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1、SRDP实验报告范文一、实验目的测定酸模、香蒲、毛萇、青岛草、绿萝5种湿地植物在污水净化过程中根内酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和腺酶活力。二、实验方法1. 磷酸酶测定方法根中酸性磷酸酶的测定;根中碱性磷酸酶;水中酸性磷酸酶；水中碱性磷酸酶。2. 麻酶测定方法(1)(1)1)根中腺酶活性：奈氏试剂显色法;(2)水中服酶活性：同根中服酶活性测定方法，但酶液是直接取0.5mL的污水。三、实验材料及试剂1. 实验材料实验室条件下用自制污水培养的5种湿地植物(自移植至实验室新生岀的根系要达到一定量)；实验中使用的污水是自配污水，配方如下：水1L、淀粉0.067g、葡萄糖0.05g、蛋白M0.033g牛肉膏0.
2、017gNa2CO3?10H2O(无水0.02g)0.067g、NeHC03002g、Na3P040.017g.尿素0022g、(NH4)2SO40.028g;2. 实验试剂磷酸酶、服酶测定过程中需要试剂： 0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液 0.2mol?L-lpH5.8醋酸钠缓冲液称取醋酸钠16.406g,容量瓶定容至1L,用0.3mol/L的醋酸溶液调节pH二5.8佣pH计校正)。 3NNaOH溶液 0.05mol?L-lpH8.7TrisC盐酸缓冲液缓冲液称取12.114克Tris,容量瓶定容至1L,取50毫升0.1M三疑甲基氨基甲烷(Tris)溶液与10.3毫升0.1N盐酸混匀后，
3、加水稀释至100毫升，再用pH计校正。 奈氏试剂：称取7g碘化钾溶于10ml水中，将20g碘化汞溶于其中。在100ml容量瓶中配置氢氧化钾溶液，称取24.4g加入含有70ml水的容量瓶中，放置冷却。把配好的碘化钾和碘化汞溶液缓缓加入容量瓶，加入的同时要慢慢摇动，加水稀释至刻度，然后摇匀。将溶液盛放在棕色玻璃瓶中置暗处保存两天后再使用。 10%三氯乙酸 10%酒石酸钾钠3. 实验仪器高温消解器、紫外分光光度计、离心机、恒温水浴锅、pH计、研钵、高压灭菌锅、50mL具塞(磨口)刻度管。四、实验过程1. 系统设置取30个2L容量的大烧杯，洗净。将生长态势比较一致的5种植物从清水中取出，植物根部用15
4、%的双氧水灭菌处理10分钟后，用蒸憎水清洗干净，按照每组湿地植物湿重相等的原则，放入大烧杯。将烧杯分成5组，分别栽种香蒲、绿萝、青岛草、酸模、毛萇，每一组由两小组组成，栽种香蒲的两小组编号为X和X0,栽种绿萝的两小组编号为L和L0,栽种青岛草的两小组编号为Q和Q0,栽种酸模的两小组编号为S和S0,栽种毛萇的两小组编号为M和M0,每组中前者中加入250ml自配污水，后者作为对照加入等量的自来水。2. 测定方法2.1磷酸酶测定方法2.1.1根中酸性磷酸酶：酶液提取：称取植物根系材料O.lg,放入研钵，再向其中加入2ml磷酸缓冲液(PH7.8),小心研磨至匀浆，再将其全部吸入离心管中，在0C下120
5、0r/min转速的条件下,离心30min,上清液为待测液,取0.5ml。具体方法：取配置好的pH为5.8的0.2mol?L-2醋酸钠缓冲液70ml,以之为溶剂配成浓度为0.15g?L-l对硝基苯磷酸二钠(pNPP)酶反应液，加入0.5ml酶液后将其用黑纸包裹，置于25C下培养1小时。向其中加入lml3NNaOH溶液，以终止酶促反应，使用Q-1860S紫外可见分光光度计在405nm波长处进行比色测定。在单位时间内单位重量鲜根水解pNPP生成的pNP量来表示酶活性(|ig?h-l?g-1鲜根)。2.1.2根中碱性磷酸酶：测定方法与酸性磷酸酶的类似，唯一的区别是酶反应液是由Tris-HCI缓冲液(p
