《王镜岩生物化学第7章蛋白质的分离纯化和表征百》由会员分享，可在线阅读，更多相关《王镜岩生物化学第7章蛋白质的分离纯化和表征百（22页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、蛋白质含有酸/碱AA残基具有两性碱/酸越大pl越大蛋白质每縻尔钱展数碱r除草酸. 侮靡尔残皋数减件酸性沁A胃蛋白S|3780. 21. 0血消蛋白82991. 24. 7幽蛋白53881. 76. 7核糖孩酸幅7202. 99. 5 pl通常在6.0左右蛋白质的分子量一般在一万至一百万道尔顿之间 1道尔顿=1 XC12绝对质量/12s1.66x 10-27千克1、测定蛋白质中某一微量元素的含量2、假设蛋白质中仅含一个铁原子 最低相对分子质量二100* 55.8/铁的百分含量（二）SDS - PAGE测定相对分子质量蛋白质颗粒电泳时迁移率取决于:所带电荷分子量分子形状O+ IINa+ OSO(C
2、H2)nCH3oSodium dodecyl sulfate(SDS) SDS十二烷基磺酸钠极性亲水UUUUUUUUUUDnpctionofmijnatianMyosinP GalactofiidaseGlycogen phosphorylase bBuvim? serum alLumiiiOvalbuminCarbonic ;inhrd r;iseSovbenn trypsin inhibitorLyaozymeRelative migration（三）凝胶过滤法测定相对分子质量2凝凝胶法只适于球状蛋白分子测量(一)胶体才生质(colloidal system ) 胶体溶液的特点：分子直径在
3、1-100 nm内溶于水不易聚集沉淀大多数球状蛋白能形成稳定的亲水胶体溶液1 同种蛋白带同种电荷，相互排斥2.水膜弹性蛋白质溶液具有丁达尔效应.布朗 运动以及不能通过半透膜等性质y（二）蛋白质的沉淀Pr从胶体溶液中析出I可逆沉淀：-温和条件，改变溶液pH或Pr所带电荷Pr结构和性质没有变化-适当条件下可重新溶解非变性沉淀 pl沉淀法.盐析法和有机溶剂沉淀法等11 丁 p强烈沉淀条件破坏Pr胶体溶液稳定性也破坏Pr结构和性质 沉淀不能再重新溶解 变性沉淀如加热沉淀、强酸/碱沉淀.重金属盐和生物碱沉淀等加入中性盐脱去蛋白质的水化层, 盐析一般不引起变性Salting-out:溶 解 度Ionic
4、strength（NH4） 2SO4V- 2有机溶刑沉淀脱去水化层以及降低介电常数而增 加带电质点间的相互作用 3.等电点沉淀餐4. 重金属盐沉淀与带负电荷蛋白质结成不溶性盐5.生物磁试剂和某些酸类沉淀 与带正电荷蛋白质生成不溶性盐覚6.加热变性沉淀天然结构解体，疏水基外露,破坏水化层及带电状态总目标：增加制品堤度或比活1.前处理：因动/植物/细菌而异2粗分级分离：采用盐析/等电点沉淀/有 机溶剂分级分离等方法3细分级分离：釆用凝胶过滤.离子交换 层析、吸附层析以及亲和层析等4 结晶(-)根据分子大小不同的纯化方法透析和超过滤利用蛋白质分子不能透过半透膜将其 与小分子物质分开半透膜为玻璃纸或纤
5、维素材料超66蛋白质的超过滤2.密度梯度（区带）离心超高速離心的沉降係數:、Svedb己I吕 unit粒子衽密康梯康離心時的沈降垃率分子量分子密度分子組成分子形狀pclymor darVotln mixture ix 斤ddd to column containing： cro=is-linked polymer3poProtein molecules bepuruVcby Mis. hirwr moleculesmnr froaly. pprincin the tf*arlir*r frnrt.inTiA.（二）利用溶解度差别的纯化方法 1等电点沉淀调整溶液pH不同蛋白在各自pl处依次沉淀必
6、2.盐溶和盐析必3有机溶剂分级分离法降低介电常数争夺水化膜Diogcnai Electro PhoresiaDlagcxuii ElectroPt) orestoMirplostnpRfRDiagonal ElectroPhoresis| Expwe to performic acidR-SOV + O,S-RDiagonal ElectroPhoresisAn ampholyte solution is incorpcirntcd into a gelAfter staining, proteins are shown to be distributed along pH gradient
7、according to their pl values.A 5table pH gradientis established in thegel after applicationof an electric field.Protein solution u added and electric field is reappliedIsoelectric fociMinrI ;1Second diaeiiioulecrrnninMSDS pyl、0F、lu3%kr1 r)rctiO|：4iNTf it net ponitrvc： ehnrcOpoDilsvc eHcxrcC J(? nctx
8、t vw? ckinrfe* Lw rye net nejzitive chnryt*olymr b.ndjt yMh javuUv】cbcuHvd fuuctivnal troupe*Prrt* ntiMn* mow through thu column ul rntv dieir net clinr & mo I*ive nt cIbaiiuovv faster mid elut varlivt*9）利用蛋白质选择性吸附的性质夥磷石灰层析 疏水作用层析（五）利用对配体的特应矗学 亲和力的纯化方法Protei n of* interestUn-weintri protin are woohod through coluixin.Protein mixture Lw added to columncoitcxininz a polymer bo und ligand specific for protein of interest.?.Protein or int*rfxt is elvtod by lignnd solution C
