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1、实验一 药理学实验的基本技能一、实验动物的基本技能和实验技术基础。实验动物的标记大、小鼠和白色家兔的标记常用35%黄色苦味酸溶液涂于皮毛上标号。常用的方法：1号 -左前腿 2号 左腰部 3号 左后腿 号-头部 5号 -正中 6号 -尾根部7号 -右前腿 号 -右腰部 9号 -右后腿 10号-不标记2.实验动物的捉持（大、小鼠） ()小鼠的捉持用右手提起鼠尾,放在粗糙物(如鼠笼盖）上面，向后轻拉鼠尾；用左手拇指和食指捏住其两耳颈背部皮肤，将小鼠固定在掌中,使其腹部朝上，然后以无名指和小指夹住鼠尾或小鼠的左后肢。（2）大鼠的捉持捉持和固定方法基本同小鼠，无经验者可戴上防护手套，并应动作轻柔。用右手
2、捉住鼠尾,放在鼠笼盖上，向后轻拉鼠尾；左手掌面向鼠背，食指和中指压住鼠的头顶，拇指和无名指分别从鼠的两腋下插入，将鼠的两前肢卡住；或拽紧鼠后颈及后背皮肤即可.图 1 小白鼠捉持法3、实验动物的给药方法（大、小鼠）（1）小鼠的给药方法灌胃（ig)：将小鼠固定后,使颈部拉直，右手持装有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，压其头部,使口腔与食道成一直线,沿上腭壁向鼠口腔的后下方轻轻插入食道。如遇阻力，可将针头抽出再插，以免刺破食管或误入气管。一般给药量为。0。3ml/1g（体重）.图小白鼠灌胃法实验 图 小白鼠腹腔注射法皮下注射(或sc):常在背部皮下.轻轻捏起背部皮肤，将注射针头刺入皮下,稍稍摆动针
3、头，若容易摆动则表明针尖位于皮下。然后注入药液。一般给药量为0.1.2l1g（体重）。图 4 小白鼠皮下注射法腹腔注射（ip):左手固定动物,右手持注射器，从下腹部外侧，呈45度角刺入腹腔,进针约35m,一般给药量为0。03l/10g(体重）.肌内注射(im):多注射于后肢股部肌肉，一般每侧不超过0。1ml。尾静脉注射(i):将小鼠置于固定筒内，使尾部露在外面，用0%7的乙醇棉球擦尾部,或将鼠尾浸入459C温水中，待尾部左右侧静脉扩张后，左手拉尾，右手进针.一般给药量为01.2ml1g（2）大鼠的给药方法均同小鼠。一般情况下，灌胃剂量为12ml/00g,皮下注射、尾静脉注射1l/只，腹腔注射为
4、1。ml /只，肌内注射为。10。l/只。此外大鼠尚有舌下静脉给药的方法.图 家兔耳部血管分布 图 6 家兔耳静脉注射法4、实验动物给药量的计算（1）药物浓度的表示方法 溶液的质量（）百分浓度（)=- 0 溶液的体积(m) (2）实验动物给药剂量一般按mkg（或g/kg)计算。为了方便，大鼠和豚鼠可按每10g计算，小鼠可按每10g计算。给药剂量=药物浓度给药体积（3)给药容量的计算:从已知药的浓度和已知给药剂量算出相当于每1g体重应给药的毫升数（ml）.例:小鼠体重2g，腹腔注射盐酸吗啡10m/g，药物浓度为。1，应注射多少毫升？药物浓度：0.1=1g/100ml=00g100l=mg/ml给
5、药剂量：1mkg=10/kg小鼠体重：2g=0。022k1mlkg0.02kg=022m或换算成ml10g来计算较为方便：10ml/kg0。1ml/10。这样再计算其他小鼠的给药量就很方便。5、实验动物的处死方法（1)颈椎脱臼法 此法常用于小鼠.用左手拇指、食指或镊子用力压住小鼠的后头部，同时用右手抓住鼠尾用力向后上方牵拉,使之颈椎脱臼,鼠立即死亡。（2）空气栓塞法 此法常用于家兔的处死。用注射器将空气快速注入静脉,可使动物立即死亡。（3)击打法 适用于较小的动物,如家兔、大鼠和小鼠等。提起动物的尾部,用力敲击动物头部,或用要木锤打击头部，致使动物死亡。（4)断头法此法适用于蛙、蟾蜍、小鼠和大
6、鼠。用剪刀将动物头部剪断，由于脊髓娄离且大量出血，动物很快死亡.二、实验记录的内容和实验报告的写作1、 实验记录实验记录是将实验内容如实地记录下来,长期保存备用。其基本原则是真实、及时、准确、完整，实验过程中应认真做好实验记录。内容一般应包括:（1)时间、天气、温度；(2）实验标本：动物的种类、体重、标记和标号及如何分组等。(）实验药物：药物的来源、批号、剂型、浓度、剂量及给药途径。（4）实验进程、步骤和方法的详细记录。(5）观测指标的变化和原始的描记图纸.2、实验报告的写作实验报告要实事求事地反映实验的基本过程,并要对实际所得结果进行整理、计算、统计学处理，然后进行科学地分析讨论,进一步阐明