6、H=8.7)配制的。2.1.3水中酸性磷酸酶：取0.5ml污水作为水中酸性磷酸酶的酶液。具体方法同根中酸性磷酸酶。2.1.4水中碱性磷酸酶：取0.5ml污水作为水中碱性磷酸酶的酶液。具体方法同根中碱性磷酸酶。2.2K酶测定方法2.2.1根中服酶活性：奈氏试剂显色法。酶液提取：称取植物根系材料O.lg,放入研钵，再向其中加入lml磷酸缓冲液(PH7),小心研磨至匀浆，再将其全部吸入离心管中，在0C下1200r/min转速的条件下，离心30min,上清液为待测液，取0.5ml。具体方法：取适量的干净试管，并给试管编号，依次向其中加入2R1L0.3mol/L尿素-0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液(p
7、H7),然后将试管放入37C恒温水浴锅中，并预热5mine2号管作为空口对照，向其中加入0.5mL水，向其余试管分别加入0.5mL酶液，将所有试管混匀后在37C水浴锅中恒温水浴条件下反应5mine在反应结束后向各个试管加入1.5mL10%三氯乙酸使反应终止。取其中的ImL反应液，加入9mL蒸饰水稀释反应液，摇匀后先加入0.5mL10%酒石酸钾钠反应一会，再加入1.0mL奈氏试剂显色。在波长420nm时测定各管溶液的吸光度，1号管作对照。最后做出硫酸镀浓度标准曲线，据此方程计算酶活，测得钱浓度与吸光度关系拟合方程为OD420二0.006C+0.0082(R2=0.9991)。222水中服酶活性：
8、同根中腺酶活性测定方法，但酶液是直接取0.5mL的污水。五. 实验结果及分析同样每隔48小时测定湿地植物根内及水体中的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和服酶活力变化情况见图2图2-25。由图2可知，不同湿地植物根中碱性磷酸酶活性的变化趋势不同。同一种湿地植物的污水处理组和空口对照组中的碱性磷酸酶活性的变化趋势一致，且空口对照组中的该酶的活性高于污水处理组中的活性，两者之间的差距随时间增大。毛萇和绿萝的空口对照组及污水处理组的根中碱性磷酸酶活性变化趋势相似，均先剧烈下降后缓慢增多或保持较小幅度的变化。在香蒲、青岛草和酸模的空口对照组及污水处理组中该酶活性波动较小，香蒲和青岛草中的趋势是先增加后降低，酸模中
9、的趋势是随时间延长缓慢增加，在后期增幅较大。总体上5种植物根中碱性磷酸酶活性进行排序，绿萝中最高，香蒲次之，然后是青岛草，接着是毛萇，最后是酸模。图2-2可知，整体上5种植物根中關酶活性的变化趋势较一致，大体上呈增加的趋势，且在96小时至144小时之间根中腺酶活性增加显著。5种植物的空口对照组中的根中腺酶随时间延长呈递增趋势，与空白对照组相比，5种植物的污水处理组的根中服酶活性波动较大，毛萇、香蒲、青和酸模的污水处理组中的根中腺酶活性先升高后下降然后再增加，而绿萝的污水处理组中的根中腺酶活性先下降后增高再略有下降。总体上对5种植物根中服酶活性进行排序，绿萝中最高，香蒲次之，然后是酸模，接着是青
10、岛草，最后是毛萇。由图2-3可知，5种植物的水体中酸性磷酸酶活性没有统一的变化趋势，而每种植物的污水处理组和空白对照组中酸性磷酸酶的变化趋势基本一致。在毛萇、酸模和绿萝的空白对照组及污水处理组中，水体中酸性磷酸酶活性均呈先升高后下降的趋势;香蒲和青岛草的空白对照组及污水处理组中，除了香蒲的污水处理组中出现先下降再升高，水体中酸性磷酸酶活性均随时间延长在逐渐增大。由图2-4可知，5种植物的水体中碱性磷酸酶活性没有统一的变化趋势，而每种植物的污水处理组和空口对照组中变化趋势基本一致。毛萇和绿萝的污水处理组中，水体中碱性磷酸酶活性呈下降趋势;毛罠和绿萝的空口对照组和酸模、青岛草的污水处理组及空白对照组中，该酶活性均呈先上升后下降的趋势;香蒲的空口对照组和污水处理组中，该酶活性均呈上升趋势。由图2-6和2-7可知，总体上，除了酸模的空白对照组在后期出现下降，5种湿地植物的空口对照组和污水处理组中，水体中服酶活性均有上升的趋势，在后期有较大增幅。毛萇的污水处理组、香蒲的空口对照组及污水处理组、青岛草的空口对照组及污水处理组中，水体中服酶活性呈先下降后升高的趋势;毛萇的空口对照组中，酸模的污水处理组和绿萝的空白处理组及污水处理组中，该酶活性呈上升趋势;酸模的空白对照组中，该酶活性呈先上升后下降趋势。基木上，5种植物的污水处理组中的水体中服酶活性大于空口对照组中的。
