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1、、电镜练习题及答案一、透射电镜标本取材的基本要求并简要说明。答：取材的基本要求以下：组织从生物活体取下此后， 假如不立刻进行实时固定办理， 就有可能出现缺 血缺氧后的细胞超微构造的改变，如细胞出现细胞器变性或溶解等现象，这些都可 造成电镜察看中的人为设想，直接影响察看结果剖析，甚至致使实验失败。别的， 因为办理不妥造成组织微生物污染，致使细胞的超微构造构造遭到损坏。所以，为了使细胞构造尽可能保持生前状态，取材成败是重点，取材成功的 重点在于操作者一定要注意掌握“快、小、冷、准”四个取材重点。(1) .快：就是指取材动作要快速，组织从活体取下后应在最短时间(争取在12 分钟以内)投入前固定液。关
2、于实验动物，最幸亏断血流、气绝以前就进行取材，免得缺血缺氧后使细胞代谢发生改变而损坏细胞的超微构造。自然，最好是 采纳灌输固定法。为了使前固定的成效更佳，组织块要充足和固定液混淆，应采 纳振荡固定10分钟以上，有条件的可采纳微波固定法固定。(2) .小：因为常用的固定剂浸透能力较弱，组织块假如太大，块的内部将不可以 获取优秀的固定。所以所取组织的体积要小，一般不超出1mm。为便于定向包埋， 可将组织修成大小约1mm X 1mm X2mm 长条形。(3) .冷：为了防备酶对自己细胞的酶解作用，取材操作最幸亏低温(5 C15 C) 环境下进行，这样能够降低酶的活性，防备细胞自溶。所采纳的固定剂以及
3、取 材器材要早先在冰箱(5 C)中寄存一段时间。(4) .准：就是取材部位要正确，这就要求取材者对所取的组织解剖部位要熟习， 一定取到与实验要求有关的部位，不一样实验组别间要取同样部位，如需要定向 包埋的标本，则要作好定向取材工作。别的，还要求操作动作柔和，娴熟，尽量防止牵拉、伤害与挤压对组织 造成的人为损害。二、什么是瑞利准则？电镜与光镜在原理上有何相像和不一样之处？答：1、光芒经过二个比较凑近的小孔时，这二个小孔的衍射图会重叠在一同。当一个衍射图的中央亮斑正好落在另一个衍射图的第一暗环中心时，这二个点 刚能够辩解。这就是显微镜辩解本事的瑞利准则。2、相像点：光学显微镜是利用玻璃制作的透镜对
4、光进行折射，将一物点发出 不一样角度的光芒最后汇聚成一个像点。电子显微镜是以电子束作为光源，利 用电磁透镜产生的电场或磁场折射电子束，并经过电子束轰击荧光屏激发荧 光而达到成像目的。不一样点：光镜的照明源是可见光，而电镜是用电子束照明。光镜的透镜用 玻璃制成，而电镜的透镜是轴对称的电场或磁场。三、简述透射电镜及扫描电镜样品制作流程答：1、透射电镜样品制作流程为取材一一漂洗(生理盐水)一一前固定(2.5%戊 二醛，4oC冰箱2小时以上)漂洗(0.1M磷酸缓冲液，3次，45分钟）后固定（1%锇酸1小时左右）漂洗（0.1M磷酸缓冲液，3次，45 分钟）块染（1%醋酸铀2小时）梯度脱水（50%、70%
5、、80%、90%丙 酮各15分钟，100%丙酮2次，各10分钟）一一浸透（丙酮：包埋液=1: 1， 37 oC烘箱2小时；丙酮：包埋液=1: 4，37oC烘箱留宿；纯包埋液45oC烘箱 2小时）包埋聚合（45oC烘箱3小时，65oC烘箱48小时）。2、扫描电镜样品制作流程为取材（做好样品察看面的标记）一一漂洗（生理盐 水或缓冲液）固定（2.5%戊二醛2小时以上）漂洗（0.1M磷酸缓冲液， 3次，45分钟）后固定（1%锇酸，2小时）脱水（50%、70%、80%、 90%、95%各15分钟，换醋酸异戊酯15分钟或叔丁醇15分钟）干燥（零界 点干燥或冷冻干燥）一一镀膜（真空镀膜仪或离子溅射仪）四、常
