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1、河南新乡亚洲啤酒有限公司纯净水检验操作规程净含量测定：容量法3.1 仪器3.2 量筒3.3 玻璃铅笔 （或记号笔 ）3.4 分析步骤 将瓶装纯净水置于（20 0.5厂C水浴中恒温30 min。取出，擦干瓶外壁的水， 用玻璃铅笔对准饮料的液面划一条细线， 将水倒入量筒， 测量水的体积， 即为瓶 装饮料的净含量（以mL或L表示）。电导率的测定A l 方法提要电导率是距离 1cm 和截面积 1cm2 之两个电极间所测得电阻的倒数，由电导率仪直接 读数。A 2 仪器和试剂A 2 . 1 仪器A 2 . 1 . 1 电导率仪 （ 附配套电导电极 ） 。A 2 - 1 - 2 恒温水浴锅。A 2 . 1
2、- 3 1 0 0 mL 或 2 5 0 mL 烧杯。A 2 . 2 试剂0 . 0 1 0 0 m o l / L 氯化钾标准溶液 : 取少量氯化钾 （ 优级纯 ） ， 在1 1 0 C 烘箱内干燥 2 h ， 冷却后精确称取。 . 7 4 5 6 g , 溶于新煮沸放冷的重蒸馏水中 （ 电导率小于 1 P S / C M） ， 转移到 1 0 0 0 m L 容量瓶中， 并稀释至刻度。此溶液在 2 5 C时的电导率为14 1 1 . 8 3 p S / c m,溶液储存在具有玻璃塞的硬质玻璃瓶中。A 3 分析步骤 按电导率仪使用说明， 选好电极和测量条件， 并调校好电导率仪， 将电极用待测
3、溶 液洗涤 3 次后， 插入盛放待测溶液的烧杯 （ A 2 . 1 - 2 ） 中。选择适当量程， 读出表上读数 即可计算出待测溶 液的电导率值。注1 电极引线不要受潮， 否则将影响测量的准确度。2 盛放待测溶液的烧杯应用待测溶液清洗 3 次， 以避免离子污染 .A 4 精密度和准确度 同一实验室对电导率为 1 .3 6 W S / c m 的水样， 经 1 0 次测定， 其相对标准偏差为 1 。 %。A 5 电极常数的测定 取未知电极常数的电 极， 用氯化钾标准溶液 （ A 2 . 2 ） 洗涤 5 次后， 插人盛放氯化 钾标准溶液 （ A 2 . 2 ） 的烧杯中， 测量一定温度下的电导率
4、， 即可计算出电极的电极常数。电极常数=K / S” ，（ A I ）式中: K 一定温度下氯化钾标准溶液的电导率，可从 G B 6 6 8 2 附录 A 中查出。S 同一实验条件下， 测出的氯化钾标准溶液的电导。注 : 有的电导率仪出厂时已标明配套电极的电极常数，可直接进行电极常数的补偿校正。若未知电极的电极常数，则可用本法 A l i 定菌落总数测定6.1 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：6.1.1 恒温培养箱：36C 1C, 30CC。6.1.2 冰箱：2C5C。6.1.3 恒温水浴箱： 46C 1C。6.1.4 天平：感量 0.1 g 。6.1.5
5、均质器。6.1.6 振荡器。6.1.7 无菌吸管：1 mL（具有0.01 mL刻度）、10 mL（具有0.1 mL刻度）或微量 移液器及吸头。6.1.8 无菌锥形瓶：容量 250 mL、 500 mL。6.1.9 无菌培养皿：直径 90 mm。6.1.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。6.1.11 放大镜或 （和）菌落计数器。6.2 培养基和试剂6.2.1 平板计数琼脂培养基。6.2.2 磷酸盐缓冲液。6.2.3 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中，121C高压灭 菌 15min。6.2.4 1 mol/L氢氧化钠（NaOH）:称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸
6、馏水中。6.2.5 1 mol/L盐酸（HCl）:移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1000mL。6.2.6 菌落总数测试片和压板。6.3 检验程序 菌落总数的检验程序见下图。6.4 操作步骤641样品的稀释6.4.1.1 以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的 无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1: 10的样品 匀液。6.4.1.2 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1： 10样品匀液1mL，沿管壁缓慢 注于盛有9ml稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振 摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1：
7、100的样品匀液。6.4.1.3 按6.4.1.2操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次， 换用一次1mL无菌吸管或吸头。6.4.1.4 根据对样品污染状况的估计，选择 2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取 1mL样 品匀液加入两个无菌平皿内。同时分别取1mL稀释液加入两个无菌平皿作空白对 照。6.4.1.5 及时将15m20mL冷却至46C的平板计数琼脂培养基（可放置于46C 1C恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。6.4.2 培养6.4.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36C 1C培养48h2h。6.4
8、.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（4 mL），凝固后翻转平板，按6.4.2.1条件 进行培养。6.4.3 菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落 数量。菌落计数以菌落形成单位（colo ny-form ing un its,CFU） 表示。6.4.3.1 选取菌落数在30 CFU- 300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌 落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于 300的可记录为多不可计。 每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。6.4.3.2 其中一个平板有较大片状菌
