药敏试验方法及药敏试纸的选择

2、OX)青霉素G (P)头孑刨坐林(K-B 法：1从孵育了 16-24小时的琼脂平板上(血平板)，挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。2在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。3用棉拭子在无菌的 M-H培养基外表化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60 度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。4将确定好的药敏纸片分贴到平板外表。每个纸片都应压一下，以保证与平板外表完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。5贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球

3、菌属放入3%-5%的CO2烛缸。6孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与 NCCLS手册比拟，作出结果判断。说明：细菌药敏结果的判断以 NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否那么将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单抱菌和不动杆菌外的假单抱菌属不用 K-B法.肺炎链球菌胶乳凝集测定法1在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。2从冰箱取出鉴定试剂 (Slidex pneumo-kit)于室温。3在其中一滴生理盐水上滴加 R1试剂，在另外一滴上滴加 R2试剂，用搅拌棒混匀。4轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如 R

4、1和R2均未出现凝集为阴性。注：R3为阳性对照。药敏纸片的选择1、革兰阴性杆菌肠杆菌科头嚷脂CTX 头抱喋林CZ头抱他定CAZ氨节西林AM 哌拉西林PIP阿米卡星AN头抱嚷吩CF环丙沙星CIP 头抱吠辛CXM庆大霉素GM 头嚷脂/棒酸CTX/CA 头抱他定/克拉维酸CAZ/CA 短节青霉素CB 奥格门丁 AMX/CA 哌拉西林/三哩巴坦PIP/TZ 亚安培南头抱匹脂FEP头抱克罗CEC 2、铜绿假单抱菌/不动杆菌妥布霉素TM阿米卡星AN安曲南AZT头抱哌酮CFP 哌拉西林PIP头抱匹脂头嚷脂CTX 环丙沙星CIP头抱他定CAZ左旋氧氟沙星OFL 亚安培南哌拉西林/三哩巴坦3、金黄色葡萄球菌苯

5、哩西林OX青霉素G P头抱哩林CZ阿米卡星AN红霉素E头嚷脂CTX 环丙沙星CIP万古霉素奥格门丁 AMX/CA 哌拉西林/三哩巴坦头抱嚷吩CF4、肠球菌氨节西林AM万古霉素环丙沙星CIP庆大霉素GM红霉素E氧氟沙星OFL5、除肺炎链球菌外链球菌氨节西林AM 头嚷脂CTX万古霉素红霉素E 氧氟沙星OFL 克林霉素CM肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌和大肠杆菌ESBLs的检测MH培养基上贴头抱他定，头抱他定 /克拉维酸，头孑也嚷脂/棒酸，安曲南。如头抱他定的抑菌圈 22mm，安曲南27mm ,头孑也嚷脂27mm，意味可能有 ESBLS 产生。如头抱他定/克拉维酸与头抱他定，头抱嚷脂/棒酸与头抱嚷己的

6、差值 5mm,贝U确证ESBLS产生。耐药机制。一代头抱对普通变形杆菌、枸椽酸杆菌、肠球菌、假单抱菌属、沙雷氏菌属、拟杆菌属无效。第二代头抱对假单抱菌属、不动杆菌属、沙雷氏菌属、肠球菌无效；肠球菌对头抱类天然耐药。氨基糖此类抗生素阿米卡星与庆大霉素不完全交叉耐药。红霉素类、四环素类等抗生素内部有相互交叉耐药。金黄色葡萄球菌耐万古霉素、无乳链球菌耐青霉素和氨苯青霉素、无乳链球菌和D群链球菌耐万古霉素和替拉考宁为不可能的表型。洋葱伯克霍德菌对氨基糖忒类、亚安培南天然耐药。除表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌夕卜，替拉考宁耐药的凝固酶阴性的葡萄球菌不常见。金黄色葡萄球菌对复方新诺明耐药为罕见表型。氨节青霉

7、素对非发酵类不宜应用。对于葡萄球菌，苯哩西林耐药，青霉素敏感是不可能的。NCCLS关于细菌药敏实验的说明总评论：1、头抱嚷吩可以代表头抱嚷吩、头抱匹林、头抱拉定、头抱氨节、头抱克洛、和头抱羟氨节。但是，头抱喋林、头抱吠辛、头抱泊脂、头抱丙烯应单独测试，因为某些对这些药物敏感的菌株对头抱嚷吩是耐药的。2、利福平不能单独用于化疗。肠杆菌科1对于沙门菌属和志贺菌属只有氨节西林、喳诺酮、和甲氧节嚏/磺胺甲恶哩可用于常规试验与报告。初此之外，对于沙门菌属和志贺菌属的肠道外别离株，应测试并报告氯霉素和一种三代头抱菌素。2、克雷伯菌属和大肠艾希菌的产ESBLS株对青霉素、头抱菌素类或安曲南临床治疗可显耐

8、药性，尽管在体外药敏试验对其中某些抗生素敏感。对于所有产ESBLs株，应报告为耐所有青霉素类、头抱菌素及安曲南。3、随着3代头抱菌素的治疗，肠杆菌属、枸椽酸菌属和沙雷菌属可开展其耐药性。最易敏感的菌株在开始治疗 3-4天就可变为耐药，因此要反复测试这些菌株。葡萄球菌1、青霉素敏感的葡萄球菌对FDA批准的用于葡萄球菌感染的其他青霉素类、头抱菌素和碳青烯类也是敏感的。青霉素耐药而苯哩西林敏感的菌株对3内酰胺酶不稳定的青霉素是耐药的，但对其他 3-内酰胺酶稳定的青霉素、3内酰胺酶抑制剂复合药、相关的头抱类和卡巴陪南是敏感的。苯哩西林耐药的葡萄球菌对现在可用的所有 &内酰胺类抗生素是耐药