7、实验的目的和意义。一般包括以下内容:实验目的实验材料 包括仪器、药品和动物。要尽可能详细、具体、明确.实验方法 可简明扼要地叙述，但关键环节或步骤必须写清楚。实验结果 应根据实验获得的数据进行整理,并可对一个教学实验小组或全实验室的数据进行整理、归纳、分析和对比，尽量总结出图表。尤其有观察时效关系的，描出时效曲线,一目了然。数据须进行统计学处理，选择的统计学方法要恰如，检验效率要高。讨论和结论 讨论与结论是报告的核心,应包括对实验结果的分析、思考题的探讨、实验、实验方法及实验中出现异常现象的分析、认识、体会和建议等。实验二不同给药途径对药物作用的影响【目的和原理】观察给药途径不同，动物对药物反
8、应有何不同.【实验动物】小白鼠，体重1824g，雌雄兼用【实验器材和药品】小鼠笼、天平、注射器(1ml）、大烧杯、小鼠灌胃器、%硫酸镁、0。%戊巴比妥钠【实验步骤和观察项目】1。硫酸镁不同给药途径对药物作用的影响取体重相近的小白鼠2只,编号并称重。号小白鼠腹腔注射10%硫酸镁溶液03ml，号小白鼠经口灌胃硫酸镁6l。观察并比较两鼠有何不同现象发生，为什么?鼠号给药途径剂量（l只）呼吸肌张力大便号号。戊巴比妥钠不同给药途径对药物作用的影响取体重相近的小白鼠3只，编号并称重。观察小鼠正常活动情况及翻正反射，然后用0。%戊巴比妥钠，分别从不同途径(灌胃、皮下注射、腹腔注射）给药0.ml10，观察小鼠
9、反应，记录小白鼠腹腔注射。5戊巴比妥钠的时间、翻正反射消失及恢复时间,计算睡眠潜伏期和睡眠持续时间。鼠号给药途径剂量（ml/0g）睡眠潜伏期(min）睡眠时间（m)号2号3号【思考题】同一药物、同等剂量以不同途径给药将会出现哪些不同反应？实验三急性毒性（D50）的测定【目的】通过实验学习测定药物D50的方法、步骤及计算过程，观察受试药品一次给予动物后所产生的急性毒性反应和死亡情况。【原理】药物给药剂量与动物死亡率间呈正态分布，以对数剂量为横坐标、死亡率为纵坐标作图，可得到一对称S型曲线，其两端较平坦，中间较陡,说明两端处剂量稍有变化时死亡率的改变不易表现出来,在0%死亡率处斜率最大,该处剂量稍
10、有变动时,其死亡率变动最明显，即最灵敏，在技术上也最容易测得准确,所以人们常选用D50值作为反映药物的指标。若将死亡率换算成机率单位，则对数剂量与机率单位呈直线关系，用数学方法可拟合其回归方程式,可精确地计算D50及引起任何死亡率的剂量及相关数据。【器材和药品】注射器(1ml)、天平、小鼠笼、苦味酸;盐酸普鲁卡因。【动物】182健康小鼠50只(正式试验）,雌雄各半(雌鼠应无孕），实验前禁食1h,不禁水。【方法】 1预试验 目的是寻找引起0和100动物死亡的剂量范围,以便正式实验时确定各组剂量。一般是取小鼠912只，分4组，选择组距较大的一系列剂量腹腔注射给药,观察出现的症状并记录死亡数，找出引
11、起及100%死亡率,至少应找出引起20%80死亡率的剂量范围,以保证量效曲线跨越足够的范围。普鲁卡因小鼠腹腔注射（ip)引起0和00%动物死亡的剂量范围的参考值为：最小剂量（Dmin)11。3mgg,最大剂量（Dmax） 290mg/kg。 2剂量计算及药液配制 (1)剂量计算根据预试结果找出Dmax及Dn，设正式实验的剂量组数为,剂量公比为r，则各组剂量为Dmxrk，k为第几组，一般选用5组动物，r为060.5为宜。 例已知普鲁卡因n=12.mg/kg，Dmax=290mg/kg 当n=6时,r=0。84， 各组剂量为：1. 2 mg/g2. 90g/kg0。84= 243.6mg/kg3.
12、 90 mg/g0.84=0.6mg/kg4 290 m/kg843= 17。mg/kg5。 20 mg/kg0.844=1444/kg. 90 mg/g84= 2.mg/kg （2）药液配制药源充足时的配药方法最高浓度药液（母液)的配制 小鼠腹腔注射体积为0.2ml/g= 20ml/kg,每组药液量为4ml左右，为留有余地，各组动物所需药液体积定为6m。 求出所需母液体积（V）及母液所需药量（M）V各组动物所需药液体积 / (r)= / (10。84)=37.5m M= V Dmax/（20/k）=37。5(290/kg)/（20l/kg)=54375mg 各剂量组药液按下法稀释: 3.75
13、mg+生理盐水至375ml，混匀 第一组取6l 1。5m生理盐水ml，混匀 第二组取6ml 315ml+生理盐水6m，混匀第三组取6l 1。5ml+生理盐水6ml,混匀 第四组取6ml 3.5ml+生量盐水6ml,混匀 第五组取ml 1。5l生理盐水6m，混匀，为第六组药液 药源紧张时的配药法 各组所需母液的体积（ml）为：第一组 6 第二组 6r 第三组 62 第四组63 第五组 r4 第六组 6r5母液总体积(V）=6（1 r r2 r3+r4+r5)总药量（）=母液总体积Dax（20mlg)计算出、M后,取药量M，用生理盐水稀释至Vml，用移液管精密吸取各组所需的母液量，加生理盐水稀释至6ml,即为各