9、落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌 落生长的平板作为该稀释度的菌落数； 若片状菌落不到平板的一半， 而其余一半 中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。6.4.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一 个菌落计数。6.5 结果的表述6.5.1 菌落总数的计算方法6.5.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板 菌落数的平均值， 再将平均值乘以相应稀释倍数， 作为每克 （或毫升）中菌落总数 结果。6.5.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时， 按下式计算：NC/（n 1 + 0.1 n2）d式
10、中： N 样品中菌落数；刀C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1 第一个适宜稀释度平板上的菌落数；n2 第二个适宜稀释度平板上的菌落数；d稀释因子（第一稀释度）。6.5.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300，则对稀释度最高的平板进 行计数，其他平板可记录为多不可计， 结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.5.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于 30，则应按稀释度最低的平均菌落 数乘以稀释倍数计算。6.5.1.5 若所有稀释度 （包括液体样品原液 ）平板均无菌落生长，则以小于 1 乘 以最低稀释倍数计算。6.5.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在 30300之间
11、，其中一部分小于30 或大于 300时，则以最接近 30 或 300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.5.2 菌落总数的报告6.5.2.1 菌落数在 100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字 报告。6.5.2.2 大于或等于 1 00时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前 两位数字，后面用 0 代替位数；也可用 10 的指数形式来表示，按“四舍五入” 原则修约后，采用两位有效数字。6.5.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。6.5.2.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。6.5.2.5 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/m
12、L为单位报告。7 大肠菌群计数7.1 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：7.1.1 恒温培养箱：36C 1C。7.1.2 冰箱：2C5C。7.1.3 恒温水浴箱： 46C 1C。7.1.4 天平：感量 0.1 g 。7.1.5 均质器。7.1.6 振荡器。7.1.7 无菌吸管：1 mL（具有0.01 mL刻度）、10 mL（具有0.1 mL刻度）或微量 移液器及吸头。7.1.8 无菌锥形瓶：容量500 mL。7.1.9 无菌培养皿：直径 90 mm。7.1.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。7.1.11 菌落计数器。7.2 培养基和试剂7.2.1 月桂基
13、硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤。7.2.2 煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤。7.2.3 结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）。7.2.4 磷酸盐缓冲液。7.2.5 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121C高压灭菌 15mi n。7.2.6 1mol/L氢氧化钠（NaOH）:称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中。7.2.7 1mol/L 盐酸（HCl）:移取浓盐酸90mL,用蒸馏水稀释至1000mL7.3 检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见下图。7.4 操作步骤7.4.1 样品的稀释7.4.1.1 液体样品，以以无菌吸管吸取 25 mL样品，置盛有225 mL磷酸盐缓
14、冲 液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制 成 1： 10 的样品匀液。741.2 样品匀液的pH值应在6.57.5之间，必要时分别用1mol/L氢氧化钠 （NaOH或 1mol/L 盐酸（HCI）调节。741.3 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1： 10样品匀液1mL，沿管壁缓慢 注入 9ml 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中 （注意吸管或吸头尖端不要触及 稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成 1： 100 的样品匀液。7.4.1.5 根据对样品污染状况的估计， 按上述操作， 依次制成 1 0倍递增系列稀 释样品匀液。
15、每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液 至样品接种完毕，全过程不得超过 15min。7.4.2 初发酵试验每个样品，选择 3 个适宜的连续稀释度的样品匀液 （液体样品可以选择原 液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如 接种量超过1mL则用双料LST肉汤），36CC培养24h2h,观察倒管内是 否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h 2h。记录在24h和48h内产气的LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。7.4.3 复发酵试验用接种环从所有48h 2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移 种于煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36C 1C培养48h2h，观察产气情况。 产气者，计为大肠菌群阳性管。7.4.4 大肠菌群最可能数（MPN）的报告根据大肠菌群阳性管数，检索 MPN表，报告每毫升样品中大肠菌群的 MPN 值。
