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1、动物蛋白质的胃蛋白酶消化率（体外消化）一、适用范围：本方法适用于动物性原料品质的判定。二、原理：用脱脂的样本在一个热的胃蛋白酶溶液中，稳定地不断搅拌约 16小时， 予以消化。测定它的蛋白质含量。这种方法不能用于植物蛋白质饲料原料或混合 饲 料，因为，它们所含复杂的碳水化合物是不能被胃蛋白酶消化的。 将溶解了的 蛋白质全部作为可消化的，并用其对粗蛋白质的百分率来表示。三、设备：1、恒温水浴振荡器：45 土2 C。2、测定粗蛋白质的全套设备。3、过滤装置。4、索氏脂肪浸提器。四、试剂：除测定粗蛋白质用的试剂外，尚需以下试剂：1、0.2%胃蛋白酶溶液的配制：先稀释6.1ml盐酸到1L。在使用前，现配
2、0.2% 胃蛋白酶溶液。2、所有胃蛋白酶应具有1：3000的活性。3、加热稀盐酸至42 45C,然后加入胃蛋白酶2g,轻轻地搅动，使其溶解（此时不要加热！）。即得在0.75mol/L盐酸中的0.2%胃蛋白酶溶液。五、测定步骤：1、准确称取1g脱脂试样，放入300ml碘量瓶内，加入经过预热（4245C） 的0.2%胃蛋白酶溶液150ml,盖好塞子，在45C下边搅拌边消化16小时，消化后用 滤纸过滤，然后用温水洗净滤纸上的不消化物。将不消化物连同滤纸转入消 化管中， 按照测定粗蛋白质含量的方法，测定不消化物中的粗蛋白质含量。2、另取1份脱脂分析试样，按照测定粗蛋白质含量的方法，测定其粗蛋白质 含量
3、。然后，根据消化的和不消化的粗蛋白质含量计算出试样的胃蛋白酶消化率。六、测定结果计算与分析：1、计算:A-B动物蛋白质胃蛋白酶消化率（% = X 100A式中：A试样中粗蛋白质的含量（。B 试样中的不消化物粗蛋白质的含量（。2、分析：合格的鱼粉，其粗蛋白质的胃蛋白酶消化率应不小于 85%；羽毛粉应在 75% 以上。植物油脂检验不皂化物测定法GB 5535-85本标准适用于商品植物油不皂化物的测定。油脂中不皂化物即油脂皂化时，与碱不起作用的，不溶于水的物质，包括留 醇，脂溶性维生素的色素等。一、仪器和用具：锥形瓶：250 ml冷凝管恒温水浴锅电炉分液漏斗：250 ml量筒：50 ml索氏抽提器电
4、热恒温烘箱烧杯、试剂瓶等天平：感量0.001 g二、试剂：1ON氢氧化钾乙醇溶液0. 5N氢氧化钾水溶液乙醇、乙醚中性乙醚乙醇混合液（2： 1）三、操作方法：称取混匀试样5g（ W）注入锥形瓶中，加1. ON KOH乙醇溶液50 ml，连接冷 凝管，在水浴锅上煮沸约30 min,煮到溶液清澈透明为止。用50 ml蒸馏水将 皂化 液转移入分液漏斗中，加入50 ml乙醚，趋温热时猛烈摇动1 min后，静止 分层。 将下层皂化液放入第二只分液漏斗中，每次用50 ml乙醚提取两次。合并乙醚提取 液，加水20 ml轻轻旋摇，待分层后，放出水层，每次再加水20 ml猛 烈振摇洗涤 两次。先后用0. 5N
5、KOH水溶液和水各20 ml，充分振摇洗涤一次，如此再洗涤两 次。 最后用水洗至加酚酞指示剂时不显红色为止。用索氏抽提器回收乙醚，将抽提瓶中的残留物在105C温度下烘1h，冷却称 重，再烘30 min，直至恒重为止。将儿重后的残留物溶于30 ml中性乙醚乙醇中， 用0. 02N氢氧化钾滴定至粉红色。四、结果计算：油脂中不皂化物含量按下列公式计算：100 （W1 0 28VN）不皂化物（）=.W式中：W1残留物重量，gW试样重量，gV滴定所消耗的氢氧化钾溶液体积，mlN-氢氧化钾溶液的当量浓度0.28 -每毫克当量的油酸重量，g双试验结果允许差不超过0.2%，求其平均数，即为测定结果。测定结果取
