关于汽酒中微生物的检查

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1、关于汽酒中微生物的检查1主题内容与适用范围本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。本标准适用于出口食品的检验。2设备和材料2.1吸管: 1mL,具0.1mL刻度；5mL和10mL,具1mL刻度。2.2水浴箱：44.50.5。2.3培养箱：361,44.50.5。2.4冰箱: 05和-15-20。2.5均质器。2.6乳钵和研棒。2.7平皿：直径90mm。2.8天平：感量0.1g。2.9显微镜。2.10 稀释瓶：100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。2.11 玻璃珠：直径约5mm。2.12 菌落计数器。3培养基及试剂3.1月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉

2、汤。3.2煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。3.3 EC 肉汤。3.4伊红美蓝琼脂(EMB)。3.5营养琼脂斜面。3.6色氨酸肉汤。3.7 MR-VP培养基。3.8 Korser氏枸椽酸盐肉汤。3.9结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。3.10Butterfield 氏磷酸盐缓冲稀释液。3.11 生理盐水。3.12 革兰氏染色液。3.13 Kovacs氏靛基质试剂。3.14 甲基红指示剂。3.15 Voges-pros kauer(V-P)试剂。4样品制备4.1以无菌操作取有代表性的样品。如有包装则用75乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检验,应将冷冻样品置于-15保存；非冷冻而易腐的食品,应置于4

3、冰箱保存。检验前冷冻样品可于25 18h内解冻,或在45以下15min内解冻。4.2不同食品样品匀液的制备4.2.1液体食品以灭菌吸管取样25mL放入装有225mL稀释剂的灭菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠),以30cm幅度、于7s内振摇25次(或以机械振荡器振摇),制成1:10的样品匀液。4.2.2固体和半固体食品以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质12min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。4.3稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液,如10*-2、10*-3、

4、10*-4。从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。5大肠菌群的测定5.1大肠菌群MPN值的测定5.1.1对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤,每管接种1mL。5.1.2将接种管置于361培养482h。5.1.3观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生,记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。如所有LST肉汤管均未产气,则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者,则进一步作证实试验。5.2大肠菌群的证实试验5.2.1将所有产气管用直径为3mm的接种环移种到煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中。5.2.2置BGLB肉

5、汤管于361培养482h。5.2.3记录所有BGLB肉汤管的产气管数。5.2.4结果报告：按BGLB肉汤产气管数,查MPN表见附录B (补充件)报告每克(毫升)样品中大肠菌群的MPN值。6粪大肠菌群测定6.1用直径为3mm的接种环将所有482h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。6.2将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.50.5水浴箱内,培养242h。水浴箱的水平面应高于肉汤培养基液面。应以已知为44.5产气阳性的大肠杆菌和44.5不产气的产气肠杆菌或其他大肠菌群细菌作阳性和阴性对照。6.3记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群试验阳性；不产气管为粪大肠菌群试验阴

6、性。6.4结果报告：按产气管数,查MPN表报告每克(毫升)样品中粪大肠菌群的MPN值。7大肠杆菌测定7.1将6.3条中的EC肉汤管继续培养24h,取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板,361培养242h。7.2 检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。7.3如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌落；如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上,361培养1824h。7.4将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。7.4.1色氨酸肉汤：在361培养242h后,加Kovacs氏试剂0.20.3mL,上层出现红色为

7、靛基质阳性反应。7.4.2 MR-VP培养基：在361培养482h。以无菌操作移取培养物1 mL至13mm100mm试管中,加5-萘酚乙醇溶液0.6mL,40氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验阳性。将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5 滴甲基红溶液。如培养物变红色,为甲基红试验阳性,若变黄色则为阴性反应。7.4.3 Koser氏枸椽酸盐肉汤：于361培养96h记录有无生长。7.4.4 LST肉汤：于361培养482h,观察试管中是否产气。7.4.5革兰氏染色：取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。7.4.6大肠杆

8、菌与非大肠杆菌生化鉴别如下：要查第锅拳株纽态雨仰精地很哪舟环热芹软遵抚靛 盖基 悔质王眠 M注R国盗 搜妨VP滨午忌 枸量椽酸茶盐 蚊 雹鉴定锁(型嫩别)可兆东蜻好跃五刑锋暑虎级秘进首勾境办根秧速润咱建近帜畜 岂徐 牢稿 袍棒遍怠典段型大住肠杆涉菌悠钻找嚼 丸扮讽捎 彻域 荡询 渠统洋哥非棍典型脂大肠诸杆菌述逝酸现歼矛街么扁欺罩愈糖盼涨躬巩妈例灿团颈寒忘靠昏断出餐技勇 得按胃康典纳型中刺间型馅怜和诉凯醋 波说 凉裤 伤摇 浑梁吓食非北典型此中间布型稠伶分海钞台的修汤姐洪脾皱贸延龄垄置岸沟湿鸽窃巾仅 苍苍叔唱渐回雕 尾物舒典泉型产蚊气肠绪杆菌听悄涉惑灰白 烦毁 胁只 催相 愈烫订赴非赴典型啦产气

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