酶工程问答题

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1、酶工程习题集第_章绪论1、发展史：1903 年 Henri 中间络合物学说；1913 年 Leonor Michaelis 和 Maud Menten 米氏方程；Daniel E. Koshland提出了诱导契合学说。1926年，萨母纳（Sumner） 提出酶的本质是蛋白质的观点。1960年.雅各（Jacob）和莫若德（Monod）提 出操纵子学说，1982年，切克（Cech）等人发现四膜虫（Tetrahynena）细胞的 26s rRNA前体具有自我剪接功能（self-splicing）。核酶（Ribozyme,也称核糖核酸 酶，以区别于蛋白质酶）；1983年阿尔彻曼（Sidney. Alt

2、man）发现核糖核酸酶P （RNAase P）2、核酸类酶（ribozyme）:具有生物催化剂所有特性，是一类由RNA组成的酶。 底物有哪些？3、酶的新概念？分类？4、人工酶、模拟酶、化学修饰酶、克隆酶、突变酶、新酶、抗体酶第二章酶学基础1、酶促反应的特点？优缺点？2、按酶促反应性质将生物体所有的酶分为哪六大类？如何编号？3、终止一个酶促反应的方法有哪些？4、全酶的组成？按酶蛋白结构不同分类？5、别构酶、别构效应、配体6、活性部位（结合部位与催化部位），必需基团，活性中心的亲核性基团：酸碱 性基团：7、参与蛋白类酶活性中心频率最高的氨基酸7种？8、酶活力单位（U）；比活力；同族酶；丝氨酸蛋白酶

3、与巯基蛋白酶各有哪些？9、酶活性中心基团的检测方法有哪三种？10、酶的pH稳定性与温度稳定性如何测定？第三章酶的催化机制1、酶高效率催化的五种机制2、何谓邻近与定向效应？何谓构象变化效应？何谓共价催化？何谓酸碱催化？ 何谓微环境效应？如何理解？第四章酶的催化动力学1、绘制底物浓度对酶促反应速度影响的双曲线（标明各参数），并简述其影响。2、米-曼氏方程（Michaelis-Menten equation）；中间产物学说3、稳态的含义，中心内容。3、绘制酶反应过程中各物质浓度变化曲线图4、如何利用双倒数作图法(又称林-贝氏作图法)求K值与V 值测定5、通过酶促动力学方法鉴别一个抑制剂对酶的抑制是可

4、逆还是不可逆抑制作 用？6、从线性动力学模型表示式、动力学方程、米氏方程图、双倒数方程作图区别 竞争性抑制、非竞争性抑制作用和反竞争性抑制作用？7、竞争性抑制、非竞争性抑制作用和反竞争性抑制的特点是什么？8、各举一例说明何谓Ks型不可逆抑制剂和Kcat型不可逆抑制剂(自杀性底物)？9、酶活力、比活力、纯化倍数、得率概念，计算。例：下表是对虾几丁质酶的分离纯化方案，请把表格中未完成的空格填好。总蛋白 量(mg)总酶活量 (u)比活力(u/mg)纯化倍数得率(%)粗酶液5756.28987513.00171.551.00100.0%35%饱和硫酸胺3850.63876710.4075%饱和硫酸胺1

5、810.50489537.10几丁质亲和层析973.24286919.20SephadexG-100206.2589821.20DEAE32离子交换层析109.5548248.55第五章微生物发酵产酶1、与酶的生物合成有密切关系的基因有哪些？2、转录水平调控的3种模式是什么？3、何谓分解代谢物阻遏作用？其作用机理是什么？实质是什么？4、何谓酶生物合成的诱导作用？5、何谓酶生物合成的反馈阻遏作用？6、产酶促进剂有哪些？提高酶产量的措施有哪些？酶发酵生产中诱导物有哪三 类？各举一例。7、请根据酶生物合成的调节类型提出提高生物酶产量的策略。8、产酶细胞生长经历了哪四个阶段？9、四种酶生物合成的模式是