6、用的化学固定方法有哪些？答；常用的化学固定方法有1、浸泡固定法（也称组织块固定）：就是将组织块直接浸泡入固定液中间进行 固定。2、游离细胞固定法：合用于培育细胞、四周血、骨髓、胸腹水或其余溢出液。如为贴壁生长的培 育细胞，应先用橡皮刮子将细胞从培育管壁上轻轻刮下，或用酶消化，使细 胞离开管壁。3、原位固定法：就是在组织未取下以前，在组织器官本来的地点进行预固定的方法。原位固 定可分为点滴固定法和注射固定法两种。点滴固定法：就是将实验动物麻醉后裸露出所需的器官表面，当心地剥开包膜， 将预冷的固定液直接滴在组织的表面上，并保持固定液适合浓度不使挥发干燥。 注射固定法：就是将实验动物麻醉后，将固定液
7、用细注射针直接注射到所需 固定的组织中或空腔脏器的内部。4、灌输固定法就是利用血液循环的门路将固定液灌输到所需固定的组织中，其特色是灌输快 速、均匀，弊端是固定操作复杂、要求高。灌输固定法可分为浑身固定和局部固定两种。往常采纳的固定剂为2%4%戊 二醛溶液或许4%多聚甲醛溶液。五、一般透射电镜包含那些构造？请简要表达。答：透射式电子显微镜（简称透射电镜）由四部分构成，即电子光学系统 （即镜筒）、真空排气系统、电源系统和水冷系统。电子光学系统包含：照明系统、样品室、成像系统和察看记录系统。真空排气系统包含：机械泵、油扩散泵、真空管道、阀门及检测系统构成。电源系统包含：主要的电源供应包含高压电源、
8、电子枪灯丝电源、控制极电 源、透镜电源、真空系统电源等部分。水冷系统主要靠冷却水循环装置来达成或许直接用自来水降温。六、简述电镜在生命科学中的应用答:电镜在生命科学上的应用几乎包含全部的学科研究领域都已经用到或马 上用到电镜技术。比方动物或植物细胞的超微构造（包含细胞核、细胞质及 其细胞器等内容物、细胞间的连结等）的形态察看，经过对照察看，对动植 物形态在超微构造水平长进行分类、分型，以商讨遗传、变异及病理病因的 机理或体制，为生命科学的基础研究所不行或缺的研究手段。利用惯例电镜技术和特别电镜技术如免疫电镜技术、电镜酶细胞化学 技术、电镜原位杂交技术等能够进行细胞细胞超微构造及超微病理剖析，以
9、 及细胞内抗原、酶等的定位、定性甚至定量研究等。七、简述电镜的球差和畸变及其形成原由。答：1、球差：因为电子束光源经过透镜遇到偏转，经过样品，从物平面向 下发射，形成物点孔径角。从物点发出的射线，抵达下一级透镜又被齐集。假如透镜出缺点或孔径角太大，则凑近光轴的射线和远离光轴的射线，遇到 电磁场的作用就会不一样，这些射线在光轴上汇聚的地点不一样，结果远离 光轴的射线就会在像面上形成一个最小模糊圈。此时可有图象中央突出感。 球差是当前影响电镜分辨率的一个主要要素。2、畸变：因为离轴较远处的径向磁场的作使劲强，使放大倍数随物点离轴 的距离而变化，从而使图象发生改变而产生的。畸变常有的有枕形畸变、桶
10、形畸变和S形畸变等。八、简述电磁透镜及其聚焦原理答：因为轴对称曲折磁场对电子束有聚焦作用，因此能够获取电子光学像。我 们称这类拥有轴对称曲折磁场装置构成的电子透镜为电磁透镜（electron magnetic lenses ）。因为电磁透镜磁场非均匀散布，物、像点在磁场以外， 电子在磁场中既遇到轴向重量的作用，又遇到径向重量的作用，使平行于轴进 入磁场的电子束可获取聚焦。九、什么是反差？简述电镜荧光图像反差形成的原由。答：1、人的眼睛在划分物体时，主要依据物体不一样部位或物体之间的光强 度与波长的差异，这些差异构成了物体的反衬度，又称为“反差”。电镜与光 镜同样也存在反差现象。2、因为电镜标本
