《兽医寄生虫学实验技术》由会员分享，可在线阅读，更多相关《兽医寄生虫学实验技术（32页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、兽医寄生虫学实验技术实验一 蠕虫学粪便检查法（一）一、内容1. 直接涂片法；2. 饱和盐水漂浮法；3. 各种蠕虫卵的特征。二、参考资料 蠕虫学粪便检查是蠕虫病生前诊断的重要方法。因为大多数的寄生性蠕虫是寄生在家 畜、家禽的消化道及其相连的器官（如肝脏、胰脏），有的寄生在呼吸器官和生殖器官（家 禽），如后圆线虫、前殖吸虫。寄生在这些部位的寄生虫，它们的虫卵、幼虫或节片都随着 宿主的粪便排除体外，因此，通过粪便检查可以获得生前诊断。除蠕虫以外，还有一些原生 动物的寄生虫，如结肠小袋纤毛虫及球虫，它们的包囊或卵囊亦随着宿主的粪便排除体外， 依靠粪便检查也可以建立生前诊断。根据蠕虫学粪便检查的目的可分
2、为：（一）蠕虫虫体检查法： 是从粪便中检查虫体或节片，如莫尼茨绦虫，一般以肉眼 直接检查；（二）蠕虫虫卵检查法：是从粪便中检查虫卵，如大多数的吸虫、绦虫和线虫；（三）蠕虫幼虫检查法：是从粪便中检查幼虫，如牛、羊的网尾线虫等，随粪便排 出的不是虫卵而是幼虫。下面主要分述虫卵和幼虫检查法。1. 蠕虫虫卵检查法（之一）：（1）直接涂片法： 取一片洁净的载玻片，在玻片中央滴加1-2 滴 50甘油生理盐水，然后用镊子或牙签 挑取少量粪便，与甘油生理盐水混匀，并将粗粪渣推向一边，涂布均匀，作成涂片，涂片的 厚薄以放到书上隐约可见下面的字迹为宜，加上盖玻片，置显微镜下检查，检查时先在低倍 镜下顺序查找，如发
3、现虫卵，再换高倍镜仔细观察。如无甘油生理盐水时可以用常水代替， 加甘油可使标本清晰，易于观察，并可防止涂膜很快变干燥。但是检查原虫的滋养体，必须 以生理盐水进行稀释，不应加甘油，否则会影响其运动而妨碍观察。本法操作简单，能检查各种蠕虫卵，但检出率不高，特别是轻度感染时，往往得不到可 靠结果，因此，本法只能为辅助的诊断方法，并且每次检查要重复观察8-10 片，才能收到 确实的效果。（2）饱和盐水漂浮法： 本法基本原理是采用比重比虫卵大的溶液，使虫卵浮集于液体的表面，形成一层虫 卵液膜，然后蘸取此液膜，进行镜检。方法：先配制饱和盐水溶液，配制时先将水煮开，然后加入食盐搅拌，使之溶解，边 搅拌边加食
4、盐，直加至食盐不再溶解而生成沉淀为止（1000 毫升沸水中约加食盐380 克）， 再以双层纱布或棉花过滤至另一干净的容器内，待凉后即可使用。（溶液凉后如出现食盐 结晶，则说明该溶液是饱和的，合乎要求，其比重为 1.18，此溶液应保存于温度不低于 13C的情况下，才能保持较高的比重）。取粪便5- 10 克，置于100-200毫升的烧杯中，先加入少量饱和盐水，把粪便调匀， 然后加入约为粪便的 12 倍量的饱和盐水，并搅拌均匀，用纱布或40 目的铜丝筛过滤于另 一干净的烧杯内，滤液静置30-40 分钟，此时比饱和盐水比重轻的虫卵，大多浮于液体表 面，再用铂耳或直径0.5-1 厘米的铁丝圈蘸取此液膜，
5、并抖落在载玻片上，进行镜检，或 者将此滤液直接倒入试管内，补加饱和盐水使试管充满，加上载玻片（盖玻片应与液面完 全接触，不能留有气泡），静置30-40 分钟，取下盖玻片，贴在载玻片上进行镜检，可以 收到同样效果。本法检出率高，在实际工作中广泛应用，可以检查大多数的线虫卵和绦虫卵，为了提 高漂浮效果，可用其他饱和溶液代替饱和盐水。如在检查比重较大的后圆线虫时，可先将 猪粪便按沉淀法操作，取得沉渣后，在沉渣中加入饱和硫酸镁溶液，进行漂浮，收集虫卵。 常见虫卵及漂浮比重如下表：寄生虫卵比重漂浮液比重种类比重种类1000ml水中加入比重的试剂量（g）猪蛔虫卵1.145饱和盐水3801.1701.190