9、的。因此仅测试青霉素和苯哩西林就可以推知一大批&内酰胺类抗牛素的敏感性与耐药性，不必常规测试其他青霉素类、3-内酰胺类抑制剂复合药、头抱类和卡巴陪南类。2、绝大多数的MRS对多种抗生素耐药。包括份内酰胺类、氨基糖忒类、大环内酯类、克林霉素和四环素。观察到多重耐药应该是对甲氧西林可能耐药的线索。3、长期应用喳诺酮类治疗的过程中葡萄球菌可开展其耐药性,因此应重复测试耐药性。肠球菌1、对于肠球菌属，头抱菌素、氨基糖此类除了筛选高水平耐药性、克林霉素和甲氧节嚏/磺胺甲恶喋在体外可能有活性，但临床无效，因此不能报告细菌对这些药物敏感。2、青霉素敏感性可以用于不产6-内酰胺酶的肠球菌对氨节

10、西林、阿莫西林、酰基氨节西林、氨节西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林以及哌拉西林 /三哩巴坦的敏感性3、氨节西林是氨节西林和阿莫西林类的代表药。氨节西林的结果可用来判断不产3- 内酰胺酶的肠球菌对阿莫西林/克拉维酸和氨节西林/舒巴坦的敏感性。4、青霉素的结果可预测不产份内酰胺酶的肠球菌对氨节西林、阿莫西林、氨节西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/三哩巴坦的敏感性。5、对于血和脑脊液别离株需用头抱硝嚷吩3-内酰胺酶试验,阳性提示对青霉素耐药，同时对酰胺基、短基和脉基青霉素耐药。细菌鉴别要点1、革兰阳性球菌所有革兰阳性球菌第一步为触酶试验。通常触酶阳性为葡萄球菌和微球菌

11、,阴性为链球菌科。但不排除例外，气球菌为弱阳性。粪肠球菌偶有阳性。操作触酶试验应尽量防止用伯金取菌环针在H2O2上涂菌，而应先涂菌，在滴H2O2，步骤不能颠倒。因为伯金可以和H2O2产生假阳性反响。H2O2必须新鲜，假设放置过久或暴露于光线下容易分解，必须保存于4C冰箱。实验所用菌须大量，不可挑到琼脂，会产生假阳性。对触酶阳性的革兰阳性球菌，应继续做玻片法血浆凝固酶试验，此为检出葡萄球菌，如阳性一般为金黄色葡萄球菌；如阴性应做试管法凝固酶实验确证，玻片法仅为筛选实验。血浆凝固酶实验用血浆须用兔或猪血浆，新鲜血浆不稳定，可能发生自我凝集或形成颗粒产生浑浊或产生沉淀而导致判度错误；不可使用人血浆

12、，其含有抑制物质回干扰实验结果。触酶阴性为链球菌科，根据菌落溶血进行下一步鉴定。a溶血：草绿色链球菌；肺炎链球菌:肠球菌b溶血：A群链球菌；B群链球菌，局部 D群链球菌肠球菌也有不溶血菌落，不能根据溶血判断肠球菌。链球菌主要实验：胆汁七叶背，七叶昔，菊糖，CAMP ,杆菌肽，高盐，奥朴托辛，胆盐溶解。肠球菌为致病菌，且肠球菌与非肠球菌耐药机制不同，应进行鉴别，肠球菌分为粪肠球菌和屎肠球菌；非肠球菌分为牛链球菌和马链球菌。肠球菌对青霉素耐药，非肠球菌对青霉素敏感。肠球菌的药敏注意高耐氨基糖比的细菌，如高耐氨基糖比那么意味氨基糖比与b内酰胺类药物合用无协同作用。肺炎链球菌与草绿色链球菌鉴别:

13、肺炎链球菌奥朴托辛、菊糖、胆盐溶解实验皆为阳性。但这3个实验都非特异，需联合应用方为最正确。肺炎链球菌的青霉素药敏实验应注意,当青霉素K-B法的抑菌圈直径大于或等于19mm时为敏感，当小于 19mm时不能确定是否中敏或耐药，应做 MIC稀释确证。2、革兰阴性杆菌包括肠杆菌科、非发酵菌和弧菌科。第一步实验为氧化酶实验。氧化酶阴性为肠杆菌科；阳性为非发酵菌和弧菌科。肠杆菌科包括大肠杆菌、变形杆菌、普罗菲登斯菌及摩根菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、耶尔森菌属。非发酵菌包括铜绿假单抱菌、黄单抱菌、不动杆菌等。氧化酶实验考前须知：需用铜绿假单抱菌做阳性对照。60秒内判读结果有效，而以10秒内最正确。不要用含微量铁的取菌环或针，可用棉棒替代。革兰阴性杆菌的鉴定以 API系列为国标，其他生化管仅为常规鉴定。原文 :/awardbio /article.as .pname=%c9%fa%ce%ef%bf%ec%b3%b5链球房群宙染关系图-察言医疗文库Vvwvv.chinesebaojian 相关度分析数据：SS 16.52者雷素. 13.48葡萄球菌18.24 头I 19.69球菌 14.93内酷翩I14.41链球苗16.12耐药. 12.42肺炎族球菌 15.33肠杆菌科 15.99内鞍类

展开阅读全文