6、小 数 点后第一位。过氧化值的测定一、适用范围： 本方法适用于油脂及动物性原料的测定。二、原理： 油脂氧化过程中，产生的过氧化物，与碘化钾作用，生成游离碘；以硫 代 硫酸钠溶液滴定，计算含量。三、试剂：1、饱和碘化钾溶液：称取14g碘化钾，加10ml水溶解，必要时微热加速溶 解，冷却后贮于棕色瓶中。现用现配 。2、三氯甲烷冰乙酸混合液：量取 40ml 三氯甲烷，加 60ml 冰乙酸，混匀。3、0. 02mol/L硫代硫酸钠标准溶液：称取5g硫代硫酸钠(NaSO 5H0)(或23g无水硫代硫酸钠)，溶于1000ml水中，缓缓煮沸10分钟，冷却。放置两 周后过滤备用。4、1% 淀粉指示剂：称取可溶
7、性淀粉 0.5g ，加入少许水调成糊状倒入 50ml 沸水中调匀，煮沸，现用现配。四、测定步骤：精确称取23g混匀的样品，置于250ml碘量瓶中，加30ml三氯甲烷冰 乙酸 混合液，使样品完全溶解；加入 1.00ml 饱和碘化钾溶液。紧密塞好瓶塞， 并轻轻 振摇05min，然后在暗处放置5min,取出加75ml水，摇匀。立即用硫代硫酸钠标 准溶液滴定，至淡黄色时，加1 ml淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失为 终点。同时 作空白试验。五、测定结果的计算与分析：1 、计算：X= (V-V0)x NX 0.1269/m式中：X样品的过氧化值，%V样品消耗硫代硫酸钠溶液的体积，ml。 必一空白消耗硫代硫
8、酸钠溶液的体积， ml。 N硫代硫酸钠标准溶液的麾尔浓度，mol/L。0. 1269 1N硫代硫酸钠1ml相当于碘的克数。2、分析： 油脂新鲜，其过氧化值不应大于 0.15%。附： 0.02mol/L 硫代硫酸钠标准溶液的标定1 、标定：精确称取015g于120C烘3小时至恒重的基准重铬酸钾，置于碘量瓶中，溶 于 25ml 水，加 2g 碘化钾及 20ml 硫酸溶液( 20%)，摇匀，于暗处放置 10min。3ml淀粉指示液加150m水，用配制好的硫代硫酸钠溶液滴定。近终点时加（5g/L），继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色。同时作空白试验2、计算:m(V1 Vo) 0.04903式中：C 硫代硫
9、酸钠标准溶液之物质的量浓mol/L度,m重铬酸钾之质量，goV。一空白试验硫代硫酸钠标准溶液之用量，0. 04903与1. 00ml硫代硫酸钠标准溶液mlo【C=1.0mol/L 】当的以克表示的重铬酸钾的质量挥发性盐基氮的测定VBN)半微量定氮法）一、原理：挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白 质 分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。 此类物质具有挥发性，在碱性溶液中 蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。二、试剂：氧化镁混悬液（10 g/L）:称取1.0 g氧化镁，加100 ml水，振摇成混悬液。 硼酸吸收液（20 g/L）盐酸c （ HCI） =0.010 mo
10、l/L或硫酸c （ 1/2 H 2SQ）2=0. 010mol/L的标准滴 定溶液。甲基红一乙醇指示剂（2g/L）次甲基蓝指示剂（1g/L）临时将上述两种指示液等量混合为混合指示剂。三、仪器：半微量定氮器微量滴定管：最小分度0.01 ml四、分析步骤：试样处理：将试样除去脂肪、骨及腱后，绞碎搅匀，称取约 100 g,置于锥 形瓶中，加100 ml水，不时振摇，浸渍30 min后过滤，滤液帜置冰箱备用。蒸馏滴定：将盛有10 ml吸收液及5滴6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝 管的 下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取5.0 ml上述试样滤液于蒸 馏器反 应室内，加5 ml氧化镁混悬液（10