6、钩虫卵1.0851.090硫酸锌溶液3301.180毛圆线虫卵1.1151.130氯化钙溶液851.050猪后圆线虫卵1.20以上同上4401.250肝片吸虫卵1.20以上硫代硫酸钠溶液17501.371.39姜片吸虫卵1.20以上饱和硫酸镁9201.26华支睾吸虫卵1.20以上饱和硝酸钠10001.201.40双腔吸虫卵1.20以上2. 操作、观察注意点：（1）在操作中，粪便不能互相感染，已经使用过的工具，必须进行消毒，或另换工具， 才能检查第二个粪样，粪样更不能搞错，特别在大面积普查工作中，一定要做好登好编号， 每次检查都要有详细记录。（2）粪便要求新鲜，防止暴晒、腐败而失效。（3）镜检时
7、一定要详细观察，严格区别虫卵与非虫卵。 虫卵：都有一定的卵壳结构，且都有一定的形状，如圆形、椭圆形、三角形等，多数 都是两侧对称，内含有卵细胞或一个已发育的幼虫或毛蚴。非虫卵：在粪便中容易与虫卵混淆的杂物有各种植物细胞、花粉颗粒、脂肪球、气泡、 真菌孢子、螨类及其虫卵、纤毛虫等等。但这些物质，由于种类不同，其形状、大小、颜色 也各不相同。如各种植物细胞，有的呈螺旋形，有的呈双层环状物的，也有呈铺石状的，但 都有明显的细胞壁，与虫卵结构显然不同；各种花粉颗粒，往往都带有一定的颜色，易误认 为蛔虫卵，但花粉颗粒没有卵壳的结构，表面呈蜂窝状或锯齿状，仔细观察，可以区分。还 有脂肪和气泡之类，亦很像虫
8、卵，但脂肪球和气泡往往大小不一，无色，且折光性很强，周 围壁较厚，而内部是空虚的。不具有虫卵的一般结构。总之，粪渣中与虫卵混淆的杂物较多， 但只要掌握虫卵的结构和特征是可以辨认的，有时某物与虫卵分辨不清，也可用解剖针轻轻 推动盖玻片下的东西滚动，这样往往可以把虫卵和其他物体区别开来。3. 各种蠕虫的特征：（1）吸虫卵：多呈卵圆形或椭圆形，大小不一，卵壳有数层卵膜组成较坚实；大多数 吸虫卵其一端有一个卵盖（日本血吸虫卵、嗜眼吸虫卵除外），卵内含有许多卵黄细胞及一 个胚细胞，还含有一个已成形的毛蚴；颜色多为黄色，黄褐色，有的呈灰白色。（2）绦虫卵：因种类不同，形状差异很大，虫卵多数无色，少数为黄色
9、或黄褐色，在 高倍镜下可见到三对小钩状物。圆叶目绦虫卵壳脆弱，无卵盖，卵壳在虫卵排出时已破裂脱 落，常见的所谓“卵壳”实际上是胚膜，在带科绦虫胚膜的两层间呈辐射纹，虫卵圆形或不 正圆形，内含六钩蚴；裸头科绦虫卵呈圆形，方圆形或三角形，内有一个含六钩蚴的梨形器； 假叶目绦虫卵椭圆形，卵壳颇厚，一端常有卵盖，胚膜被有许多纤毛，内含一个钩球蚴。（3）线虫卵：一般呈椭圆形，大小不一，无色透明，有的呈灰白色，或褐色或黄褐色 多数虫卵两侧对称，卵可多半由最外层的蛋白质膜，中间几丁质膜和内层的卵黄膜组成，有 些线虫如圆形科和毛圆科的虫卵无蛋白质膜，有的卵壳平滑，有的凹凸不平或呈蜂窝状，虫 卵内含单个或多个卵
10、细胞或已发育的幼虫。（4）棘头虫卵：多呈椭圆形或长椭圆形，卵壳很厚，外膜上常呈点窝状或蜂窝状的构 造，卵内中央有一个长椭圆形的胚胎，胚胎的一端有六个小钩，颜色多呈棕黄色。三、作业1. 在显微镜下怎样识别虫卵与非虫卵？2. 任选绘一虫卵形态图。实验二 蠕虫学粪便检查法（二）一、内容1 沉淀法（1）自然沉淀法（2）离心沉淀法2 锦纶筛兜集卵法3 幼虫培养法4虫卵计数法（1）斯陶尔氏法（2）麦克马斯特氏法二、参考资料1 蠕虫虫卵检查法（之二）（1）沉淀法：采用普通清水处理被检粪便，使虫卵沉淀集中，便于检查。本法适用于 检查各种虫卵，而比重较大的虫卵，如吸虫卵，棘头虫卵等尤宜采用此法。 本法根据需要和