6、什么？图示加以区别，各有何特点？10、影响酶生物合成模式的主要因素是什么？酶工业生产上，为了提高酶产 率和缩短发酵周期，最理想的是何模式？其它合成类型的酶要如何适当调节 其生产工艺？11、写出Monod(莫诺德)的生长动力学模型方程。指出方程中各参数的含 义。12、写出宏观产酶动力学方程。指出方程中各参数的含义。13、根据不同的细胞产酶模式，分析产酶速率与细胞生长动力学的关系有何 不同？14、微生物培养发酵产酶中培养基的碳源选择应注意哪些问题?第六章动植物细胞培养产酶1、植物细胞培养的特点是什么？植物细胞培养产酶的工艺流程。2、动物细胞培养主要用于生产哪些功能蛋白？3、动物细胞的培养方式有哪些

7、？培养基的组成成分是什么？第七章酶的提取与分离纯化1、细胞破碎方法及其原理是什么？机械破碎法与物理破碎法有哪些具体的方 法？最常用的物理破碎法？化学破碎法常用的化学试剂有哪些？2、何谓酶的抽提？酶的主要提取方法有哪些？影响提取的主要因素有哪些？从 动物组织中提取胰岛素为何采用6.8%乙醇溶液并用草酸调溶液的pH为 2.53.0进行提取？酶在抽提时经常添加一些酶的保护剂，具体有哪些？3、沉淀分离方法有哪些？何谓分段盐析法与Ks分段盐析、。分段盐析？硫酸铵盐析法有何优、缺点？需 注意哪些问题？硫酸铵浓度的表示方法是什么？4、根据下表的硫酸铵分级试验结果，如何根据不同情况选择硫酸铵饱和度的范 围？表

8、硫酸铵分级试验批次百分饱和度范围/%酶沉淀/%蛋白质沉淀/%纯化倍数第一次04042540 6062222.860 8032321.0第二次04563245 7090382.4第三次048103548 6575253.04、有机溶剂沉淀法有哪些优点与缺点？5、何谓离心分离？按离心机转速的不同离心机可分为哪几类？按使用温度分为 哪几类？超速离心机的最大转速可达多少？最大离心力达多少？在超速离心 中，离心方法有哪些？密度梯度离心的梯度介质有哪些？使用最多的是什 么？等密度梯度离心的特点以及常用的介质是什么？密度梯度的制备主要采 用什么设备？6、在离心机及转子定下后，10000 r/min离心10

9、min,计算若用5000 r/min需离 心的时间多少？7、相对离心力RCF与转速n有何关系？8、何谓膜分离技术？主要包括哪些？何谓超滤？主要用途是什么？何谓反渗 透？有何特点与用途？9、何谓层析分离？最基本的特征是什么？按机理来分为哪几类？酶的分离纯化中，吸附层析的吸附剂常用有哪些？何谓分配层析与分配系数？何 谓离子交换层析？离子交换剂的特点？阴、阳离子交换树脂有何不同？如何正确 使用？离子交换纤维素主要有哪些？如何根据酶分子带电情况不同选择不同离 子交换剂？梯度洗脱有哪两种方法？举例说明离子交换剂如何转型？如何洗脱 离子交换柱上的阳离子B+？10、凝胶层析的基本原理是什么？何谓外水体积Vo

10、与峰洗脱体积Ve？葡聚 糖商品名是什么？有何特点？主要用途？三种型号的葡聚糖凝胶 SephadexG-50、G-75、G-100、G-150、G-200，其膨胀度从大到小的顺序？ 凝胶孔径从大到小的顺序？11、何谓亲和层析？有何特点？主要用途？有哪几种方法？何谓免疫亲和层 析？何谓配基？12、何谓电泳？聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理是什么？催化体系中化学聚合与 光聚合过程有何不同？不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳包含三个效应？13、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理？蛋白质分子的迁移速度主要取决于 什么？如何用来测定蛋白质分子量？14、为什么SDS-PAGE电泳会不受蛋白质所带电荷及分子性状的影响？15、凝胶