11、g/L），迅速盖塞，并加水以防漏气，通 入蒸 汽，进行蒸馏，蒸馏5 min即停止，吸收液用盐酸标准滴定溶液（0010 mol/L） 或硫酸标准滴定溶液滴定，终点至蓝紫色。同时做试剂空白试验。五、计算结果：试样中挥发性盐基氮的含量按式进行计算。7( V1 V2)c 14X=100m 5/100式中：X试样中挥发性盐基氮的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）V1测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升（ ml）V2试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升（ ml）c 盐酸或硫酸标准溶液的实际浓度，单位为摩尔每升（mol/L14与1. 00ml盐酸标准滴定溶液c （ HCI） =1
12、.000 mol/L或硫标准滴 定溶 液c （ 1/2 H2SO4） =1.000 mol/L相当的氮的质量，单位为毫克（mg）m 试样质量，单位为克（g）计算结果保留三们有效数字。六、精密度： 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值 的10%。三甲胺的测定一、原理： 试样中总的含氮量减去载体及水溶氮的含氮量，再除以系数 10.03 即为氯 化胆碱的含量。二、仪器与试剂： 同粗蛋白质的测定。三、测定步骤：1、精确称取o45g左右样品测其含氮量，即为总氮N总。总2、精确称取1g左右样品，放入带有定性滤纸的漏斗中，用蒸馏水冲洗 10 次左右，取出滤纸及残留物烘干，以凯氏定
13、氮法测定含氮量，即为载体含氮量Nio3、 精确称取3g左右样品，用蒸馏水溶解，定容100ml，放置0.5小时后， 取上清液5ml进行蒸馏，测其含氮量，即为水溶氮。四、测定结果的计算与分析：1、 计算:N -N -N总12氮化胆碱含量%=-10.0359三甲胺的含量142、 允许差:两次平行测定结果绝对值不大于 1%取其算术平均值为测定结果乌洛托品鉴别（六次甲基四胺）一、试剂和材料：氢氧化钾；硫酸溶液： 6+100；钠氏试剂；氨制硝酸银溶液：称取 1.0g 硝酸银，置于 100ml 烧杯中，加 20ml 水溶解， 在不断搅拌的同时滴定氨水溶液， 至棕色沉淀几乎全部溶解后， 过滤，滤液置于 棕 色
14、试剂瓶中保存；红色石蕊试纸：变色范围 pH4.5 8.0 （红蓝）;二、鉴别方法：水剂样品，称取约 0.5g 实验室样品，加 10ml 水，为试验溶液。粉剂样品，称取约 2g 实验室样品，加 20ml 水溶解，过滤，弃去滤渣，为试 验 溶液。在试验溶液中，加 10ml 硫酸溶液，于电炉上加热、煮沸，用沾有氨制硝酸 银 溶液或钠氏试剂的试纸检验产生的蒸汽， 观察试纸颜色， 若试纸颜色变黑， 则 加 入 2g 氢氧化钾，继续加热产生的蒸汽能使润湿的红色石蕊试纸变蓝，证明有 甲醛和 氨产生，判定样品中含有六次甲基四胺。油脂 TBA 值的测定方法一、原理： 油脂受到光、热、空气中氧的作用，发生酸败反应
15、，分解出醛、酸之类的化 合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与 TBA （硫代巴比妥酸）作用生成粉红 色化合物，在538nm波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而 推 导出油脂酸败的程度。二、试剂：TBA水溶液：准确称取TBA0288g溶于水中，并稀释至100ml （如TBA不易 溶 解，可加热至全溶澄清，然后稀释至100ml），相当于002M；三氯乙酸混合液：准确称取三氯乙酸（分析纯）75g及0IgEDTA用水溶 解，稀释至100ml；氯仿（分析纯）； 丙二醛标准溶液：称取 0315g 1,1, 3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至 1000ml，此溶液每ml相当于丙二醛100ug，置于冰箱内保存。准确吸取10ml，稀释 至100ml，此溶液每ml相当于丙二醛10ug，备用。三、操作步骤：标准曲线的绘制准确吸取每相