11、条件又可分为自然沉淀法和离心沉淀法。自然沉淀法取粪便约 510 克，放在干净的烧杯内，加水搅拌，充分混匀称悬浮液，然后用40 目铜丝筛过滤至另一干净量杯中，滤液静止1015 分钟后，将上清液倒掉，再加水沉淀， 再静止1015 分钟，倒掉上清液，如此反复多次，直至上清液澄清为止，把上清液倒掉， 取沉渣做成涂片镜检。离心沉淀法取粪便 12 克，放在干净的小烧杯中，约加十倍量的水，充分混匀成悬浮液，再 用 40 目钢丝筛过滤至另一干净的离心管中，放入离心机内，也可以用上法处理过的滤 液倒入离心管中，放入离心机内，以1500转/分的速度离心23 分钟，此时，因虫卵 比重大，经离心后沉于管底，然后倒去上
12、清液，取沉渣进行镜检。（2）锦纶筛兜集卵法：检查较大的虫卵时，虫卵直径再 60 微米以上，如片形吸虫、 姜片吸虫、同盘科吸虫、日本分体吸虫等的虫卵，可取上述经 40 目铜丝筛过滤的滤液 倒入 260 目的锦纶筛兜中过滤，反复用水冲洗，直到洗出液体清澈透明为止，而后挑取 兜中粪渣做抹片检查，可获得满意的结果。2幼虫培养法圆形目的线虫种类很多，其虫卵在形态和大小上都非常相似，镜检时很难区别，生前 诊断时为了区别这些线虫的种类，常将含虫卵的粪便加以培养，待其中虫卵发育位第三期幼 虫时，再行检查，根据第三期幼虫的形态进行鉴别，达到诊断的目的。最简单的方法是将待检的新鲜粪便塑成半球形，放在平皿中，并加少
13、许水，如粪便已很 稀，就不必加水，放在25 30C温箱中（夏天在室温内）培养，根据具体情况，每天加少 量水，使粪便保持一定的湿度，经710天，多数虫卵即可发育成第三期幼虫，并集中在皿 盖上的水滴中，将幼虫吸出置载玻片上，放显微镜下检查。或将培养的幼虫连同粪便一起用 漏斗幼虫分离法（贝尔曼法）分离，取试管底下的沉淀物进行镜检，观察有无活动的幼虫存 在。在搜集培养物进行幼虫分离的同时，还必须注意平皿壁周围的清理。因为有的第三期幼 虫活动性很强，常常会离开粪便跑到潮湿的平皿壁上，因此除了注意检查平皿内的粪便以外， 还须用水仔细冲洗平皿壁，将所得的液体和粪便一起倒入贝尔曼装置内，或单独用离心机分 离后
14、镜检。如果幼虫培养的目的不是为了诊断，而是为了科学研究，研究某种蠕虫或幼虫的生物学 特性，那就必须事先将同种的虫卵或幼虫搜集在一起，放在平皿内，平皿内预先放好培养基， 在25-30C温箱中进行培养，培养基可以用清水或生理盐水，但最好的培养基是无菌的粪便 或粪汁，尤以粪汁为好，因为粪汁培养虫卵或幼虫，可以直接将培养的虫卵或幼虫的平皿放 在显微镜下，观察其发育情况。粪便或粪汁无菌的方法是在100C下煮沸消毒2小时，然后 用棉花过滤，再接种虫卵或幼虫，这样再观察过程中就比较清晰，容易鉴别。3. 虫卵计数法：测定家畜每克粪便的虫卵数（E.P.G）本法主要用于生前判断某种消化道寄生虫的感染强度和某种药物
15、的驱虫效果。例如，在 治疗前1 克粪便含有1000个虫卵，治疗后则减少到100 个，那说明该药对某种寄生虫有一 定的驱虫效果。当然这仅仅使一个大约的推断，因为粪便中的虫卵数目是随着寄生虫本身的 年龄、雌虫的数目、是否其他寄生虫同时寄生以及家畜的年龄、体质、营养和气候条件的影 响等等因素的不同而有一定的差异。（ 1） 斯陶尔氏法（ Stolls method）用自行标记有56毫升、60 毫升两个刻度的小三角烧瓶或大试管，先注入56 毫升 1/10N 氢氧化钠溶液（即 0.4%氢氧化钠水溶液），再加入待检粪便至60 毫升处（即加入 4 克粪便），再加 10 个直径3 毫米的小玻璃珠，盖上橡皮塞，振荡使粪便完全破碎混匀， 然后很快用吸管吸取0.15毫升粪汁（内含粪便0.01克），滴于载玻片上，盖上20X40 毫米的长盖玻片，在显微镜下计数虫卵，在计数时要顺序自盖玻片的一端数至另一端， 每个视野不重复液也不漏掉，将所得的虫卵数乘以 100，即为 1 克粪便中含有的虫卵数。 为了获得正确的结果，须在每天的不同时间里检查三次，连续检查三天，然后取其平均 数，这样可以减少误差。本法适用于大部分蠕虫卵的计数。（ 2） 麦克马斯特氏法（ MeMasters method）此法需要特制的麦氏计数器（可以