11、材料主要有哪些？选择凝胶主要是依据什么？适用于分子质量较大 的蛋白质和多糖的分离纯化的凝胶是什么？16、何谓膜分离技术？在酶的生产中有何应用？17、何谓等电聚焦电泳？主要用途？18、萃取的方法有哪些？何谓超临界萃取？何谓反胶束萃取与反胶束？19、浓缩方法有哪些？20、如何检查一种酶制剂是否达到了纯的制剂？试用所学过的知识加以论 述。21、有三种酶蛋白，其相对分子质量和等电点各不相同，试设计一个方案来 分离纯化这三种蛋白质。22、今欲生产糖化酶结品产品，试拟出合理的工艺步骤，并说明下游工程的 主要工艺条件。第八章酶分子修饰1、酶分子改造、模拟酶、酶的化学修饰、抗体酶的概念2、金属离子置换修饰的主

12、要作用与置换步骤是什么？3、何谓大分子结合修饰？常见的水溶性大分子修饰剂有哪些？4、PEG有何特点？常用的修饰剂是什么？ PEG化学修饰时则何物质为修饰剂?5、大分子结合修饰后酶性质主要发生哪些变化？何谓分子内交联修饰？6、以L-19 IVS的形成为例说明何谓核苷酸链剪切修饰？7、下列化合物是氨基酸哪些基团的修饰剂？DNFB； TNBS；炭二亚胺；DTT；巯基乙醇；TNM；碘乙酸；DPC； NBS； 丁二酮；戊二醛；已二胺；DTNB8、氨基酸置换修饰的作用有哪些？各举一例说明。9、何谓定点突变技术？其特点是什么？主要运用在哪方面？10、为什么要进行酶分子修饰，酶分子修饰都能解决哪些问题？第九章

13、固定化酶1、何谓固定化酶？固定化酶的制备原则是什么？2、比较吸附法、离子结合法、共价结合法、包埋法和交联法五种固定化酶方法 的优缺点？包埋法包括哪两种？最常用的包埋法是什么？共价结合法主要有哪 些？3、固定化对酶稳定性有哪些影响？4、固定化酶与游离酶比较有哪些优缺点？5、固定化植物细胞有哪些特点？6、固定化动物细胞有哪些特点？7、何谓转瓶与微载体？各有何特点？第十章酶的非水相催化1、非水相催化、微水介质（体系）、非水酶学、超临界介质、正胶束、反胶束、 最适水量、水活度、必需水、极性系数lgP、手性化合物、pH印记，2、非水介质中的生物催化反应特点有哪些？3、有机介质反应体系有哪些？4、简述水活

14、度对有机介质中酶催化的影响？5、简述有机溶剂极性系数lgP对有机介质中酶催化的影响？6、如何理解酶在有机介质中的催化特性？酶在有机介质中有哪些酶学特性发生 改变？7、黏合剂酚树脂、导电聚合物聚苯胺、甜味剂天苯肽是如何在非水相中催化合 成的？8、非水介质酶催化反应的优点有哪些？9、酶在非水介质中的结构性质发生怎样的变化？10、非水介质中酶催化反应是否在无水环境中进行，为什么？11、不同有机溶剂对酶的非水相催化有何影响？12、在有机溶剂介质中催化，为什么选用2忍lgP 5的有机溶剂较适宜？第一章酶反应器1、酶反应器概念2、酶反应器的类型有哪些（按结构、按操作方式不同）？3、比较各类型酶反应器的优缺点是什么？4、如何根据底物或产物的理化性质选择反应器？5、如何根据酶反应动力学性质来选择酶反应器？6、酶反应器在使用过程中应注意哪些方面问题？7、游离酶反应器有哪些？各有何优缺点？8、固定化酶反应器有哪些？各有何优缺点？