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1、半微量凯氏定氮法1.原理蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分 解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。2 试剂所有度剂均用不含氨的蒸馏水配制。(1) 硫酸铜(CuSO45H2O)；(2) 硫酸钾；(3) 硫酸；(4) 硼酸溶液(20g/L)；(5) 混合指示液：1份(1g/L)甲基红乙醇溶液与5份1g/L溴甲酚绿乙醇溶液临用时混 合。也可用2份(1g/L)甲基红乙醇溶液与1份1g/L次甲基蓝乙醇溶液，临用时混合。(6) 氢氧化钠溶液(400g/L);(7) 标
2、准滴定溶液：硫酸标准溶液c(1/2H2S04)=0.0500moL心或盐酸标准溶液 c(HCI)=0.0500moL/L。3. 仪器定氮蒸馏装置如图所示。4. 操作方法(2)按图3-5装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约三分之二处，加甲基红指示剂数滴(1)样品处理:精密称取0.02-2.00g固体样品或2.00-5.00g半固体样品或吸取10.00-20.00mL 液体样品(约相当于氮30-40mg)，移入干燥的100mL或500mL定氮瓶中，加入0.2g硫 酸铜，3g硫酸钾及20mL硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45斜于于小孔的 石棉网上，小心加热，待内容物全部碳化，泡沫完全停止后
3、，加强火力，并保持瓶内液体 微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h。取下放冷，小心加20mL水，放冷 后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度， 混匀备用。同时做试剂空白试验。及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸， 用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。1 一电炉；2水蒸气发生器(2L平底烧瓶)；3螺旋夹;4 一小玻杯及棒状玻塞；5 一反应室；6 一反应室外层；7橡皮管及螺旋夹；8 一冷凝管：9一蒸馏液接收瓶(3)向接收瓶内加入10mL 20g/L硼酸溶液及混合指示剂1-2滴，并使冷凝管下端插入液面下， 吸取10.0mL样品
4、消化稀释液，由小漏斗流入反应室，并以10mL水洗涤小烧杯使流入反应 室内，塞紧小玻杯的棒状玻塞，将10mL 400g/L氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞，使 其缓慢流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小烧杯中，以防漏气，夹紧螺旋夹7,开 始蒸馏，蒸气通入反应室，使氨通过冷凝管而入接收瓶内，蒸馏5min，移动接收瓶，使冷 凝管下端离开液面，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以硫 酸或盐酸标准溶液(0.05moL/L)滴定至灰色或蓝紫色为终点。同时准确吸取10mL试剂空 白消化液按(3)操作。5计算xFx1003-9)V - V X c X 0.0141210m x100
5、式中：X-样品中蛋白质的含量，g/100g(g/100mL);V1-样品消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积， mL;V2-试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积， mL;c-硫酸或盐酸标准溶液的浓度， moL/L;0.014-1.00mL 硫酸c(1/2H2S04)=1.000moL/L或盐酸c(HCI)=1.000moL/L标准溶液 中相当的氮的质量， g;m-样品的质量(或体积)，g或mL;F-氮换算为蛋白质的系数。一般食物为6.25；乳制品为 6.38；面粉为 5.70；玉米、 高梁为6.24；花生为5.46；米为 5.95；大豆及其制品为5.71；肉与肉制品为6.25；大麦、 小米、蒸麦、燕麦
6、、裸麦为 5.83；芝麻、向日葵为 5.30。6说明(1) 凯氏定氮法测定氮的含量，依据蛋白质中含氮的多少，换算为蛋白质的含量。(2) 消化过程中，加入硫酸钾可以提高反应温度，加入硫酸铜作为催化剂，提高反应 速度。(3) 蒸馏过程中，不能使系统漏气，放入碱液时，应小心、缓慢。(4) 食品中含氮量一般为15-17.6，根据不同食品含氮量略有差异，采用不同的换 算系数。以上换算系数是食品中含氮量为16的氮换算为蛋白质的系数。(5) 食品中还有非蛋白质物质含氮，故用此法测定蛋白质称为粗蛋白。(6) 蒸馏时，蒸汽发生要充足，均匀，加碱要够量，动作要快，防止氨损失。冷凝管出口应浸入吸收 液中，防止氨损失。(7) 我国规定含乳饮料中蛋白质 1.0。