11、上的不一样部位的物质构造不一样，经过电子染色后，其疏 密度也不一样，它们散射电子的能力也各不同样，散射电子能力强的地方，展现 为暗像；相反，散射能力衰的地方，展现为亮像。所以，在荧光屏上所看到的 是由暗像与亮像构成的拥有必定反差的荧光图像。十、游离细胞取材方法有哪些？并简述其办理方法。答：血浆凝聚法：将抗凝全血离心分层（2000转/每分钟，10 20分钟），用毛细吸管沿着管壁轻轻的将上清夜汲取（不要损坏白细胞层），接着用吸管汲取 固定液，并沿着管壁将2.5%戊二醛固定液慢慢地加入进行固定，而后把它放在4C 冰箱内保留。血浆（血清）混淆法：如为细菌、病毒、零落细胞、培育细胞则先将它们制成悬液搁置
12、于离心管内（最好是玻璃的），离心成团（10003000转/分钟，10分钟， 下同），去上清液后加入2.5%戊二醛固定10分钟左右，离心，再弃去剩余的固定液，而后和少量抗凝血浆或血清混淆均匀，离心成团，去上清液（留少量），用 吸管汲取2.5%戊二醛固定液沿着离心管壁迟缓滴入，尽量防止团块分别，静 置于4 C冰箱内保留备用。十一、简述超薄切片流程并简要说明。答：超薄切片流程包含以下几个步骤：1、切片前的准备：铜网冲洗（用丙酮和乙醇浸洗）2、支持膜制备：常用Formvar膜（用聚乙烯醇缩甲醛和氯仿配置，浓度为0.5% ）3、玻璃刀制备：专用制刀体制作。4、半薄切片光镜定位（主要确立超薄切片的地点）。
13、5、修块（表面修成梯形或长方形）。6、超薄切片：专用超薄切片机切片，厚度在 50 100 nm之间较为适合。7、捞片：将超薄切片捞在载网上。8、染色：铅-铀两重染色法，如已有过块染，则只要铅染色 30分钟即可。十二、简述负染技术及其应用。答：负染技术是利用重金属盐（常用磷钨酸盐或醋酸铀溶液）堆积到样品四周，样品 四周散射电子的能力就较强，因此表现为暗区；样品自己散射电子的能力较弱，则 表现为亮区，这样便能把样品的外形与表面构造清楚地烘托出来。是察看细小颗粒 状生物资料的外面形状常用的染色方法。主要应用于病毒、支原体、细菌等微生物 外面形态的察看以及纳米级生物资料的形态察看。十三、简述白腊块做超
14、薄切片的样品制作流程答、白腊块做超薄切片的样品制作流程以下：1、取材：从白腊块上相应部位切下约 1mm3的小块。2、 溶蜡：将取下的标本放在一张滤纸上，40 C烘箱内烘1小时，而后转放入二甲苯溶液中40 C烘箱内持续浸泡8 12h。3、水化：纯丙酮30分钟、90%、80%、70%丙酮各15分钟。4、漂洗：用缓冲液漂洗（0.1M磷酸缓冲液PBS）3次，每次15分钟。5、固定：2.5%戊二醛固定2小时，PBS漂洗3次，尔后1%锇酸后固定1 2小时。6、漂洗、块染、脱水、浸泡、包埋聚合同惯例透射电镜标本制作方法。二、选择题及答案1、人眼的均匀分辨率为（B）U mu m2、电子枪产生的电子是（A ）A
15、入射电子B透射电子C弹性散射电子D二次电子E俄歇电子3、用来显示组织和细胞的内部超微构造像的电子为（ B）A入射电子B 透射电子C弹性散射电子D二次电子E反射电子4、下边哪项不属于透射电镜样品制备技术（ A）A镀膜B负染技术 C电镜细胞化学技术D超薄切片技术 E 半薄切片技术5、下边哪项不属于扫描电镜样品制备技术（ B）A表面干燥法B浸透包埋C冷冻复型D冷冻切断法E组织导电法6、下边哪一种电镜能够在察看构造的同时，对组织细胞内的元素成分进行剖析（C）A透射电镜B扫描电镜C剖析电镜D超高压透射电镜 E原子力显微镜7、察看组织细胞内部超微构造应采纳哪一种电镜（B）A原子力显微镜B透射电镜C扫描电镜D磁力显微镜E侧向力显微镜8、下边哪项不是超高压电子显微镜的长处（E）A可用于察看厚切片B能够提升分辨率C可提升图像质量D可察看复杂的构造E减少辐射损害范围9、下边对扫描电镜的描绘错误的选项是（B）A利用反射电子和二次电子成像B用于察看组织细胞表面容貌C样品室大，可用于察看块状样品D景深
