1、载玻板干净且不被手汚染，呎附剂在玻板上分布均匀平整；2、点样不能戳破薄层面板，各样点间距11.5cm，点样賣径应不超过3、展开时，不让展开剂前沿上升至底线，否则无法准确计算片。4、显色加热时间不易过长，否则薄层裘面易炭化而背景被汚染。七、思考题1、如何利用皿值来鉴定化合物？2、薄层色谱法点祥时应注意什么？3、常用的薄层色谱显色剂有那些？（显色：展开后先烘干1.5min,喷显色剂，烘干3min左右） 如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！
