肺癌动物模型

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1、原发性支气管肺癌动物模型【摘要】制作动物模型的根本目的是要对人类疾病进行预防和治疗, 因此应选择那些结构、功能、代谢和人类相似的动物进行研究。目 前，研究肺癌的病因多采用吸入方法，研究肺转移癌多采用外科种 植，而研究原发性支气管肺癌以支气管灌注法为佳。【关键词】肺癌，支气管肺癌，动物模型肺癌是最为常见的恶性肿瘤之一，一般认为80%90%的癌症与环境 因素有关，与肺癌发病相关的因素有吸烟、大气污染、职业接触、 室内空气污染等。为减少肺癌对人类的威胁，最经济的预防措施就 是对肺癌高危险人群进行筛查或监测，发现某些个体出现早期肺癌 指征，及时对其进行预防或治疗。因此，研究支气管肺癌的发生发 展过程及

2、其机制，寻找机体形成实体性肿瘤过程中的早期变化指标 就成为预防肺癌的重要课题。本课题采用化学诱癌的方法建立了大 鼠的肺癌模型1。1材料与方法1.1仪器与试剂离心机，722型分光光度计，3-甲基胆蒽，二乙基亚硝胺，碘化油 注射液，氨苄青霉素钠，链霉素，硫喷妥钠，N-乙酰神经氨酸，间 苯二酚。显色剂：2%的间苯二酚溶液10 ml+78 ml12 mol /L的浓 HCl +1.5 ml 0.1 mol /L的FeCl3溶液，加蒸馏水至100 ml，放置4 h后使用，4 C冰箱可贮存1周。Schiff试剂，盐酸，偏重亚硫酸 钠。1.2实验动物清洁级Wistar大鼠，71只，雌雄各半，体重180220

3、 g，由中国 医学科学院实验医学中心提供。随机分成3组(诱癌组，溶剂对照 组，正常对照组，每组动物数分别为31、20、20只)。1.3 动物肺癌模型的建立1.3.1诱癌剂配制在7080 C水浴中将MCA溶于碘化油注射液中， 配成浓度为100 mg/ml的混悬液，在此混悬液中再加入10 %(V/V)DEN2。1.3.2动物染毒诱癌组：大鼠肌注硫喷妥钠(12.5mg/kg体重)作 为基础麻醉，同时肌注氨苄青霉素2万单位及链霉素2万单位以预 防感染，再用乙醚麻醉后,一次向左肺叶支气管注入0.1ml诱癌剂 (含MCA10mg，DEN 0.01 ml)。溶剂对照组：处理同上，只注入碘化 油注射液。正常对

4、照组：不做任何处理。1.3.3染毒效果检查对大鼠进行染毒后2 d对大鼠拍摄正位X线胸 片。在X线片上显示肺叶内有清晰、致密的团状药物阴影者，证明 药物已注入肺叶。而药物阴影分散、模糊的大鼠则从诱癌组排除。 1.3.4动物观察及样品采集各组动物均喂以常规饲料，自由饮水。 每周称一次体重。在染毒前及染毒后第1、3、5、7、10周，对所有 大鼠进行尾静脉采血约0.2 ml,离心分离血清，测定LSA值。每次采 血的同时，诱癌组随机选4只大鼠，雌雄各半，处死后常规解剖， 观察各脏器肿瘤发生情况，取肺脏肿瘤组织及其他可疑组织，置10% 中性福尔马林液中固定，保存，以备作病理检查Feulgen染色。染 毒后

5、第10周处死全部动物，处理同上3。2.讨论在肺癌学研究中，对动物诱发肿瘤是很重要的实验方法。以往 诱发肺癌的方法主要有注射法、口服法、物理辐射、气管注入 法等，一般为长期多次接触法，诱发时间在15周2 a。我曾 参考田鸿生等建立大鼠肺癌模型的方法，采用阳性致癌物3-甲 基胆蒽溶入人造影剂碘化油，一次性注入肺叶支气管，诱发大 鼠肺鳞状细胞癌，由于实验中未能对灌注效果进行检查，其中 未排除灌注失败的动物，所以实际诱癌率应更高。采用3-甲基 胆蒽同时加入促癌剂二乙基亚硝胺，染毒后拍摄X线片以确定 灌注效果，在染毒后仅3周发癌率达到100%，达到了设计目的, 建立了一种快速诱发支气管肺癌模型的方法。与

6、多次染毒法比 较，实验人员接触阳性致癌物的机会较少，对动物的实验过程 干扰较小。但由于病程发展太迅速，在研究肿瘤的早期病变时, 有些变化发生时间很短，难以仔细观察。今后如需要用此方法, 可根据研究目的，对诱癌剂及促癌剂的使用适当地调整，使其 诱癌效果更符合实验的要求。本实验诱发的大鼠恶性肿瘤 均为支气管肺癌,其起源组织为肺内支气管上皮细胞。病变 过程主要经历了支气管上皮细胞脱落、支气管上皮复层化、 支气管上皮鳞状化生、早期浸润癌、晚期高度角化癌等阶 段。本实验诱发的大鼠恶性肿瘤均为支气管肺癌，其起源组织为 肺内支气管上皮细胞。病变过程主要经历了支气管上皮细 胞脱落、支气管上皮复层化、支气管上皮

7、鳞状化生、早期 浸润癌、晚期高度角化癌等阶段。3总结与展望动物模型是进行试验研究的重要手段和平台，对肺癌的发生机 制、诊断及治疗的研究具有十分重要的意义。进行肺癌研究时， 需结合模型特点、肺癌自身特点和实际需要选择合适的模型方 法。支气管 肺癌模型应随其基础研究、实验性治疗的日益深入 和发展而不断完善。继续研究更符合人类肺癌多种生物学特性 的动物模型并加以改进，努力减少个体间的差异，解决动物转 基因效率低和基因表达方面的问题，提高实验的成功率、可行 性和准确性。随着基因组学的发展，利用稳定的肺癌细胞系建 立转基因鼠模型，通过干预与肺癌形成相关的调控因子及分子 通路，实现对肿瘤形成过程的控制，不

8、仅有利于肺癌病理过程 的理解，还能提供理想的靶向治疗试验的临床前模型，这些将 是肺癌动物模型的发展方向5。1. 彭鹏，杜秀平.肺癌动物模型的制作概况J.徐州医学院学报.2005(03):263- 267.2. 杜秀平，高向阳，韩正祥,彭鹏.小鼠Lewis肺癌胸腔与皮下移植模型的比较研究 J.中华肿瘤防治杂志.2007(23):1783-1785.3. 杜秀平，韩正祥，高向阳，彭鹏.小鼠Lewis肺癌模型对不同药物干预的反应J. 江苏医药.2008(07):703-705.4. 胡丽丽，阮永华.移植性肺癌动物模型的建立和研究进展J.临床与实验病理学 杂志.2012(08):906-908.5. 俞惠新，王铁生，林秀峰，齐效君，谭成，陈波，et al.埃本麟酸钠对肺癌骨转移动 物模型的干预作用J.肿瘤防治研究.2007(05):331-333+396.